广东海洋大学微生物学考试.docx

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1、广东海洋大学微生物学考试绪论 -刘晓良 科赫氏法则：1.在每一病例中都出现相同的微生物，且在健康者体内不存在；2.要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中得到纯培养;3.用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生；4.从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物来。 曲颈瓶实验：巴斯德设计了一个既可允许空气自由进入容器又可阻止容器内肉汤“自然发生”生命的简便、巧妙的曲颈瓶，通过实验证实了肉汤腐败产生大量细菌的原因只有接种了来自空气中的微生物“胚种”。 试述微生物的多样性。 .物种的多样性。.生理代谢类型的多样性。微生物分解初级有机物的能力、微生物有最多样的产能方式、生物固氮作

2、用、合成次生代谢产物等各种复杂有机物的能力、对复杂有机分子集团的生物转化能力、分解有毒和剧毒物质的能力、抵抗极端环境的能力.代谢产物的多样性。遗传基因的多样性,生态类型的多样性。 微生物有哪五大共性？ 体积小，面积大。体积小面积大最基本，因为一个小体积大面积系统，必然有一个巨大的营养物质吸收面、代谢废物的排泄面和环境信息的交换面，并由此而产生其余4 个共性；.吸收多，转化快。为微生物的高速生长繁殖和合成大量代谢产物提供了充分的物质基础；.生长旺，繁殖快。但由于营养、空间和代谢产物等条件的限制，微生物的几何级数分裂速度充其量只能维持数小时而已；.适应强，易变异。微生物有极其灵活的适应性或代谢调节

3、机制。由于繁殖快，虽然其变异频率十分低，也可在短时间产生大量变异的后代；.分布广，种类多。分布广：土壤、空气、海洋、人体肠道。种类多：微生物的生理代谢类型多，代谢产物种类繁多。微生物因其体积小、重量轻和数量多等原因，可以到处传播。而且微生物的种类多造就物种的多样性、生理代谢类型的多样性、代谢产物的多样性、遗传基因的多样性和生态类型的多样性。 第一章 原核生物的形态、构造和功能 革兰氏染色法：通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞壁以内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。由于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的细胞壁结构和组成成分不同，因此再经沙黄等红色染料复染后，就能辨别G+菌和G-菌，这种方法叫

4、做革兰氏染色法。 肽聚糖：又称黏肽，是真菌细胞壁中的特有成分。 缺壁细胞：自然进化和实验室菌种自发突变形成缺细胞壁、人为抑制新生细胞壁的合成或对现有细胞壁进行酶解得到的细胞。 L型细胞：实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株。 异染粒：可用美蓝或甲苯胺蓝染成红紫色的一种细胞内含物。 羧酶体：是存在于一些自养细菌细胞内的多角形或六角形内含物，主要起CO2的固定作用。 糖被：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质。 荚膜：指在细胞壁上有固定层次的糖被组成部分。 基内菌丝：当放线菌的孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分枝并以放射状向基质表面和内层扩展，形成

5、大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝。 试图示G+和G-细菌细胞壁的主要构造，并简要说明其异同。 G+细菌与G-细菌的细胞壁都含肽聚糖和磷壁酸；不同的是含量的区别：如下表 成分 肽聚糖 磷壁酸 类脂质 蛋白质 占细胞壁干重的比例/% G+细菌 含量很高90% 含量较高 一般无 无 G-细菌 含量很低 无 含量较高 含量较高 1 一：G+菌和G-菌都含有肽聚糖，但肽聚糖的构造不同，G+有肽桥，而G-因含有m-DAP，故没有特殊的肽桥，肽聚糖网套稀疏。 二：G+菌细胞壁的主要成分是肽聚糖和磷壁酸，含少量或不含脂质和蛋白质，肽聚糖层厚，且层次多，而G-菌的主要成分则是脂质和蛋白质

6、，肽聚糖层薄且层次少。 三：G-菌细胞壁层次则相对于G+菌多，成分也复杂，机械强度弱于G+。 革兰氏染色机制、步骤及注意事项： 1、革兰氏染色的机制：通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞壁以内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。 G菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。 由于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的细胞壁结构和组成成分不同，因此再经沙黄等红色染料复染后，就能辨别G+菌

7、和G-菌。 步骤： 初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 脱色：将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约2030秒钟，立即用水冲净酒精。 复染：用番红液染12分钟，水洗。 镜检：干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 3、注意事项：1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色 2、染色过程勿使染色液干涸3、选用幼龄的细菌。 拴菌实验P29 试对G-细菌的鞭毛和螺旋体的周质鞭毛在结构、着生方式和运动特点等方面作一比较。 G-细菌的鞭毛 结构 基体，钩形鞘，鞭毛丝 基体，钩形鞘，鞭毛丝 着

