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1、PCR自测题PCR自测题 一、名词解释 1.PCR 2.变性 3.退火 4.延伸 5.逆转录PCR 6.停滞效应 7.共享引物PCR 8.多重PCR 9.反向PCR 10.原位PCR 11.LCR 二、单项选择题 1PCR反应中，所设计引物的长度一般为 A510核苷酸 B. 1530核苷酸 C. 30个核苷酸 C 引物设计时GC含量在引物中一般为4555 D 按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基 E 两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3端的互补重叠 F 引物的3端可以游离而不影响PCR反应的进行 6. 以下关于PCR的说法正确的是 A PCR的模板可以是DNA也可以是RNA
2、 B PCR的模板必须从组织细胞中分离出来 C PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。 D PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。 E PCR反应一般需要含102105拷贝的模板 7以下关于PCR反应条件错误的是 B PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。 C Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。 D 4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。 E 引物浓度一般为0.5-1umol/L 8. PCR反应时应设立哪种对照 A. 阴性对照 B. 阳性对照 C. 试剂对照 D. 以上答案都正
3、确 9. 逆转录反应体系包括 B. RNA模板，四种dNTP C. RNA酶抑制剂 D. 合适的缓冲液体系 E. 逆转录酶 F. 寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物 10. 有关PCR的模板说法正确的是 ( ) A. 模板可以是DNA也可以是RNA B. 大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高 C. 模板用量低 D. 标本处理的基本要求是除去杂质 11. 以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有( ) A. 反应体系一般有20l B. 反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶 C. 逆转录于42进行,随后即进行PCR
4、D. RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应 12. PCR的产物累积的特征是( ) B. 反应初期,目的DNA片断呈指数扩增 C. PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应 D. 到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度 E. PCR平台期的出现多数不可避免 F. 到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应 13. 有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是( ) A. Taq DNA 酶的活性维持需要Mg2+ B. Taq DNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关 C. Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加 D.
5、Mg2+过高会降低酶的活性 E. 总量应低于dNTP的量, 常用1.5mmol/L 14. PCR中使用的底物dNTP应该是( ) A. 使用前应将pH值调至7.0-7.5 B. dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率 C. 降低反应速度可以提高反应特异性 D. PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制 E. Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系 15. Taq DNA酶的特点是( ) A. 75-80时具有最高的聚合酶活性 B. 活性的维持需要Mg2+的参与 C. Taq DNA酶和klenow片断一样具有校正功能 D. Taq DNA酶的忠实性很高 E. 具有类
