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1、3生物因素对细菌的影响实验报告 课程名称： 医学微生物学 指导老师：_成绩：_ 实验名称： 生物因素对细菌的影响 实验类型：_同组学生姓名：_ _ _ 一、实验目的 1. 熟悉生物因素对细菌的作用 2. 掌握葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌在血平板上的培养特性 3. 熟悉血浆凝固酶试验 4. 了解脓汁标本中病原性球菌的分离与鉴定方法 二、实验材料 普通琼脂平板培养基、大肠杆菌培养物、金黄色葡萄球菌培养物、分别含各种抗生素的直径0.6cm的圆形纸片、尖头镊子、无菌毛细吸管、接种环、酒精灯、培养物 装订线三、操作方法 1. 学生实验 (1) 抗生素的抗菌试验(4人一组) 1) 菌株：金黄色葡萄球菌、表
2、皮葡萄球菌、大肠杆菌1号、2号 2) 以灭菌接种环挑取菌液，在培养基表面作密集划线接种 3) 将镊子火焰灭菌，待冷后再取各药物纸片，分别牢贴于种有细菌的平板培养基表面相应位置，每次贴片后镊子均应经火焰烧灼灭菌。每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm，并分别作好标记。 4) 置37培养1824小时，观察各种抗生素的抑菌情况。 (2) 葡萄球菌血浆凝固酶试验 玻片法： 1) 取载玻片一张，用蜡笔分成三等份。三格均加一滴生理盐水。 2) 于第一、二格内滴加入兔血浆各1滴，于第三格内滴加生理盐水1滴。 3) 取金黄色葡萄球菌斜面培养物少许，分别混悬于第三格及第一格内，取白色葡萄球
3、菌混悬于第二格内，分别研磨混匀。静置10分钟。 2. 示教 (1) 观察病原性球菌形态与染色性 链球菌、脑膜炎双球菌、淋球菌 (2) 观察病原性球菌培养特性 四、实验结果 1. 抗生素的抗菌试验 表1 抗生素对细菌的影响 抗生素 青霉素 链霉素 庆大霉素 氯霉素 大肠埃希菌 抑菌圈直径(cm) 敏感度 0，2.0 1.3，1.9 2.4，2.0 2.4，1.6 不敏感 高度敏感 高度敏感 金黄色葡萄球菌 抑菌圈直径(cm) 2.5，3.0 3.0，2.2 3.0，2.3 敏感度 高度敏感 高度敏感 高度敏感 高度敏感 中高度敏感 2.2，2.0 2. 葡萄球菌血浆凝固酶试验 第三格和第二格中细
4、菌呈出均匀混浊，而第一格中细菌呈现块装或颗粒状凝固现象，即判定为血浆凝固酶阳性。 3. 观察病原性球菌形态与染色性 (1) 链球菌：革兰染色阳性，圆形或卵圆形，呈链状排列。 (2) 脑膜炎双球菌：革兰阴性球菌，肾形成双排列，凹面相对，菌体呈浅兰色，多位于中性粒细胞浆内，胞浆外也有少数散在分布。 (3) 淋球菌 在细胞中发现革兰氏阴性双球菌 4. 观察病原性球菌培养特性 (1) 葡萄球菌在血液琼脂平板上的生长表现：菌落为圆形，中等大小，表面光滑，边缘整齐，不透明；金黄色葡萄球菌菌落呈现金黄色，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌菌落呈白色或柠檬色；金黄色葡萄球菌的菌落周围多有透明溶血环，而其它葡萄球菌一
5、般无溶血环。 血平板菌落呈金黄色，也有时呈白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血环。在普通平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。 (2) 链球菌在血液琼脂平板上的生长表现：除丙型链球菌外，菌落均较微小，如针尖大，圆形，灰色，半透明。根据溶血性将链球菌分为三类。甲型链球菌的菌落周围有小的草绿色溶血环，乙型链球菌有较大的透明溶血环，丙型链球菌
6、不溶血。 五、结果分析 1. 抑菌程度的判定是依照滤纸片周围细菌的生长与抑菌环直径大小来判定。 对药物的敏感程度 不敏感 轻度敏感 中度敏感 高度敏感 抑菌环直径 无抑菌环 15 青霉素能干扰四肽侧链和五肽交联桥的连接，对G+效果明显。 链霉素干扰其蛋白质合成，从而杀死细菌，但对人体核糖体无害。 庆大霉素能与细菌核糖体30s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成。 氯霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，而阻挠蛋白质的合成。 有实验结果可知，除了青霉素对大肠杆菌效果有一个未出现抑菌圈外，其他都不同程度存在抑菌现象。故不同抗生素对同种细菌产生的抑制作用不同，不同菌种对同种抗生素的反应也存在差异
7、。 2. 血浆凝固酶试验是区别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌的最重要指标。致病性葡萄球能产生血浆凝固酶，大多数金黄色葡萄球菌能产生此酶。此酶的作用类似凝血酶原，在血浆中激活剂的作用下，可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，从而导致血浆凝固。非致病性葡萄球菌不产生此酶，因而不能凝固血浆。结合型凝固酶结合于细菌细胞壁，又称凝聚因子，可直接作用于血浆中纤维蛋白原与菌体表面纤维蛋白原受体交联，使葡萄球菌凝集成块。结合于细胞壁上血浆凝固酶，采用玻片法检测。 六、讨论心得 1. 在贴抗生素纸片时候，各种抗生素纸片不宜离得太近，这样有可能导致实验结果出现抑菌圈连成一片的现象，所以在实验中，尽量使各抑菌抗生素纸片贴在培养皿半径外三分之一处。 2. 用玻片法检测血浆凝固酶中，细菌培养物在生理盐水或血浆中一定要混均匀，否则影响结果观察。 3. 所用待测菌不纯，延长培养时间后，污染菌可能导致假阳性结果.所以在每次取菌的时候切记要消毒接种环！为后面的组顺利进行提供帮助。
