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1、人5羟色胺ELISA试剂盒说明书人5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名：人5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5羟色胺(5-HT)水平。用纯化的人5羟色胺(5-HT) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT)，再与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转
2、化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人5羟色胺(5-HT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，通过标准曲线计算样品中人5羟色胺(5-HT)浓度。 试剂盒组成 1 2 3 4 5 6 20倍浓缩洗涤液 酶标试剂 酶标包被板 样品稀释液 显色剂A液 显色剂B液 30ml1瓶 6ml1瓶 12孔8条 6ml1瓶 6ml1瓶 6ml1/瓶 7 8 9 10 11 12 终止液 标准品 标准品稀释液 说明书 封板膜 密封袋 6ml1瓶 0.5ml1瓶 1.5ml1瓶 1份 2张 1个 标本要求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不
3、能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融 2不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀
4、释液50l，混匀后从第七、第八孔中分别取50l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l，混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。 2. 加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后置37温育30分钟。 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔先加入显色
5、剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50l，终止反应。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2浓洗
6、涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6底物请避光保存。 7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 检测范围： 4ng/ml-800ng/ml 灵敏度： 2 ng/ml 规格： 96人份/盒 保存条件及有效期 1试剂盒保存：；2-8。 2有效期：6个月 2 3