6、似末端转移酶的活性 16. 有关引物的说法正确的是( ) A. 引物浓度一般为0.1-1.5mol/L B. 引物与模板的的比至少为108:1 C. 引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率 D. 引物Tm值位于55-80较理想 17. PCR反应温度应该是( ) A. 为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好 B. 按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间 C. 于反应管中加入1-2d 石蜡油防止反应液的蒸发 D. 温度越高时间越长, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响 18.有关退火温度正确的是( ) A. 引物与模板退火温度一般在45-55 B. 退火温度过低
7、,使非特异扩增增加 C. 退火温度过高, PCR扩增含量下降 D. 退火时间一般为1-2分钟 E. Tm值的允许范围内,应该选择较低的退火温度 19.延伸温度应有如下特点( ) A. 一般为72 B. PCR延伸时间越长, 产物的得率越高 C. Taq DNA酶在延伸温度时有较高的酶活性 D. PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定 20.PCR循环次数设定时应注意( ) B. 应由最初靶分子浓度而定 C. 理论上20-25个循环后, PCR产物累积达最大值 D. PCR的循环次数一般为25-30次 E. 循环次数过多时会引起停滞效应 21.PCR样品制备时应注意( ) B. 应有专门的区域制
8、备模板 C. 提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换 D. 纯化样品对污染有极大的影响 E. 普通分子克隆工具不能用做样品的处理和靶序列 F. 提取核酸所用的试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用的试剂. 22.操作中应该注意( ) A. 使用的溶液应该没有核酸,核酸酶 B. 试剂水都是高质新鲜蒸馏水 C. 工具(枪头,试管) 都是一次性并且高压灭菌 D. 应有专门的操作区 E. 试剂应该分装保存 23. PCR反应总为阴性时应该( ) A. 增加Taq DNA酶的浓度 B. 增加靶DNA的量 C. 增加扩增循环或者降低退火温度 D. 提纯样品 E. 取10l扩增液再行PCR 24. P
9、CR反应出现非特异产物时,应该采取的措施是( A. 增加退火温度 B. 降低Taq DNA酶浓度 C. 减少退火及延伸时间 D. 减少引物浓度 E. 减少扩增循环次数 25.PCR可以广泛应用于( ) A. 遗传性疾病的基因诊断 B. 检测癌基因 C. 检测病原微生物 D. 法医鉴定 E. DNA序列测定 26.对RNA的体外扩增过程,描述正确的是( ) A. 分为循环相和非循环相 B. 也具有变性,复性,延伸三步 ) C. 反应体系中含有dNTP和NTP两种类型的核苷酸 D. 反应中含有两种特异性引物 E. 待测RNA作为模板进入循环相 27.RNA-PCR技术的特点为( ) A. 扩增效率
10、高 B. 扩增时间短 C. 特异性不强 D. 需严防DNA的污染 28.下列说法错误的是( ) C. RNA-PCR中, 非循环反应与循环反应不处在同一反应体系 D. RNA-PCR中,扩增产物以2的指数递增 E. 反应温度一般为37-42, 时间一般为30分钟到1小时 F. RNA-PCR需采用25个循环达到需要量 G. 依赖于逆转录酶, RnaseH和T7RNA聚合酶共同作用 29. 利用PCR技术测序有下列哪几种方法( ) A. 双链直接测序 B. 基因扩增转录测序 C. 不对称PCR产生单链测序 D. 双链克隆后测序 四、填空题 1. PCR反应体系含有 ， ， ， 。 2. PCR反
11、应的基本过程为 , , 3. 引物与模板的退火温度一般为 ，延伸温度一般为 4. PCR循环次数一般设定为 ，过多的循环次数会导致 的出现。 5. ， ， 可用于LCR产物的检测。 6. 引物3端最佳碱基选择是 和 。 7. PCR的标本处理的基本要求是 8. PCR的反应体系一般选用 。 9. PCR反应的缓冲液提供了PCR反应 与 常用的为 10. PCR的反应体系中，Mg2的浓度一般保持在 ,常用的是 11. TaqDNA聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。 12. 在变性过程中，为防止反应液的蒸发，可在反应管中加入 13. PCR反应时应设立以下实验对照： , , . 14. 定量PCR必须
12、设立 五、简答题 1、简述PCR反应的基本步骤。 2、简述PCR模板的种类及制备方法。 3、简述PCR产物的积累规律。 4、简述PCR的基本反应。 5、简述PCR实验应注意的事项。 6、简述连接酶链反应的基本原理。 7、简述RNA体外扩增的特点。 六、论述题 1、试述PCR的基本原理及引物设计原则。 2、试述PCR技术的特点。 3、试述PCR反应条件的优化。 4、试述PCR的主要类型及其工作原理。 参考答案及题解 一、名词解释 1、PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。 2、变性：于PC
