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1、微免实验复习整理微免实验整理 实验一 大吞噬现象、小吞噬现象 吞噬功能的测定计数方法： 吞噬百分率:计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。 吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计数被吞噬的细菌总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。 大吞噬现象要认识“巨噬细胞” 小吞噬现象主要认识“中性粒细胞” 实验二 淋巴细胞转化试验 1、原理：T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下，向母细胞转化。促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。转化百分率正常值为70%左右 2、分裂相：即染色体型 3、母细胞：较小淋巴细胞大4-5倍；核质疏松呈网状结构，有1-3个核仁；核周透
2、明区；胞浆嗜碱性，有空泡 4、过渡型：较小淋巴细胞略大；核质略疏松；着色较淡 5、小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少 6、意义：体外淋巴细胞转化反应，可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。 E玫瑰花环实验 1、原理：T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞 2、判定结果：凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性 血清学反应 1、基础：抗原决定簇抗体的互补决定区 第 1 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 2、特点：特异性、可逆性、 比例性、阶段性 3、抗原抗体反应因素：电解质、温度、酸碱度 4、抗原或抗体的检测方
3、法：凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术 I 凝集反应： 概念：抗原 + 抗体 = 凝集团块 直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体 = 凝集团块 直接凝集反应玻片凝集反应 定性；用已知抗体检测颗粒性抗原；细菌的诊断和分型，红细胞ABO鉴定 出现白色凝集块，属于阳性反应 直接凝集反应试管凝集反应 间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体 = 凝集团块 反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原 = 凝集团块 协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原 = 凝集团块 II 沉淀反应： 概念：可溶性抗原 + 抗体 = 沉淀物 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置
4、打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量 双向琼脂扩散 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分 对流免疫电泳 在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。 火箭电泳：抗原定量试验 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。 III 直接凝集反应玻片凝集 第 2 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 实验三 补体结合实验 中
5、和反应实验：略 免疫标记技术： 1、概念：将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 2、原理：免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素与特异性抗体以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。 3、常用的标记物有： 酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。 第 3 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 E L I S A 1、原理：把抗原
6、抗体的免疫反应和酶的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。 2、方法：主要有间接法和双抗体夹心法。 革兰染色 1、意义：对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。 2、原理：与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 阴性红色 阳性蓝色 细菌学总论 细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米作为测量单位。 细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。 不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1m，杆菌长25m，宽0.31m。 细菌
7、的特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛 毒力试验：鉴定分离出的细菌能否产生外毒素 方法：在含血清的琼脂平板中央贴上一条浸有白喉抗毒素血清的滤纸条，将待检菌垂直划过滤纸条接种 现象：如产生外毒素，则产生白色沉淀线 本质：抗原抗体沉淀实验 细菌划线分离、药物敏感试验、抗酸染色方法 第 4 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 实验四 细菌生长情况 液体培养基 沉淀生长、混浊生长、表面生长 半固体培养基 混浊生长、线状生长 固体培养基 菌落、菌苔 细菌变异 1、菌落变异 S型菌落(Smooth)光滑菌落 表面光滑有光泽，边缘整齐。 第 5 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 R型菌落 (R
8、ough) 粗糙菌落 表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。 菌落变异是由于菌体本身起变化。一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。 2、鞭毛变异细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。 细菌色素 金黄色葡萄球菌产生脂溶性金黄色色素 铜绿假单胞菌产生水溶性绿色色素 细菌生化反应 实验五 化脓性球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、淋球菌 甲型乙型丙型溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌 1、甲型 草绿色，不完全溶血 2、乙型 透明完全溶血 3、丙型 不溶血 4、肺炎链球菌G+ 5、淋病奈瑟菌G- 6、其中，链球菌的致病：扩散因子使脓液稀释扩散。 第 6 页 共 11 页 整理by陆 微
9、免实验整理 白喉杆菌G+ 下面图片的Eleck平板写错了，正确是Elek平板 第 7 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 结核杆菌 菜花样 实验六 肥达反应 1、概念：用已知的伤寒沙门菌菌体抗原和鞭毛抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 2、结果判断： 第 8 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 3、血清学诊断：肥达反应 原理：用已知伤寒沙门菌的O、H抗原、甲、乙副伤寒沙门菌的H抗原与患者血清做定量凝聚试验，根据抗体效价的增长，辅助肠热症的临床诊断。 用途：辅助诊断伤
10、寒、副伤寒 方法：试管凝集法 当TO1：80，TH1：160，PA、PB均1：80才有意义 动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义 临床意义：辅助诊断伤寒和副伤寒 O抗体， H抗体 * * * * O 、H抗体均升高，患伤寒的可能性大 O 、H抗体不升高，患伤寒的可能性小 只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应， 只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。 分析结果时应注意： 正常人抗体水平。一般伤寒杆菌O抗体效价在1：80以上，H抗体效价在1：160以上，甲、乙副伤寒杆菌H抗体效价在1：80以上才有诊断价值； 动态观察：一般随病程延长第2次检测抗体效价比第1次高
11、4倍或4倍以上才有诊断意义。区别H、O抗体增高的意义：两者同时升高有辅助诊断意义；两者同时低于正常无意义；O 抗体效价高而H抗体效价低，可能是感染的早期或其他沙门菌感染引起的交叉反应。若H抗体效价高而O抗体效价在正常范围内，则可能是以往接种过疫苗或非特异性回忆反应所致。 肠道杆菌 G- 生化反应表 第 9 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 炭疽杆菌G+ 霍乱弧菌G- 厌氧芽孢梭菌 1.破伤风梭菌G+ 2.产气荚膜梭菌G+ 3.肉毒梭菌G+ 第 10 页 共 11 页 整理by陆 微免实验整理 产气荚膜梭菌 培养特性： 血琼脂平板上，双层溶血环； 内环溶血，外环溶血 蛋黄琼脂平板上，有
12、Nagler反应现象； 菌落周围出现乳白色浑浊圈，是由于毒素分解卵磷脂所致； 代谢活跃，分解多种糖类，产生大量气体 疱肉培养基培养，可分解肉渣中糖类产气，肉渣呈淡红色 牛奶培养基中，可出现“汹涌发酵” 该菌分解乳糖产酸，使牛奶中的酪蛋白凝固，产生大量气体冲散酪蛋白，并将封固液面的凡士林层顶开，甚至冲掉试管口棉塞 实验七 白色念珠菌G+ 可见酵母样细胞伴假菌丝。 新型隐球菌 可见圆形菌体及荚膜、芽生孢子。 病毒的致细胞病变作用 许多病毒在细胞内复制增中，由于干扰细胞的正常代谢和损伤细胞结构，引起细胞形态的变化，如细胞皱缩、出现空泡、斑块、融合、变圆或坏死的现象，此种在光学显微镜下可观测到现象称病毒的致细胞病变作用 包涵体 胞浆、胞核内出现的圆形或椭圆形、嗜酸或嗜碱性的小体 狂犬病毒包涵体内基小体 第 11 页 共 11 页 整理by陆
