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1、实验一 实验室环境和人体表面的微生物检查实验1 实验室环境和人体表面的微生物检查 一、实验目的 1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。 2、 观察不同类群微生物的菌落形态特征。 3、 比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 4、体会无菌操作的重要性。 二、基本原理 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37温度下培养，12天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。
2、因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、实验器材 1、培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 2、溶液和试剂 无菌水 3、仪器和其他用品 平板，试管，灭菌棉签，试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔，接种环，标签纸，废液缸等。 四、实验操作 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备： 称量：准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。 熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量，用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积600ml。 调pH：用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节，直至溶液pH达到7.07.2。 分装：将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶
3、中加入6.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。 加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。 包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好，同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。 灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121，90min高压蒸汽灭菌。 搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50左右，将 试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。 2、倒平板： 点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部
4、，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入1520ml培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，共倒平皿18个。 3、微生物采集： 空气 将6个平板在实验室环境中移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中。5min后，将其中三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号，10min后，将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号。 桌面 用无菌水湿润棉签，用棉签在实验台
5、面擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。 洗手前 用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。 洗手后 用肥皂和刷子用力刷手，在水流中冲洗干净，干燥后用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、
6、组别、样品来源和编号。 硬币 用无菌水湿润棉签，用棉签擦拭硬币表面，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。 4、 微生物培养： 将每一组中编号为1的平板放在28环境培养箱中培养，将编号为2和3的平板放在37的环境培养箱中培养，时间为一周。 5、 菌落特征描述方法： (a) 大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。 (b) 颜色：黄色、金黄色、白色、乳白色、灰色、红色、粉红色等。 (c) 干湿：干燥、湿润、粘稠。
7、 (d) 形态:圆形、不规则等。 (e) 边缘：整齐、不整齐等。 (f) 表面：高度扁平、隆起、凹下。 五、实验报告 1、结果 菌落描述 样品、 样品、 样品 样品 样品来源 1-4-空10-3-37 1-4-空5-2-37 1-4-空10-3-37 1-4-空5-2-37 1-4-手后-3-37 1-4-手前-3-37 比较 菌落描述 大、白、干、圆、整齐、扁平 小、黄、干、圆、整齐、扁平 中、淡黄、湿、圆、整齐、隆起 大、乳白、湿、不规则、锯齿、扁平 小、白、湿、圆、整齐、外凸内凹 小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起 菌落数 3 4 1 1 1 1 记录人 李龙 商倩倩 泮力菁 汤艳楠 泮力
8、菁 吴彤 1-4-空10-37 1-4-空5-37 1-4-洗手前28 1-4-洗手后28 样品来源 1-4-空10-37 1-4-空5-37 1-4-洗手前28 1-4-洗手后28 相似菌 菌落数量 22 15 12 9 种类 6 6 4 6 样品来源 第1组 第2组 1-4-空5-2-37 1-4-空5-3-37 1-4-手前-2-37 1-4-手前-1-28 2、思考题 菌落数 4 1 1 1 菌落特征 小、黄、干、圆、整齐、扁平 小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起 列举23类微生物，说明它们在本实验条件下不能生长。 答：病毒，因为病毒必须寄生在其他活生物体内；厌氧细菌，肉膏蛋白胨琼脂培养
9、基不是无氧环境；极端环境下生存的细菌，因为肉膏蛋白胨培养基不能满足它们对环境的需求。 比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多，为什么？ 答：空气中的菌落数和菌落类型最多。因为细菌体积小、重量轻，很容易就悬浮于空气中，并且由于空气中含有很多的微粒，细菌往往会结合微粒形成泡团，这种泡团又可以从空气悬浮物中摄取水分和营养，使得细菌可以长期生存下去。 比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌，你认为是什么原因？ 答：洗手后细菌数量明显减少。人的一只手大约沾附有40多万个细菌，两只手发挥着无法替代的拿取接送等作用。被污染的手拿取食品去吃，病菌都是经过手接送进口中去的，可以说是“病经手入”。所以我们一定要经常洗手。因为自来水、肥皂和刷子上都会带有细菌，所以洗手后仍有少量细菌。 完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中？你如何体会“微生物既是我们的朋友又是我们的敌人？ 答：我已体会到我们生活在微生物的包围中，微生物给我们的生活带来了很多的好处，比如说，蒸馒头需要酵母菌、制酸奶需要乳酸菌、产生沼气需要沼气杆菌；同时微生物也给我们的生活带来了很多麻烦，一些微生物可以使人患病，比如炭疽杆菌、结核分枝杆菌、SARS病毒、艾滋病毒等等。所以说微生物既是我们的朋友又是我们的敌人。
