啤酒厂化验室设计.docx

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1、啤酒厂化验室设计课 题 姓 专 班 起 止 指 导 广西工业职业技术学院 设计说明书 名 称： 啤酒厂微生物实验室设计 名： 廖国旭 业： 食品药品监督管理 级： 药监1031班 日 期： 教 师： 韦丽 前言 设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障，使企业强有力的立足于世界市场。 化验室基本任务是对啤酒原辅料、半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接

2、受水平，保证饮品质量。 化验室功能是为啤酒的质量提供有效的保障，让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。 化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、更衣室、洗涮室、缓冲间、无菌室、准备室。 摘要 对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导，对啤酒质量进行有效的控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造，建立合理完善的管理制度。 本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及

3、成品的检测,起到控制和管理生产,保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标的作用,也为开发新产品、制定合理的工艺参数提供数据依据.本分析化验室主要包括:办公室、仪器室、试剂室、理化实验室、准备室、微生物检验室. 啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、半成品化验分析、成品化验分析起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。在成品成厂时，必须对出 厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准，以保证人民健康和商品信誉。 本分析化验室的整体目标是完成对原料、辅料、半成品及成品的检测和质量控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发。 目录 1.啤酒原料、半成品及成品的

4、检测项目及标准4 1.2原料的检测项目及标准4 1.3半成品检测项目及标准4 1.4成品检测项目及标准5 2.啤酒原料、半成品及成品的检测方法6 2.1啤酒原料的检测方法6 2.2啤酒半成品的检测方法 7 2.3啤酒成品的检测方法7-23 3.试剂和仪器清单24 3.1试剂清单25 3.2 玻璃仪器清单26 3.3 设备清单27 3.4化验室的月试剂消耗量27 4.化验室的平面布置图及设计说明28 4.1化验室设置29 4.2化验室的平面布置图30 4.3设计说明31 5.化验室人员配制和组织管理32 6.化验室的岗位责任制34 7.参考文献36 8.谢辞36 1.啤酒原料、半成品及成品的检测

5、项目及标准 1.1啤酒半成品检测项目及标准 序号 1 微生物检验 致病菌、厌氧菌 2 乳酸菌数 1106cfu/mL 不得检出 检测标准 1.2啤酒成品检测项目及标准 序号 1 2 3 微生物检测项目 菌落总数 大肠菌群 致病菌 检测标准 50 3 不得检出 2.啤酒半成品及成品的检测方法 2.1半成品 2.1.1酵母死活细胞的测定 活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色：而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原成无色故多用于区别细胞的死活。但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此

6、以制片后五分钟内计算的死细胞数为据。 检查方法：取0.1%美蓝一滴，置载玻片中央，然后去酒母液少许和入美蓝液中，搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞，计算死细胞占总细胞数的百分率。 死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率 死亡率=b/a% 2.2成品 2.2.1志贺氏菌检验 2.2.1.1范围 本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella) 的检验方法。 本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。 2.2.1.2设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a

7、 恒温培养箱：36 1 ； b 冰箱：2 5 ； c 膜过滤系统； d 厌氧培养装置：41.5 1 ； e 电子天平：感量0.1 g； f 显微镜：10100； g 均质器； h 振荡器； i 无菌吸管：1 mL、10 mL或微量移液器及吸头； j 无菌均质杯或无菌均质袋：容量500 mL； k 无菌培养皿：直径90 mm； l pH计或pH比色管或精密pH试纸； m全自动微生物生化鉴定系统。 2.2.1.3培养基和试剂 a 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。 b 麦康凯琼脂。 c 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂。 d 志贺氏菌显色培养基。 e 三糖铁琼脂。 f 营养琼脂斜面。 g 半固体琼脂。 h 葡萄

8、糖铵培养基。 i 尿素琼脂。 j -半乳糖苷酶培养基。 k 氨基酸脱羧酶试验培养基。 l 糖发酵管。 m 西蒙氏柠檬酸盐培养基。 n 粘液酸盐培养基。 o 蛋白胨水、靛基质试剂。 p 志贺氏菌属诊断血清。 q 生化鉴定试剂盒。 2.2.1.4操作步骤 2.2.1.5增菌 以无菌操作取检样25 g，加入装有灭菌225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min10 000 r/min均质；或加入装有225 mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1 min2 min，液体样品振荡混匀即可。于41.5 ，厌氧培养16 h20 h。 2.2.1.6分离 取

