《CCK8的原理优势及步骤.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CCK8的原理优势及步骤.docx（3页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、CCK8的原理优势及步骤 检测原理： Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。 CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。 CCK方法的优势： 表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较 检测方法 MT
2、T法 XTT法 好 2瓶溶液 现配现用 很高 较短 420-480nm 较差 非常适合 便捷 WST-1法 好 溶液 即开即用 很高 较短 420-480nm 一般 非常适合 便捷 CCK法 好 1瓶溶液 即开即用 高 最短 430-490nm 很好 非常适合 非常便捷 甲臜产物的水溶性 差 产品性状 使用方法 检测灵敏度 检测时间 检测波长 细胞毒性 试剂稳定性 批量样品检测 便捷程度 粉末 配成溶液后使用 高 较长 560-600nm 高，细胞形态完全消失 一般 可以 一般 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰； 细胞毒性非常低
3、，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 CCK法的操作步骤： 实验一：细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液。将培养板放在培养箱中预培养。 2、向每孔加入10 L CCK溶液。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。 实验二：细胞增殖-毒性检测 1、在96孔板中配置100L的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时。 2、向培养板加入10
4、L不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间。 4、向每孔加入10L CCK溶液。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 活力计算： 细胞活力*=A(加药)-A/A-A 100 A：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度 A：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度 A：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 保存条件： 4避光保存一年有效，-20避光保存两年有效。
