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1、POD测定方法POD的测定 1、实验仪器 722型分光光度计、离心机、秒表、电子天平、研钵 2、实验试剂 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)、反应混合液100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)50mL，加入愈创木酚28uL，加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存于冰箱中 1、粗酶液的提取 称取植物(小麦叶片)材料0.1g，加20mmol/LKH2PO4 5mL，于研钵中研磨成匀浆，以10000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO45mL溶
2、液提取一次，全并两次上清液。 2、酶活性的测定 取比色皿2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL(如酶活性过高可适当稀释)，立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔30s读数一次。以每分钟表示酶活性大小，即以OD470/min.mg蛋白质表示，蛋白质含量测定按Folin法进行。 5 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以A470/min.g(鲜重)表示之。也可以用每min内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)表示。 过氧化物酶活性u/(g.min)= 式中：A470反应时间内吸光度的变化。 W植物鲜重，g。 VT 提取酶液总体积，mL。Vs 测定时取用酶液体积 ,mL。 t反应时间，min。