8、生方式 周生 运动特点 直线运动，运动速度慢 螺旋体的周质鞭毛 螺旋方式缠绕在螺旋体细胞的表面 快速旋转 如何初步判断并进一步验证某一细菌是否长有鞭毛？长有何种鞭毛以及鞭毛是如何着生的？ 初步判断：观察其菌落边缘是否光滑，若较粗糙，可能有鞭毛。 验证：电镜观察；鞭毛染色法，在光学显微镜下观察；半固体穿刺培养；从培养基上的菌落形态判断；对细菌在其悬滴标本或水浸片的运动特点观察。 弧菌、螺菌类普遍着生鞭毛；在杆菌中，假单细胞菌都长有端生鞭毛，其余的都有周生鞭毛或不长鞭毛；球菌一般无鞭毛，仅个别属才长有鞭毛。 鞭毛的着生方式一般有：一端生；两端生；周生；侧生。 什么是菌落？试讨论微生物的细胞形态与菌

9、落形态间的相关性及其内在原因。 菌落即单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。 因不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映，故细菌的细胞形态与菌落形态间存在明显的相关性现象，如，无鞭毛、不能运动的细菌尤其是球菌通常都形成较小、较厚、边缘圆整的半球状菌落；长有鞭毛、运动能力强的细菌一般形成而平坦、边缘多缺刻、不规则的菌落；有糖被的细菌，会长出大型、透明、蛋清状的菌落；有芽孢的细菌往往长出外观粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶的菌落等等。 2 第二章 真核微生物的形态、结构和功能 单细胞蛋白：也叫微

10、生物蛋白，是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。其所含的营养物质极为丰富。 溶酶体：是由一种由单层膜包裹，内含多种酸性水解酶的小球形，囊泡状细胞器，主要功能是细胞内的消化作用，消化自身死亡蛋白质和外来异物。 假菌丝：酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝。 假根：是根霉属等低等真菌匍匐丝与固体基质接触处分化出来的根状结构，具有固着和吸取养料等功能。 吸器：真菌菌丝某处生出特殊形态的菌丝体或菌丝的变态物，伸入寄主体内吸取养分，这些变态物叫吸器。 附着胞：许多寄生于植物的真菌在其芽管或老菌丝顶端会发生膨大，分泌黏状物，借以牢固地黏附在

11、宿主的表面，此即附着胞。在其上再形成纤细的针状感染菌丝，以侵入宿主的角质表皮而吸取养料。 子实体：在气生菌丝里面或上面可产无性或有性孢子，有一定形状和结构的任何菌丝体组织。 锁状联合：形成喙状突起而连合两个细胞的方式不断使双核细胞分裂，从而使菌丝尖端不断向前延伸。 试列表比较真核生物和原核生物的10个主要差别。 比较项目 细胞大小 如有壁，其主要成分 细胞器 鞭毛结构 细胞膜含呼吸或光合成分 核膜 染色体数 氧化磷酸化部位 光合作用部位 繁殖方式 真核生物 较大 纤维素、几丁质等 有 如有，则粗而复杂 无 有 一般大于1 线粒体 叶绿体 有性、无性等多种 原核生物 较小 多数为肽聚糖 无 如有

12、，则细而简单 有 无 一般为1 细胞膜 细胞膜 一般为无性 原核生物与真核生物的鞭毛差异。 对于结构：细菌鞭毛包括三个部分：基体，钩型鞘，鞭毛丝。其中基体含4个盘状物，从外到内分别为L环P环S环M环，其中SM环连在一起，相当于马达转子，他的外侧有Mot蛋白包围作为定子。Mot蛋白蛋白中的跨膜质子通道引导膜外质子流入膜内，从而驱动SM环快速旋转。钩型鞘用于连接鞭毛丝和基体，它可以360旋转，使鞭毛加大运动幅度。鞭毛丝由鞭毛蛋白构成，含有中央孔道，鞭毛蛋白通过中央孔道在其游离端进行装配成鞭毛丝。 真核细胞的鞭毛主要由鞭杆和基体组成，当然也有连接他们的结构。其中鞭杆呈“9+2”型，即中央有两个中央微