13、R反应体系中，通过加热使温度至95左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA作为反应模板。 3、退火： PCR反应中，经变性后将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA模板互补区域结合，形成杂交链的过程。 4、延伸：当反应体系温度升至70左右时，TaqDNA聚合酶催化以引物为起始点的53延伸反应，形成新生DNA链。 5、逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。 6、停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。 7、共享引物PCR：利用3条引物扩增两种不同的DNA序列，其中
14、一条引物与两种待扩增序列都互补，它与另两条引物分别组成两对PCR引物，此种PCR常用于细菌学鉴定，确定同一种属细菌的不同种类。 8、多重PCR：在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份DNA样品中不同序列的PCR过程。 9、反向PCR：利用连接酶将一段未知序列两端连接成环状，利用单一限制酶原点切开已知序列，据已知序列的碱基顺序设计3端和5端引物扩增未知序列。 10、原位PCR：以组织固定处理细胞内的DNA或者RNA作为靶序列，进行PCR反应的过程，不必从组织细胞中分离模板DNA或RNA。 11、LCR：连接酶链反应，又称连接酶扩增反应，是以DNA连接酶将某一DNA链的5磷酸与另一相邻链的3羟基连
15、接为基础的循环反应, 特点是能准确分析基因序列中的单个碱基突变。 二、单项选择题 1、B PCR的引物设计长度一般为1530个核苷酸，过短影响PCR特异性而过长却会提高相应的退火温度，并使延伸温度TaqDNA聚合酶的最适温度，影响产物的生成 2、C 含量过低，反应的特异性不高。但是含量太高又会使引物的Tm值升高，不利于PCR反应的进行 3、D 引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合，但是5端的的碱基可以游离，而不影响引导新生DNA链合成 4、A 5、C TaqDNA聚合酶活性与反应体系中的游离Mg2+浓度相关 6、D LCR是以DNA连接酶将某一DNA链的5磷酸与另一相邻链的3羟基
16、连接为基础的循环反应, 特点是能准确分析基因序列中的单个碱基突变 7、A 原位PCR不必从组织细胞中分离模板DNA或RNA,经扩增后，大部分产物留在细胞内，再可以结合原位杂交或者PCR标记引物的显色技术而广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究 8、C Tm42 9、B TaqDNA聚合酶缺乏35外切酶活性，因而没有校正功能 10、C 锚定PCR首先通过分离细胞的总RNA或mRNA，逆转录生成cDNA，后在cDNA3末段加上poly尾。再通过poly锚定引物和与cDNA特异配对的引物共同进行PCR扩增 11、B 多重PCR可以扩增一份DNA样品中的不同序列，因此可以检测是否存在某些基因片段的缺失和突
17、变。 12、B PCR反应中，四种dNTP必须等摩尔浓度配制，以减少反应的错配率并提高使用效率。 13、C Taq DNA聚合酶具有末端转移酶的功能, 能催化dNTP加到DNA的3-OH端, 但对dNTP的聚合能力不同, 对dATP的聚合能力高于其他三种核苷酸,故而PCR的产物末端总是带有两个A. 14、D PCR扩增位于两个特异性引物之间的DNA片断, 扩增的特异性由引物特异性来决定. PCR反应本身符合酶促反应动力学, 是一种酶促反应 15、C Taq DNA聚合酶具有良好的热稳定性, 广泛应用于PCR反应. 16、C PCR反应的特异性由引物的特异性决定, 它特异地扩增位于两个引物间的D
18、NA片断. 17、C LCR需要设计两对引物, ,采用DNA连接酶,将某一DNA链的5磷酸与另一链的3羟基连接.它并不具有PCR的高度敏感性. 三、多项选择题 1.A B 在Tm值允许的范围内，选择偏高的退火温度可以减少引物和模板的非特异性结合，提高PCR反应的特异性；退火时间一般选择30秒1分钟，足以使引物和模板结合完全 2.A B C D 隔离不同的操作区, 分装试剂，减少重复取样所致的误差, 严格实验操作污染, 设立实验对照 3.A B 4.A B C D E 5.B C DA PCR的引物设计长度一般为1530个核苷酸，过长会提高相应的退火温度，并使延伸温度TaqDNA聚合酶的最适温度
19、，影响产物的生成。 引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合 6. A C D E 原位PCR无需从组织细胞中分离模板 7.B DB Mg浓度过低会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过高又会使酶催化非特异性扩增增强。引物浓度一般为0.1-0.5mol/L 8. A B C D 9. A B C D E 10. ABCD PCR反应的模板可以是DNA,也可以是RNA(先逆转录生成cDNA, 后行PCR反应), 大多数用途的PCR对DNA模板的要求并不严格(大量的实验数据表明存在一定量的蛋白质或者SDS对实验过程影响不大),并且模板用量很低但依然要达到一定的水平.对于PCR的标本处理最基
