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1、以没食子酸为对照品 总酚的含量测定方法Folin Cioealteu 比色法( FC酚法) 一、仪器 UV- 2401 PC 型紫外分光光度计; 超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ- 2508型) ; 恒温水浴锅 二、 试剂 没食子酸标准品; 钨酸钠,磷钼酸, 85%磷酸, Na2 CO3, 以上试剂均为分析纯; 水为蒸馏水。 1.3 福林试剂的配制 在250mL的圆底烧瓶内加入20g 钨酸钠、5g 钼酸钠、140mL 蒸馏水,85%的浓磷酸10mL 及浓盐酸20mL,充分混匀,以小火回流10h,再加入3g 硫酸锂及15mL 双氧水,开口继续煮沸15min,待双氧水完全挥发,呈亮黄色。冷
2、却后移入250mL 容量瓶中,定容置于棕色试剂瓶中,放入冰箱中备用。 1.4 溶液的配制 溶称取40gNa CO3, 溶于200mL 蒸馏水中, 即为20%的液。 二、方法与结果 1.对照品溶液的制备并绘标准曲线 精密称取没食子酸标准品0.0110g,用蒸馏水溶解并定容至100mL,得浓度为0.11mg /mL 的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL 置于25mL 的棕色容量瓶中,加蒸馏水至6.0mL,然后分别加入FC 试剂0.5mL,混匀,在0.58min内加入1.5mL20% 的Na2CO3溶液,充分混合后定容,30 避光放置0.5h,以不加标准液
3、的6.0mL 蒸馏水为空白对照,760nm 下测定吸光值,每个样品平行测定三次。 2、供试品溶液的制备 样品溶液总酚含量的测定: 准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL 于50mL 容量瓶中,加入9.5mL 蒸馏水,摇匀,再加入0.5mL 福林试剂,混匀,在0.5 8min 内加入1.5mL 20%的Na2CO3溶液,充分混合后定容, 30避光放置0.5h,以没食子酸标准液为空白对照, 760nm 下测定吸光值,每个样品平行测定6 次(A为6次平行测得的吸光度)。 以没食子酸为标准品的总酚的标准曲线:Co=0.0110mg/ml 次数 浓度 1 2 3 4 5 6 7 8 样品X V(ml0 ) A 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 4、以没食子酸在反应体系中的质量浓度C为横坐标,吸光度值A为纵坐标,绘制标准曲线。