13、管，外围绕一圈9个微管二联体，其中A管为完全微管，B管则是由10个亚基围绕成，另外3个亚基共用A管的。A亚纤维上还有两条动力蛋白壁，主要通过Ca+激活的ATP酶参与参与使鞭毛弯曲运动。同时在相邻二联体微管之间还存在连丝蛋白，在二联体微管与中央微管之间存在放射辐条。基体结构与鞭杆类似，不过它是“9+0”型，即没有中央微管，且外围是9个三联体微管。 对于运动机制：细菌鞭毛是利用质子流进行旋转驱动，即“旋转论”；而真核细胞的鞭毛是“挥鞭论”。 试对酵母菌的繁殖方式作一表解。 3 试以表解法介绍霉菌的营养菌丝和气生菌丝各可分化成哪些特化构造，并简要说明他们的功能。 特化结构 假根 匍匐菌丝 吸器 功能

14、 固着和吸取养料 延伸 吸取宿主细胞内的养料 牢固地黏附在宿主的表面 将菌丝附着于宿主体上 不良的外界条件下，保存数年的生命 促进菌体蔓延和抵御不良环境 捕捉线虫或其他微生物，吸其养料 产无性孢子 产有性孢子 产无性孢子 产有性孢子 营养菌丝附着胞 附着枝 菌核 菌索 菌环和菌网 结构简单的子实体 分生孢子头、孢子囊 担子 分生孢子器、分生孢子座、分生孢子盘 子囊果 试列表比较真菌孢子的类型、主要特点和代表种属。 孢子名称 游动孢子 孢囊孢子 染色体倍数 n 外形 圆、梨、肾形 近圆形 极多样 柱形 近圆形 近圆形 镰、豆、肾形 2n 2n n n 近圆形 近圆形 多样 近圆形 数量 多 多

15、极多 多 少 较多 少 1至几 1 一般8 一般4 外或内生 内 内 外 外 外 外 外 内 内 内 外 其他特点 有鞭毛，能游动 水生型有鞭毛 少数为多细胞 各孢子同时形成 在菌丝顶或中间形成 在酵母细胞上出芽形成 成熟时从母细胞射出 厚壁，休眠 厚壁，休眠，大，深色 长在各种子囊内 长在特有的担子上 菌丝状微生物 酵母菌 较湿 大而凸起 单个分散或假丝状 大而分化 稍透明 不结合 单调，一般呈乳脂或矿烛色，少数红色或黑色 放线菌 干燥或较干燥 小而紧密 丝状交织 细而均匀 不透明 牢固结合 十分多样 霉菌 干燥 大而疏松或大而致密 丝状交织 粗而分化 不透明 较牢固结合 十分多样 实例 壶

16、菌 根霉，毛霉 曲霉，青霉 白地霉 总状毛霉 假丝酵母 掷孢酵母 德氏腐霉 根霉，毛霉 脉孢菌，红曲 蘑菇，香菇 无性孢子分生孢子 芽孢子 厚垣孢子 芽孢子 掷孢子 卵孢子 接合孢子 子囊孢子 担孢子 含水状态 外观形态 相互关系 气生菌丝结构复杂的子实体 有性孢子试列表比较四大类微生物的细胞形态和菌落特征。 单细胞微生物 细菌 很湿或较湿 小而凸起或大而平坦 单个分散或有一定排列方式 小而均匀，个别有芽孢 透明或稍透明 不结合 多样 主要特征菌落细胞形态特征 菌落透明度 参考特征菌落与培养基结合程度 菌落颜色 4 菌落正反面颜色的差别 菌落边缘 细胞生长速度 气味 相同 一般看不到细胞 一般

17、很快 一般有臭味 相同 一般不同 一般不同 可见粗丝状细胞 一般较快 往往有霉味 可见球状，卵圆有时可见细丝状细状或假丝状细胞 胞 较快 多带酒香味 慢 常带泥腥味 第三章 病毒和亚病毒因子 噬菌斑：在双层平板固体培养基上，释放出的噬菌体引起平板上的菌苔点性感染，在感染点上进行反复的侵染裂解形成透明斑，称噬菌斑。 烈性噬菌体：噬菌体侵入细菌后，在细胞内进行复制，产生大量新的噬菌体粒子，并导致宿主迅速裂解的噬菌体。 裂解性周期：烈性噬菌体所经历的繁殖过程。 自外裂解：指大量噬菌体吸附在同一宿主细胞表面并释放众多的溶菌酶，最终因外在的原因而导致细胞裂解。 噬菌斑形成单位：每毫升试样中所含有的具侵染