9、增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36 1 培养20 h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。 表 1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 MAC琼脂 志贺氏菌的菌落特征 无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 XLD琼脂 粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 志贺氏菌显色培养基 2.2.1.7初步生化试验 2.2

10、.1.8 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36 1 培养20 h24 h，分别观察结果。 2.2.1.9凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其2.2.1.6中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。 2.2.1.10生化试验及附加生化试验 2.2.1.11生化试验 用2.2.1.8中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性;宋内氏菌

11、和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。 表2 志贺氏菌属四个群的生化特征 生化反应 A群：痢疾B群：福氏C群：鲍氏D群：宋内按照显色培养基的说明进行判定 志贺氏菌 -半乳糖苷a 酶 尿素 志贺氏菌 - 志贺氏菌 a 氏志贺氏菌 + 赖氨酸

12、脱羧 酶 鸟氨酸脱羧 酶 水杨苷 七叶苷 靛基质 甘露醇 棉子糖 甘油 / () b + () c / () + d 注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。 a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。 b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。 c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。 2.2.1.12附加生化实验 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌、A-D菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36 培养24 h48 h)。志贺氏菌属和不活泼

13、大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。 表3 志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别 生化反应 A群：痢B群：福C群：鲍D群：宋大肠埃疾志贺氏志贺氏志贺内氏志希氏菌 A-D菌 氏菌 葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 粘液酸盐 氏菌 氏菌 贺氏菌 d d d d 注1：+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。 注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D菌至少有一项反应为阳性。 2.2.1.13如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使

14、用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。 2.2.1.14结果报告 综合以上生化试验的结果，报告25 g样品中检出或未检出志贺氏菌。 2.2.3沙门氏菌检验 2.2.3.1 范围 本标准规定了食品中沙门氏菌的检验方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。 2.2.3.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1）冰箱：2 5 。 2）恒温培养箱：36 1 ，42 1 。 3）均质器。 4）振荡器。 5）电子天平：感量 0.1 g 。 6）无菌锥形瓶: 容量500 mL，250 mL。 7）无菌吸管：1 mL、10 mL 或微量移液器及吸头。 8）无菌

15、培养皿：直径 90 mm 。 9）无菌试管：3 mm50 mm 、10 mm75 mm。 10）无菌毛细管。 11）pH计或pH比色管或精密 pH试纸。 12）全自动微生物生化鉴定系统。 2.2.3.3培养基和试剂 1）缓冲蛋白胨水。 2）四硫磺酸钠煌绿增菌液。 3）亚硒酸盐胱氨酸增菌液。 4）亚硫酸铋琼脂。 5）HE琼脂。 6）木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂。 7）沙门氏菌属显色培养基。 8）三糖铁琼脂。 9）蛋白胨水、靛基质试剂。 10）尿素琼脂。 11）氰化钾 培养基。 12）赖氨酸脱羧酶试验培养基。 13）糖发酵管。 14）邻硝基酚 -D半乳糖苷培养基。 15）半固体琼脂。 16）丙二酸钠培养

16、基。 17）沙门氏菌 O 和H 诊断血清。 18）生化鉴定试剂盒。 2.3.3.4操作步骤 2.3.3.4.1前增菌 称取25 g 样品放入盛有 225 mL BPW 的无菌均质杯中，以 8 000 r/min 10 000 r/min均质1 min2 min，或置于盛有 225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.80.2。 无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 1 培养8 h18h。 如为冷冻产品, 应在4

17、5 以下不超过 15 min,或2 5 不超过 18 h 解冻。 2.3.3.4.2增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 42 1 培养 18 h 24 h 。同时，另取 1 mL，转种于10 mL SC内，于36 1 培养18 h 24 h 。 2.3.3.4.2分离 分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个 BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板。于 36 1 分别培养18 h 24 h 或40 h 48 h ，观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1 。 表 1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 BS琼脂

18、沙门氏菌 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。 HE琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。 XLD琼脂 菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。 沙门氏菌属显色培养基 2.3.3.4.3生化试验 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌, 直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 1 培养18 h 24

19、h ，必要时可延长至 48 h 。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2 。 表2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果 三糖铁琼脂 斜面 底层 产气 硫化氢 K A K A A A A A / / K K / / / 非沙门氏菌 非沙门氏菌 可疑沙门氏菌属 可疑沙门氏菌属 可疑沙门氏菌属 赖氨酸脱羧酶试验培养基 初步判断 按照显色培养基的说明进行判定。 注：K：产碱，A：产酸；：阳性，：阴性；：多数阳性，少数阴性；/：阳性或阴性。 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时 , 可直接接种蛋白胨水 、尿素琼脂、氰化钾培养基，也可在初步判断结

