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HRP记方法标记比例：； 根据标记比例计算所需HRP量X。 一、蛋白透析 1、 目标蛋白透析到CB(pH9.6，50mM)中，换液2次以上； 二、酶的氧化 2、 称取Xmg HRP干粉(Biozyme or Sigma)溶于X/20 mL ddH2O 中。 3、 称取 NaIO4 y mg( yX)，溶于y/20 mL的ddH2O中，吸取X/20 mLNaIO4溶液与X/20 mL 的 HRP溶液缓慢混合，4下静置 30min。注意：此后的操作均在避光条件下进行。 4、 吸取X L乙二醇缓慢加入氧化后的HRP溶液，室温避光静置 30min。 三、标记 5、 将氧化好的HRP直接加入到已透析充分的抗原/抗体蛋白 6、 继续透析到CB(pH9.6，50mM)中，换液2次以上； 7、 加入X/5mg NaBH4到其中，4静置 2hr，每30min摇动 1 次。 8、 PBS(10mM，pH7.2)透析过夜，标记液中加入体积比 50%的甘油，混匀后置于-20保存。