18、性的噬菌体粒子数。 一步生长曲线：以培养时间为横坐标，噬菌斑数为纵坐标所绘制的，定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，称为一步生长曲线。 裂解量：平均每一宿主细胞裂解后产生的子代噬菌体数。 溶源性：温和噬菌体侵入相应宿主细胞后，由于前者的基因组整合到后者的基因组上，并随后者的复制而进行同步复制，因此，温和噬菌体的侵入并不引起宿主细胞裂解，此即溶源性。 溶源菌：凡能引起溶源性的噬菌体的宿主细菌。 温和噬菌体：凡能引起溶源性的噬菌体叫温和噬菌体。 前噬菌体：整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸称之为前噬菌体 溶源性周期：整合到宿主的核基因组上，以前噬菌体形式长期潜伏。 试图示并简介病毒的典型构造。

19、 病毒的核心为核酸病毒的衣壳为蛋白质，包围在核心周围核心和衣壳合称核衣壳病毒的包膜为一层含蛋白质或糖蛋白的类脂双层膜，覆盖着核衣壳。 什么是效价，测定噬菌体效价的方法有几种？最常用的是什么方法，其优点如何？ 效价表示每毫升试样中所含有的具有侵染性的噬菌体粒子数。 测定方法：双层平板法、电镜直接记数法、液体稀释法、玻片快速测定法和单层平板法。 最常用的是双层平板法。用双层平板法测出的效价比用电镜直接记数得到的效价低。前者是计有感染力的噬菌体粒子，后者是计噬菌体的总数。 5 病毒粒有哪几种对称体制？各种对称体制又有几种特殊外形？试各举一例。 简述用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的基本原理和主要操作步

20、骤。 基本原理：加了底层培养基后，弥补培养皿底部不平的缺陷；使所有的噬菌斑都位于近乎同一平面上，因而大小一致、边缘清晰且无重叠现象；又因上层培养基中琼脂较稀，故可形成形态较大、特征较明显以及便于观察和计数的噬菌斑。 主要步骤：预先分别配制含2%和1%琼脂的底层培养基和上层培养基。先用底层培养基在培养皿上浇一层平板，待凝固后，再把预先融化并冷却到45以下，加有较浓的敏感宿主和一定体积待测噬菌体样品上层培养基，在试管中摇匀后，立即倒在底层培养基上铺平待凝，然后在37下保温。一般经10余小时后即可对噬菌斑计数。 何谓一步生长曲线？它分几期，各期有何特点？ 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，称为一

21、步生长曲线。 1潜伏期：细胞内已经开始装配噬菌体粒子并可用电镜观察到 2裂解期：宿主细胞迅速裂解溶液中噬菌体粒子急剧增多。 3平稳期：感染后的宿主细胞已全部裂解，溶液中的噬菌体效价达到最高点。 什么是溶源菌，它有何特点？如何检出溶源菌？ 溶源菌是一类能与温和噬菌体长期共存，一般不会出现有害影响的宿主细胞。 特点：自发裂解，诱发裂解，免疫性，重复性，溶源转变 将少数的溶源菌与大量的敏感性指示菌相混合，再与琼脂性培养基混合后制一个平板，经培养后溶源菌就长成菌落。由于溶源菌在细胞分裂过程中有极少数个体会引起自发裂解，其释放的噬菌体可不断侵染溶源性细菌菌落周围的指示菌菌落，于是就形成一个个中央有溶源菌

22、的小菌落，四周有透明圈围着这种独特噬菌体。 第四章 营养：生物体从外部环境中摄取对其生命活动必需的能量和物质，以满足正常生长和繁殖需要的一种最基本的生理功能。 营养物：具有营养功能的物质，还包括非常规物质形式的光辐射能在内。 碳源：一切能满足微生物生长繁殖所需碳元素的营养源。 碳源谱：若把所有微生物当做一整体来考虑，其可利用的碳源范围。 能源：能为微生物生命活动提供最初能量来源的营养物或辐射能。 单功能营养物：只能做一种营养要素功能的营养物。 双功能营养物：可同时兼有两种营养要素功能的营养物。 单纯扩散、促进扩散、主动运送、基团移位P9293 三功能营养物、光能无机营养型、光能有机营养型、化能

23、无机营养型、化能有机营养型 培养基：P96 6 第五章 微生物的新陈代谢 呼吸：又称好氧呼吸，是一种最普遍又重要的生物氧化或产能方式。P114 发酵：它指在无氧等外源氢受体的条件下，底物脱氢后所产生的还原力未经呼吸链而直接交某一内源性中间代谢物接受，以实现底物水平磷酸化产能的一类生物氧化反应。P117 同型酒精发酵：即由EMP途径代谢产生的丙酮酸经过脱羧放出CO2，同时生成乙醛，乙醛接受糖酵解过程中释放的NADH+H+被还原成乙醇。这是一个低效的产能过程，大量能量仍然贮存于乙醇中。 异型酒精发酵：一些细菌能够通过HMP途径进行异型乳酸发酵产生乳酸、乙醇和CO2等。 Stickaland反应：以