20、本的就是出去杂质. 11.AD 反应体系中应该还包括RNA酶抑制剂, 当逆转录反应于42进行后,应该将反应混合物加热再955分钟,灭活逆转录酶,然后取2l反应产物行以DNA为模板的PCR反应 12. BD PCR的扩增过程遵循酶的催化动力学原理,在PCR的反应初期, 目的DNA片断呈指数扩增, 随着目的DNA产物的积累,酶的催化反应趋于饱和,出现平台期.并且到达平台期所需的PCR循环数目取决于样品中模板的拷贝数,PCR扩增效率,DNA聚合酶的种类和活性,以及非特异产物的竞争等因素. 13.BCDE Mg2+过低,会显著降低酶的活性, 过高又使酶催化非特异性扩增增强, Taq DNA酶的活性与反
21、应体系中的游离Mg2+有关, 而Mg2+又和引物,模板,dNTP分子中的磷酸基团结合从而使游离Mg2+浓度下降,所以Mg2+的总量应该高于dNTP的量. 14.ABCE PCR反应中,应该使四种dNTP等摩尔浓度配制,以减少错配误差和提高使用效率 15. ABE TaqDNA酶没有3-5的外切酶活性因而没有校正功能.并且TaqDNA酶体外扩增DNA的忠实性是所有已知忠实性的DNA聚合酶中最低的. 16. BCD 引物的浓度一般是0.1-0.5mol/l 17. BCD 变性温度过高时间过长, TaqDNA酶容易失活, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响 18. ABC 在Tm值的允许范
22、围内,选择偏高的退火温度可以减少引物与模板之间的非特异结合,提高PCR反应的特异性,退火时间一般为30秒至1分钟. 19.ACD 延伸时间过长易发生非特异性扩增 20. ABCD 理论上20-25次循环后PCR产物累积达最大值,但是实际上每次PCR产物得率达不到100%, 所以一般设定为25-30次 21.ABCDE 22. ABCDE 23.ABCDE 24. ABCDE 25.ABCDE 26.ACD RNA的体外扩增不需经过变性,复性; 并且进入循环相的是反义RNA. 27.AB RNA-PCR技术的特异性很强,由于只有4-6次循环, 错配率减低了很多. 并且因为反应没有热变性,所以双链
23、DNA不能作为模板扩增, 所以不必防止DNA的污染 28.ABD RNA-PCR中,循环相和非循环相处于同一反应体系,产物的扩增以10的指数递增,所以只需要4-6次循环即达到所需量. 29. ABCD 四、填空题： 4 耐热的TaqDNA聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种dNTP，合适的缓冲液体系。 5 变性，退火， 延伸 6 4555， 72 7 2530次， PCR反应“平台效应”。 8 核素标记法，荧光素标记法，地高辛标记法 9 G，C。 10 除去杂质，并部分纯化标本中的核酸 11 50100ul。 12 合适的酸碱度，某些离子，1050mmol/L的Tris-HCl。 13 0.2
24、2.5mmol/L, 1.5mmol/L 14 53聚合酶活性， 35外切酶活性，校正功能。 15 12滴液体石蜡 16 阳性对照，阴性对照，试剂对照 17 内参照 五、简答题 1. PCR反应的基本步骤包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。变性：加热使双链DNA变为单链;退火：当温度降至引物的Tm值左右或以下，引物与DNA模板互补区结合，形成杂交链，这一过程称退火。当温度突然降低时由于模板分子结构较引物要复杂的多，而且反应体系中引物DNA的分子数大大超过模板DNA的分子数，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA双链之间互补的机会较少；延伸：耐热DNA聚合酶按53方向催化以引物
25、为起始点的延伸反应。 1、 2. DNA和RNA均可作为PCR的模板。DNA可以直接作模板加入反应体系进行扩增，RNA的扩增需要逆转录为cDNA后才能进行PCR扩增，故又称这种扩增方式为RT-PCR。 DNA模板的制备通常采用去垢剂破坏细胞，除杂质，乙醇沉淀核酸或水煮沸溶解细胞。RNA模板的制备可采用RNA提取试剂盒、酸性硫氰酸胍-酚-氯仿法、异硫胍氯化铯密度梯度分离法、SDS-酚-氯仿法。制备RNA模板时，要注意防止RNA水解。 3. PCR产物的积累规律：PCR反应过程遵循酶促动力学规律。在反应初期，反应产物以指数方式累积。随着反应的进行，体系中的各成分的比例发生变化，扩增速度逐渐放慢。反
26、应后期，酶的催化反应趋于饱和，反应曲线出现拐点而进入反应的“平台期”。 达到平台期所需的PCR循环次数取决于反应体系中模板的拷贝数、PCR扩增效率、DNA聚合酶的种类和活性、引物质量、以及非特异性扩增条带的竞争等诸多因素。 4.以DNA为模板的反应：反应体系一般选用50100l体积；其中含有缓冲液、MgCl、明胶或牛血清白蛋白、引物、4种dNTP、模板DNA、TaqDNA聚合酶。封上矿物油防止高温反应时液体的挥发，即可进行PCR反应。 以mRNA为模板的反应：以mRNA为原始模板进行的PCR反应称为逆转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)。首先将mRN
