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1、实验二无菌操作技术实验报告实验二、无菌操作技术 一、实验目的： 1、掌握MS固体培养基的配制方法。 2、熟悉外植体材料的预处理，掌握其消毒和接种方法。 二、实验原理： 根据细胞全能性学说，对胡萝卜外植体脱分化培养。 三、实验仪器与材料： 仪器：高压灭菌锅、超净工作台、镊子、刀、酒精灯 材料：胡萝卜 四、实验步骤： MS固体培养基的配制配方单 外植体材料的预处理、消毒和接种 1、对植物材料进行适当的预处理。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。 2、用洗衣粉水浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 3、接种前准备工作，摆放工具及材料，开紫外灯灭菌。 4
2、、在超净工作台上，用70%酒精棉球擦手与器具外壁，即可对经上述预处理的植物材料进行表面灭菌处理，自此以后各步均须在超净工作台上操作。 5、在使用灭菌剂之前，先将植物材料浸于75%乙醇灭菌30秒，液面高度超出植物材料至少0.5 cm，然后用0.1%升汞浸泡5分钟。 6、在灭菌时间结束前1 min时，即可将灭菌剂慢慢倒入废物缸，注意勿使植物材料滑出。接着立即倒入适量无菌水，无菌水的清洗时间每次约3 min；清洗3-5次。 7、取出经上述灭菌处理的植物材料，置于无菌滤纸上，切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。 8、接种 用70%酒精清洗手及工作台 酒精灯下灼烧刀、镊子，放在支架上 切割外植体 在酒精灯前接种于培养基上，封口。 9、培养 五、结果： 统计植物材料表面灭菌结果；若染菌，分析污染原因。