24、一种氨基酸作底物脱氢，而以另一种氨基酸作氢受体而实现生物氧化产能的独特发酵类型。P122 “Park”核苷酸：即UDP-N-乙酰胞壁酸五肽。首先是谷氨酸作为氨的供体，乙酰CoA提供乙酰基，构成NAG-1-P，随后由UTP活化形成UDP-NAG。如果是同PEP起反应则形成UDP-NAM。随后一个五肽化合物连接到细胞壁的乳酰基上，形成UDP-NAM-五肽，合成“Park”核苷酸。P142 细菌萜醇：是一种含11个异戊二烯单位的C55类异戊二烯醇，它可通过2个磷酸基与N-乙酰胞壁酸分子相接，使糖的中间代谢产物呈现出很强的疏水性，从而使它能顺利通过疏水性很强的细胞膜而转移到膜外。P143 青霉素为何只

25、能抑制代谢旺盛的细菌?其抑制机制如何？ 青霉素和转肽酶两者可以相互竞争转肽酶的活力中心。转肽酶一旦被青霉素结合，前后2个肽聚糖单体间不能形成肽桥，因此合成的肽聚糖是缺乏机械强度的“次品”，由此产生了原生质体或球状体之类的细胞壁缺损细菌，当它们处于不利的环境下时，极易裂解死亡。 因为青霉素的作用机制是抑制肽聚糖分子中肽桥的生物合成，因此对处于生长繁殖旺盛阶段的细菌具有明显的抑制作用，相反，对处于生长停滞状态的休止细胞，却无抑制作用。 试列表比较呼吸、无氧呼吸和发酵的特点。 Stickland反应存在于哪些微生物中？反应的生化机制如何？ 多见于厌氧梭菌中，如：生孢梭菌、肉毒梭菌和斯氏梭菌等 7 试

26、用简图描绘肽聚糖合成的3个阶段，并指出其中有哪些代谢抑制剂及其作用部位。 抑制因子 抑制部位 环丝氨酸 细胞质中Park核苷酸过程中合成D-丙胺酰-D-丙氨酸两步反应 万古霉素 细胞膜上由太聚糖类脂到磷酸类脂的过程 杆菌肽 细胞膜上由二磷酸类脂脱Pi生成一磷酸类脂的过程 青霉素 细胞膜外转肽酶的转肽作用过程 第六章 微生物的生长及其控制 平板菌落计数法：可用浇注平板、涂布平板或滚管法等方法进行。此法适用于各种好氧菌或厌氧菌。其主要操作是把稀释后的一定量菌样通过浇注琼脂培养基或琼脂平板上涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个单菌落，根据每皿上形成的c

27、fu数乘上稀释度就可推算菌样的含菌数。P152 cfu：把稀释后的一定量菌样通过浇注或涂布的方法，让微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一个活细胞形成一个单菌落。 生长速率常数：每小时细胞分裂的次数。 代时：生长速率常数的倒数。细胞分裂一次所需的时间。 连续培养：微生物接种到培养基里以后的整个生长期间，微生物能持续地以比较恒定的生长速率常数进行生长，从而导致微生物的生长过程能“不断”地进行下去的一种培养方法。 单批培养：将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后，终止培养。 8 生长温度三基点：微生物最低生长温度、最适生长温度和最

28、高生长温度。 灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。 消毒：采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动、植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。 微生物的生长与繁殖间的关系如何？研究它们的生长繁殖有何理论与实践意义？ 如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量就不断增加，于是出现了个体细胞的生长。 如果这是一种平衡生长，即各种细胞组分是按恰当比例增长时，则达到一定程度后就会引起个体数目的增加，对单细胞的微生物来说，这就是繁殖。 随着群体中各个个体的进一步生长、繁殖，就引起了这一群体的生长。 个体生长个体繁殖群体生长

29、群体生长=个体生长+个体繁殖 意义：微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下生理、代谢等状态的综合反映，因此，有关生长繁殖的数据就可作为研究多种生理、生化和遗传等问题的重要指标；同时，微生物在生产实践上的各种应用或是人类对致病、霉腐等有害微生物的防治，也都与它们的生长繁殖或抑制紧密相关。 平板菌落计数法有何优缺点？试对浇注平板法和涂布平板法作一比较。 优点：最为常用，适用于各种好氧菌或厌氧菌。 缺点：操作较繁琐且要求操作者技术熟练。 浇注平板法：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。但不能计数。一般用于菌种分离提纯。 涂布平板法：可以计数，可以观察菌落特征。但吸收量少，较麻烦。一般用于平

