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1、Southern转膜方法Southern转膜方法 将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后，即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种，包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等， Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用于杂交。常用的Southern转膜方法有以下3种。 1毛细管虹吸印迹法 此法是利用浓盐酸转移缓冲液的推动作用，将凝胶中的DNA转移到固相支持物上，转移方式见图。其原理是：容器中的转移缓冲液含有高浓度的NaCl和柠檬酸钠，上层吸水纸的虹吸作用使缓冲液通过滤纸桥、滤纸、凝胶、硝酸纤维素滤膜向上运动，同时带动凝胶中的D
2、NA片段垂直向上运动，凝胶中的DNA片段移出凝胶而滞留在膜上。利用毛细管虹吸作用的转移法转移效率不高，尤其对分子量较大的DNA片段更是如此，但由于其器具简单，不需要特殊装置，因此一直被广泛用于Southern印迹的转膜。 2电转移法 通过电泳作用将凝胶中的DNA转移到滤膜上。其基本原理是将尼龙膜与凝胶贴在一起，并将疑胶与尼龙膜一起置于滤纸之间，固定于凝胶支持夹，将支持夹置于盛有转移电泳缓冲液的转移电泳槽中，凝胶平面与电场方向垂直，附有滤膜的一面朝向正极。在电场的作用下，凝胶中的DNA片段沿与凝胶平面垂直的方向泳动，从凝胶中移出，滞留在滤膜上，形成印迹。电转移法尤其适用于毛细管虹吸法转移不理想的
3、大片段DNA。但应用这种方法需注意不要选用硝酸纤维素滤膜作为固相支持物；应用循环冷却水装置以保证转移缓冲液的欧姆热效应；此外，转移缓冲液不能用高盐缓冲液，以免产生强电流破坏DNA。 3真空转移法 在真空条件下，DNA和RNA可从凝胶中快速并定量地转移。目前有商品供应的真空转移装置有数种。在这些装置中，硝酸纤维素滤膜或尼龙膜置于真空室上方的多孔屏上，DNA从凝胶中洗膜，并使核酸聚积在滤膜或尼龙膜上。真空转移较之毛细管转移更为有效，而且极为快捷。经碱处理后不完全脱嘌呤和变性的 DNA30min内即可从具有正常厚度(45mm)和正常琼脂糖浓度(1)的凝胶中定量地转移。仔细操作，真空转移可以使Southern转移获得的杂交信号增强l2倍。