27、A逆转录生成cDNA，然后再进行PCR反应。逆转录反应体系一般选用20l体积，其中含有RNA酶抑制剂、缓冲液、种dNTP、MgCl2、DTT、牛血清白蛋白、oligo(dT)12-18引物，RNA模板、逆转录酶。 逆转录反应在42进行，随后将反应混合物加热在95，5分钟，灭活逆转录酶。取2l反应产物，按DNA为模板的PCR反应步骤、进行扩增反应。 5. 由于PCR反应极强的扩增能力和检测的灵敏性，微量样品污染便有可能导致假阳性结果的出现。为此在实验操作中应谨防污染的发生，并设置严格的对照，以提高PCR结果的正确性。 在有条件的情况下，PCR实验室应设.样品制备区、PCR操作区及反应产物分析区；
28、在进行PCR反应时，应设阳性对照、阴性对照和试剂对照；扩增反应总是阴性结果时应采取的措施：取10l扩增混合液作模板再进行PCR扩增；增加TaqDNA聚合酶的浓度；增加靶DNA的量；若模板为粗制品，提纯样品；增加扩增循环次数；适当降低退火温度；出现非特异性产物时应采取的措施：增加退火温度；减少TaqDNA聚合酶的浓度；减少退火及延伸时间；减少引物浓度；减少扩增循环次数。 6. LCR的基本原理是设计两对引物，分别与模板双链DNA分子的一条链互补。然后用连接酶将两邻接的引物连接起来，如果模板链没有碱基突变，那么引物就可以与模板完全互补，两引物就通过磷酸二酯键连接成为下轮扩增的模板，如果模板链上有突
29、变，在两个引物的连接处有一个或多个碱基不能配，那么两条引物就不被连接。因此没有连接产物就表明靶分子上至少有一个不配对碱基对。 7. RNA体外扩增特点：反应中不需对核酸进行变性与复性；其原理与PCR相似，反应分非循环相与循环相；依赖于逆转录酶，RNase H和T7RNA聚合酶的共同作用；反应体系中含两种特异性引物，分别用A，B表示，其中引物A含T7RNA聚合酶识别的启动子，它与待测RNA的3端序列互补，引导合成cDNA的第一链。引物B与cDNA第一链的3端序列互补，如果打算扩增全长的RNA，则引物B的序列与原始RNA的5端序列一致。5.反应体系中含有dNTP和NTP两种类型的核苷酸，dNTP用
30、于合成cDNA，NTP用于合成RNA。 六、论述题 1. PCR技术又称聚合酶链反应技术，是一种在体外扩增核酸的技术。该技术模拟体内天然DNA的复制过程。其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。PCR技术的特异性取决于引物与模板结合的特异性。 PCR作为一个体外酶促反应，其效率和特异性取决于两个方面，一是引物与模板的特异结合，二是聚合酶对引物的有效延伸。引物设计的总原则就是提高扩增的效率和特异性。引物设计一般遵循下列原则： 引物长度一般为1530个核苷酸。碱基
31、随机分布，避免出现嘌呤，嘧啶的堆积现象。G+C的含量为4555%。3端和5端引物具有相似的Tm值。Tm=4+2。引物长度要确保解链温度不低于54C。避免发夹结构形成，引物自身存在的连续互补序列，一般不超过3bp。两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3端的互补重叠。引物的碱基序列不应与非扩增区域有同源性。引物3端碱基一定要与模板DNA配对，最佳碱基选G和C。引物的5端可以修饰，如加限制酶位点，引入突变位点，起始密码子，终止密码子等。 2. PCR技术的特点：1）操作简便：完全自动化的操作，在循环期间，无须专人守侯，非常方便。 省时：一个PCR反应周期，包括9495变性3060秒5065退火3
32、050秒7075延伸5090秒；再加上预变性510分钟最后一次循环后在7075继续延伸10分钟，假设n=30个循环完成后，一般只需要22.5小时，就可完成扩增反应。 灵敏度高：从理论上讲，一根头发，一个精细胞，一个二倍体细胞内的DNA都可得到扩增。单个细胞的PCR技术现已广泛地被采用。一般，PCR反应中模板的加入量约为102拷贝的靶序列,就可以进行PCR 反应。 特异性强：特异性是指PCR发生错误引发的频率，特异性还反映了导致无关扩增产物的错配发生的频率。PCR反应只是在一对引物之间引发，因此，对反应液进行核酸电泳时，只能得到一条清晰的确定大小的条带。 模板材料易获得：许多标本均能用于PCR反应，如细菌和病毒标本血液或细胞标本、化石鼻咽口腔及生殖器的拭子标本等。固定和包埋的石蜡或冰冻组织标本，拷贝数低DNA已有损伤或降解的古化石标本均能进行PCR扩增反应。一般用于PCR反应的样品必须经过适当的处理，其目的有去除能抑制Tag DNA聚合酶活性的杂质, 使待扩增的DNA暴露，能与引物相结合。只要达到该要求即可，对纯度要求并不苛刻。 有一程度的单核苷酸错误掺入：TagDNA聚合酶无35外切活性，对错误掺入的单核苷酸无校正修复功能，故PCR反应产物会有一定程度的碱基错误掺入。使用不同的DNA 聚合酶，其错掺率也不相同。 碱基错掺率的大小决定着PCR对模板序列忠实性的高低。在一个非常精确P