30、板培养基的回收率计数。 延滞期有何特点？实践上如何缩短它？ 特点：生长速率常数为零；细胞形态变大或增长，许多杆菌可长成丝状；细胞内的RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性；合成代谢十分活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加速，易产生各种诱导酶；对外界不良条件如NaCl溶液浓度、温度和抗生素等理、化因素反应敏感。 影响因素： 接种龄 指接种物或种子的生长年龄，亦即它生长到生长曲线上哪一阶段时用来作种子。以指数期接种龄的种子接种，则子代培养物的延滞期就短；反之，如以延滞期或衰亡期的种子接种，则子代培养物的延滞期就长；如果以稳定期的种子接种，则延滞期居中。 接种量 接种量大，则延滞期短，反之则长。

31、 培养及成分 接种到营养丰富的天然培养基中的微生物，要比接种到营养单调的组合培养基中的延滞期短。 种子损伤度 若用于接种的细胞曾被加热、辐射或有毒物质损伤过，就会因修复损伤而延长延滞期。 指数期有何特点？处于此期的微生物有何应用？ 特点：生长速率常数R最大，因而细胞每分裂一次所需时间代时或原生质增加一倍所需的倍增时间最短；细胞进行平衡生长，故菌体各部分的成分十分均匀；酶系活跃，代谢旺盛。 指数期尤其是处于指数期中期的微生物因其具有整个群体的生理特征较一致、细胞各成分平衡增长和生长速率恒定等优点，故是用作代谢、生理和酶学等研究的良好材料，是增殖噬菌体的最适宿主，也是发酵工业中用作种子的最佳材料。

32、 稳定期有何特点？稳定期到来的原因有哪些？ 特点：生长速率常数R为零，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或正生长与负生长相等的动态平衡之中。这时的菌体产量达到最高点，而且菌体产量与营养物质的消耗间呈现出有规律的比例关系。 稳定期到来的原因：营养物尤其是生长限制因子的耗尽；营养物的比例失调；酸、醇、毒素或H2O2等有害代谢产物的累积；pH、氧化还原电势等物理化学条件越来越不适宜。 什么是高密度培养？如何保证好氧菌或兼性厌氧菌获得高密度生长？ 微生物的高密度培养有时也称高密度发酵，一般是指微生物在液体培养条件下细胞群体密度超过常规培养10倍以上时的生长状态或培养技术。 选取最佳培养基成分和各

33、成分含量；适时补料；提高溶解氧的浓度；防治有害代谢产物的生成；保持合适的pH。 9 第七章 微生物的遗传变异和育种 饰变：指外表的修饰性改变，意即一种不涉及遗传物质结构改变而只发生在转录、翻译水平上的表型变化。 大肠杆菌素：大肠杆菌分泌的一类细菌素，对于其他不能分泌特异性大肠杆菌素免疫蛋白的近缘细菌具有杀灭作用，在一般认为有调节菌群数量的作用。 营养缺陷型：野生型菌株经诱变剂处理后，由于发生了丧失酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长，这类突变菌株称为营养缺陷型突变株，或简称营养缺陷型。 变量实验、涂布试验、影印平板试验 影印平板试验：通过固体培养基表面“盖印章”的接种

34、方式，达到在一系列培养皿平板的相同位置上出现相同遗传型菌落的接种和培养方法。 埃姆斯试验：利用细菌营养缺陷型的回复突变来检测环境或食品中是否存在化学致癌剂的简便有效方法。 基本培养基：仅能满足某种微生物的野生型菌株生长所需要的最低成分的组合培养基，称基本培养基。 完全培养基：凡可满足某微生物一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基，称完全培养基。 补充培养基：凡只能满足相应的营养缺陷型突变株生长需要的组合或半组合培养基，称补充培养基。 野生型：基因或生物体在自然界中常见的或非突变型的形式。 原养型：一般指营养缺陷性突变株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上与野生型相同，遗传型

35、均用A+B+来表示。 生长谱法：是指在混有供试菌的基本培养基平板表面点加微量营养物，视某营养物的周围有否长菌来确定该供试菌的营养要求的一种快速、直观的方法。 转化：P217 感受态：是指受体细胞最容易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态。 转导：通过缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞中的小片段DNA携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象。 普遍转导、完全转导P219 缺陷噬菌体：能完成侵入但不能完成噬菌体正常生活史的噬菌体。 普遍转导：通过极少数完整缺陷噬菌体对供体菌基因组上任何小片段DNA进行“误包”，而将其遗传性状传递给受体菌的现象。 局限转导：指通过部分缺陷