20、果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于 36 1 培养18 h 24 h ，必要时可延长至 48 h ，按表 3 判定结果。将已挑菌落的平板储存于2 5 或室温至少保留24 h ，以备必要时复查。 表3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 反应序号 硫化氢A1 A2 A3 靛基质 pH 7.2尿氰化钾素 赖氨酸脱羧酶 / 注：阳性；阴性；/阳性或阴性。 反应序号 A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3 项中有1项异常，按表4 可判定为沙门氏菌。如有2 项异常为非沙门氏菌。 表4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 pH 7.2尿素 氰化钾 赖氨酸 脱羧酶 甲型副伤寒沙门氏菌 沙门

21、氏菌或 沙门氏菌个别变体 注：表示阳性；表示阴性。 反应序号 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 反应序号 A3：补做ONG 。ONG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性, 甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 必要时按表 5 进行沙门氏菌生化群的鉴别。 表5 沙门氏菌属各生化群的鉴别 项目 卫矛醇 判定结果 山梨醇 水杨苷 ONG 丙二酸盐 KCN 注：表示阳性;表示阴性。 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据 5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬

22、液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。 2.3.3.5结果与报告 综合以上生化试验的结果，报告25 g 样品中检出或未检出沙门氏菌。 2.2.4金黄色葡萄球菌检验 2.2.4.1设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 1 。 、冰箱：2 5 、恒温水浴箱：37 65 、天平：感量 0.1 g 、均质器 、振荡器。 无菌吸管：1 mL 、10 mL 或微量移液器及吸头。 无菌锥形瓶：容量 100 mL、500 mL 。 无菌培养皿：直径 90 mm 。 注射器：0.5 mL 。 pH 计或 pH 比色管或精密pH 试纸。 2.2

23、.4.2培养基和试剂 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤。 7.5 %氯化钠肉汤。 血琼脂平板。 Baird-Parker 琼脂平板 脑心浸出液肉汤(BHI) 。 兔血浆。 稀释液：磷酸盐缓冲液。 营养琼脂小斜面。 革兰氏染色液。 无菌生理盐水 2.2.4.3操作步骤 2.2.4.3.1样品的处理 称取 25 g 样品至盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质 1 min2 min ，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min

24、2 min 。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，振荡混匀。 2.2.4.3.2增菌和分离培养 将上述样品匀液于 36 1 培养 18 h24 h 。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板 36 1 培养 18 h24 h 。Baird-Parker 平板 36 1 培养 18 h24 h 或 45 h48 h 。 金黄色葡萄球菌在

25、Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇 到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌 落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色，菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 2.2.4.3.3鉴定 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 m1 m 。 血浆凝固酶试验：挑取、

26、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面，36 1 培养 18 h24 h 。 取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物 0.2 mL0.3 mL，振荡摇匀，置 36 1 温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 1 培养 18 h48 h ，重复试验。 葡

27、萄球菌肠毒素的检验：未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。 2.2.4.3.4结果与报告 结果判定：符合 5.2.3、5.3，可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在 25 g样品中检出或葡萄球菌。 2.2.4菌落总数 2.2.4.1样品的稀释 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min 10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10 的样品匀液。 液体样品：以

28、无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。 2.2.4.2检 样 25 g(mL) 样品+225 mL 稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL分别加入无菌培养皿内培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 每皿中加入15 mL 20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀 报 告 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 按上述操作程序，制备 1

29、0 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL无菌吸管或吸头。 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，在进行10 倍递增稀释时，吸取 1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 2.2.4.3培养 琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h 。水产品 30 1培养72 h3 h 。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。 2.2.4.4菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜

30、或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位表示。 选取菌落数在30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 2.2.4.5结果与报告 若只有一个稀释度平板上

31、的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g 样品中菌落总数结果。 计算： 式中： N 样品中菌落数； C 平板菌落数之和； n 1 第一稀释度平板个数； n 2 第二稀释度平板个数； d 稀释因子。 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU

32、300 CFU 之间，其中一部分小于 30 CFU 或大于 300 CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 2.2.4.6菌落总数的报告 菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 7.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以 CFU/g 为单位报告

33、，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。 2.2.5大肠菌群测定 2.2.5.1范围 木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。 本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。 2.2.5.2仪器和试剂 冰箱:0-4。 恒温培养箱:36士1。 恒温水浴锅:46士1. 显微镜:10X100X。 均质器或灭菌乳钵。 架盘药物天平:0 g-500 g,精确至0. 5 g. 灭菌吸管1 mL(具0.01 mL刻度),10 mL(具0. 1 mL刻度)。 灭菌锥形瓶:500 mL. 灭苗玻璃珠:直径约5 mm. 灭菌培养皿:直径90 mm. 灭苗试管:16 mm 160 mm. 灭菌刀.剪子、摄子等。 2.2.5.

