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T7 dsRNA合成T7 RiboMAXTM Express RNAi System (Promega) 一、dsRNA的大量合成 1. 在室温建立合适的反应体系； RiboMAXTM Express T7 2Buffer* 10 L 正义模板 4 L 反义模板 4 L Enzyme Mix，T7 Express 2 L Total 20 L *冻存的RiboMAXTM Express T7 2Buffer可能含有沉淀，可在37温浴中溶解后混匀。注意，试剂中含有亚精胺，在低于室温下可使DNA沉淀。 2. 轻微混匀，37温浴2-6 h； 二、残留DNA模板的去除，dsRNA的退火生成，ssRNA的去除 3. 温浴结束后将反应液于70水浴10 min，之后缓慢降至室温； 4. 向冷却至室温的反应液中加入1 L RNase A Solution和1 L RQ1 RNase-FreeDNase，37孵育30 min；三、双链RNA的纯化 5. 加入20 L 3M醋酸钠，50 L 95%的乙醇，冰浴5 min； 6. 16 000g离心10 min，可见离心管底有白色沉淀； 7. 小心弃去上清，用500 L预冷的70%乙醇洗涤沉淀2次，弃上清，室温空气干燥15 min，加100 L RNA-free H2O溶解沉淀； 8. 将产物放在-70保存。