36、的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中，并与后者的基因组整合、重组，形成局限转导子的现象。 溶源转变：当正常的温和噬菌体感染其宿主而使其发生溶源化时，因噬菌体基因整合到宿主的核基因组上，而使宿主获得了除免疫性外的新遗传性状的现象。 准性生殖：是一种类似于有性生殖，但比它更为原始的两性生殖方式，这是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，他可不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。 衰退：P231 复壮：狭义的复壮仅是一种消极的措施，指的是在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型形状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，已达到恢复原菌株固定有性状的

37、相应措施；而广义的复壮则应是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。 诱变育种的基本步骤有哪些？关键是什么？何故？ 出发菌株培养液细胞或孢子悬液诱变处理平板分离 初筛 复筛保藏及扩大试验 10 关键是出发菌株的选择和诱变方法的选择。因为这些都决定诱变的效果和方向。 试以梯度平板法来说明定向培育抗药性菌株的原理，并说明为何不能把定向培育说成是“定向变异”。 梯度平板是一种含有某药物的梯度浓度的琼脂培养基平板，它由含药物的上半个斜面和不含药物的下半个斜面分两次浇合而成。通过制备琼脂表面存在药物浓度的平板在

38、其上涂布诱变处理后的细胞悬液经培养后再从上选取抗药性菌落等步骤，就可定向筛选到相应抗药性突变株。在筛选抗代谢药物的抗性菌株以取得相应代谢物的高产菌株方面，此法能达到定向培养的效果。 定向变异就是按照人的意愿通过一定的技术手段(主要是基因工程)让生物朝人的需要进行的变异。但是在定向培养中的变异是不定向的，是不可人为控制的。 试用表解法概括一下筛选营养缺陷型菌株的主要步骤和方法。 筛选步骤如下： 1）诱变剂处理，与一般诱变处理相同； 2）淘汰野生型：通过抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株，从而达到浓缩极少数营养缺陷型的目的； 3）检出缺陷型：有夹层培养法，限量补充培养法，逐个检出法，

39、影印平版法； 4）鉴定缺陷型，可借生长谱法进行。 抗生素法和菌丝过滤法为何能“浓缩”营养缺陷型菌株？ 抗生素法有青霉素法和制霉菌法等数种。青霉素法适用于细菌，原理是青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，因而可杀死能正常生长繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌，从而达到“浓缩”后者的目的。制霉菌法适用真菌，原理是制霉菌能与真菌细胞膜上甾醇作用，从而引起膜的损伤。因为它只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌等真菌，故也可用于淘汰相应的野生型菌株和“浓缩”营养缺陷型菌株。 菌丝过滤法适用于进行丝状生长的真菌和放线菌，原理是在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则

40、不能。因此，将诱变剂处理后的大量孢子放在基本培养基上培养一段时间后，再用滤孔较大的擦镜纸过滤。如此重复数遍后，就可去除大部分野生型菌株，从而达到了“浓缩”营养缺陷型的目的。 什么叫准性生殖？试以荨麻青霉为例，说明利用准性生殖进行半知菌类真菌杂交育种的一般操作。 准性生殖是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，它可不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。 1）选择亲本。即选择来自不同菌株的合适的营养缺陷型作为准性杂交的亲本。2）强制异合。即用人为的方法强制两个营养缺陷型的亲本菌株形成互补的异核体。3）移单菌落。将平板上长出的单菌落移种到基本培养基 的斜面上。4）验稳定性。指设法检验获得

41、的菌株究竟是一种不稳定的异核体，还是稳定的杂合二倍体。5）促进变异。6）选出良种。 第八章 微生物的生态 正常菌落：生活在健康动物各部位、数量大、种类较稳定、一般能发挥有益作用的微生物种群。 条件致病菌：某种特定条件下可致病的细菌。 共生：指两种生物共居在一起，相互分工合作、相依为命，甚至形成独特结构，达到难分难解、合二为一的极其紧密的一种相互关系。 寄生：一般指一种小型生物生活在另一种较大型生物的体内或体表，从中夺取营养并进行生长繁殖，同时使后者蒙受损害甚至被杀死的一种相互关系。 拮抗：又称抗生，指由某种生物所产生的特定代谢产物可抑制他种生物的生长发育甚至杀死它们的一种相互关系。 捕食：指一