34、3培养基和试剂 乳糖胆盐发酵管。 伊红美蓝琼脂平板。 乳糖发酵管。 EC肉汤。 磷酸盐缓冲液. 0.85%灭菌生理盐水. 革兰氏染色液。 2.2.5.4操作步骤 2.2.5.4.1检样稀释 以无菌操作将检样25g粪大肠菌群的MPN值。 表1 大肠菌群最可能数检索表 阳性管数 MPN 100 95%可信限 下限 5 上限 90 1mL3 0.1 mL3 0.01 mL3 mL 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 30 30 60 90 30 60 90 120 60

35、 90 120 160 90 130 5 130 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 2 2 2 2 3 3 3 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 160 190 40 70 110 150 70 110 150 190 110 150 200 240 160 200 240 190 90 140 200 260 210 280 350 420 2

36、90 360 440 40 100 470 1500 10 30 360 370 30 360 10 30 230 360 5 10 200 210 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 0 0 0 0 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 530 230 390 640 950 430 750 1200 1600 930 1500 2100 2900 2400 4600 11000 24000 360 710 1500 13000 24000 48000 150 300 350 3

37、800 4400 4700 70 140 300 2100 2300 3800 40 70 150 1200 1300 3800 注1：本表采用3个稀释度1mL(g) 、0.1mL(g)和0.01mL(g)，每稀释度三管。 注2：表内所列检样量如改用10mL(g) 、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL、0.01mL和0.001mL(g)时，其余可类推。 3.试剂和仪器清单 3.1试剂清单 试剂名称 蔗糖 葡萄糖 D果糖 规格 500g 500g 25g 数量 2 2 2 乳糖 淀粉酶 胰蛋白酶 琼脂粉 牛肉膏 酵母膏 大豆蛋白胨 蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪

38、胨 植物蛋白胨 多胨 氢氧化钠 品红 异戊醇 乙醇 石蕊 乙醚 浓硫酸 甲基红 硫酸铜、 硫酸钾 硼酸 500g 250g 250g 100g 500ml 500ml 500ml 500ml 500ml 500g 500g 500g 500g 25g 500ml 500ml 25g 500ml 500ml 25g 500g 500g 250ml 2 2 4 2 2 3 2 2 4 4 4 4 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 溴甲酚绿 酚酞 盐酸 磷酸 25ml 25ml 500ml 500ml 2 3 3 2 3.2玻璃仪器清单 仪器名称 烧杯 规格 100 400 250 锥形瓶

39、 500 漏斗 分液漏斗 镊子 1 2 吸管 5 10 20 25 玻璃棒 灭菌刀或剪子 橡胶管 试管 烧瓶 酸、碱式滴定管 18*180 500 50 5 2 2 4 10 10 10 5 5 5 5 5 5 10 3 各3 需要量 10 4 10 10 50 量筒 100 250 500 温度计 酒精灯 表面皿 平皿 100 中号 90cm 10 50 容量瓶 100 250 500 2 2 5 5 2 5 5 5 100 4 5 10 5 2 3.3设备清单 仪器名称 双数显振荡培养箱 烘箱 高压蒸汽灭菌锅 干热灭菌器 自动菌落计数仪 型号 BS-1E型 SX2-2.5-10型 MLS-

40、3750型 MOV-112S 90L / AT型 迅数AS1型 数量 3 5 3 5 5 微生物采样器 卧式超低温保存箱 冰箱 生化培养箱 生物显微镜 干燥消毒箱 PH计 JWL-I型 MDF-293型 西门子KG23E671 SPX-250B 型 205L4014 XS2-3G401600X200414014 GRX20 5 5 0C-4C 1C，25C60C 3 2 3 3.4化验室的月试剂消耗量 例 ：以金黄色葡萄球菌检验中的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量计算，每次实验所消耗的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为225ml, 每周做一次检测项目的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为225ml,则每月使用的10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为量为900ml，规格为1000ml瓶，折合得使用10 %氯化钠胰酪