42、种大型的生物直接捕捉、吞食另一种小型生物以满足其营养需要的相互关系。 混菌培养:将两种或数种微生物混在一起培养，以获得更好效果的培养方法。 生化需氧量：指1L污水或待测水样中所含的一部分易氧化的有机物，当微生物对其氧化、分解时，所消耗的水中溶解氧毫克数。 化学需氧量：指1L污水中所含的有机物在强氧化剂将它氧化后，所消耗氧的毫克数。 11 一杯清水，一杯自来水放在阳台上，两者微生物的变化？ 最初，微生物数量较少，主要是清水型水生微生物，当中以化能自养微生物和光能自养微生物为主。 然后，水型水生微生物数量上升后下降，而腐败型水生微生物数量上升。 最终，变成主要是败型水生微生物为主，有各种肠道杆菌、

43、芽孢杆菌、弧菌和螺菌等 清水最初基本无微生物，然后微生物数量上升，其中主要是清水型水生微生物，再然后. 第九章 传染与免疫 外毒素：指在病原细菌生长过程中不断向外界环境分泌的一类毒性蛋白质，有的属于酶，有的属于酶原，有的属于毒蛋白。 类毒素：若用0.3%0.4%甲醛溶液对外毒素进行脱毒处理，可获得失去毒性但仍保留其原有免疫原性的生物品。 内毒素：是G-细菌细胞壁外层的组分之一，其化学成分是脂多糖。 补体：存在于正常人体或高等动物血清中的一组非特异性血清蛋白。 干扰素：是高等动物细胞在病毒或dsRNA等干扰素诱生剂的刺激下，所产生的一种具有高活性、广谱抗病毒等功能的特异性糖蛋白。 免疫应答：一类

44、发生在活生物体内的特异性免疫的系列反应过程。 细胞免疫：指机体在抗原刺激下，依赖胸腺的T细胞发生增殖、分化，进而直接攻击靶细胞或间接地释放淋巴因子的免疫作用。 体液免疫：指机体受抗原刺激后，B细胞进行增殖并分化为浆细胞，由它合成抗体并释放到体液中以发挥其免疫作用。 胸腺依赖性抗原：包括血细胞、血清成分、细菌细胞核其他可溶性蛋白等在内的多数抗原。 非胸腺依赖性抗原：指它在刺激机体产生抗体时，不需要T细胞辅助的抗原或是对T细胞依赖程度很低的抗原。 T细胞表面标志：包括表面受体和表面抗原两类。 抗原：是一类能诱惑机体发生免疫应答并能与相应抗体或T淋巴细胞受体发生特异性免疫反应的大分子物质。 半抗原：

45、缺乏免疫原性而有免疫反应性的抗原物质。 抗原决定簇：位于抗原表面可决定抗原性的特异性的特定化学基团，亦即指构成抗原的免疫原性所必需的最少亚单位数。 初次免疫应答、再次免疫应答P306 抗原结合价：凡能与抗体相结合的抗原决定簇的总数。 免疫交叉反应：在细菌细胞中存在多种抗原，由于甲、乙两菌存在共同抗原而引起的甲菌抗原与乙菌抗体间发生较弱的免疫反应的现象。 克隆选择学说：澳大利亚免疫学家F.M.伯内特于XX年提出的抗体形成理论。在高等动物体内，天生存在着大量具有不同抗原受体的免疫细胞克隆每细胞表面仅一种特异性抗原受体，它的存在受遗传基因控制。某一特定抗原进入机体，就可与相应淋巴细胞表面上唯一的一个

46、与其相应的特异性受体发生结合。生物处于胚胎期时，若某一淋巴细胞克隆接触相应抗原(不论外来抗原或自身抗原)，则它会被消除、排除或受抑制，形成禁忌细胞，它们对机体自身抗原物质不发生免疫应答，即处于天然耐受状态。禁忌克隆可复活或发生突变，从而又可成为能与自身抗原成分起免疫应答的克隆。 免疫耐受性：当生物处于胚胎期时，若某一淋巴细胞克隆接触相应抗原(不论外来抗原或自身抗原)，则它会被消除、排除或受抑制，形成禁忌细胞，它们对机体自身抗原物质不发生免疫应答，即处于天然耐受状态。 什么是免疫应答？由TD抗原和TI抗原引起的免疫应答反应有何不同？试加以说明。 免疫应答是指一类发生在活生物体内的特异性免疫的系列反应过程。这是一个从抗原的刺激开始，经过抗原特异性淋巴细胞对抗原的识别，使淋巴细胞发生活化、增殖、