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1、Company Logo,要求,熟悉网织红细胞染色的原理及形态学特点，掌握计数方法，了解注意事项和临床应用。学会镜下辨认血小板的形态，掌握血小板计数的方法和参考值，了解注意事项及临床应用。,Company Logo,红系祖细胞,原红,早幼红,中幼红,晚幼红,网织红,红细胞,一、网织红细胞计数,骨髓,外周血,网织红细胞（reticulocyte,Ret）是有核红细胞转向无核到完全成熟红细胞的过度型细胞，其胞质中尚残留部分嗜碱性物质(核糖体和核糖核酸)，能被煌焦油蓝、灿烂甲酚蓝、中性红等活体染料染色。根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将其分为四型：I型(丝球型)，沉淀颗粒呈致密结块的网织红细胞；型
2、(网型)，沉淀颗粒呈疏松结构；型(破网型)，沉淀颗粒呈散在结构；在外周血中仅占0.15%型(点粒型)，沉淀颗粒呈少数散在分布。多见于外周血，60%以上,Company Logo,Company Logo,(一)染色原理 网织红细胞内RNA的磷酸基（带负电荷）能与溴甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基（带正点荷）结合，形成核酸与碱性染料复合物的蓝黑色多聚颗粒，其颗粒又联缀成线状甚至网状。凡含有两个以上深染颗粒（或具有线网状结构）的无核红细胞，即为网织红细胞。,Company Logo,(二)试剂煌焦油蓝染液（1%）煌焦油蓝 1g枸橼酸钠 0.4g氯化钠 0.85g蒸馏水加到100ml，充分溶解
3、过滤备用。,Company Logo,（三）操作 显微镜计数法 2d染料+2d全血（1：1）混匀后染15min，倾少许玻片上，制备薄膜片，晃动玻片使迅速干燥，低倍镜浏览全片，选细胞分布均匀无重叠染色良好部位，油镜下观察1000个红细胞中网织红细胞数目。参考范围 成 人：0.0080.02 新生儿：0.020.06其它方法：网织红细胞计数仪荧光激活细胞术流式细胞术,Company Logo,Company Logo,（四）注意事项1、红细胞必须含两个或两个以上蓝色颗粒，且无需微调显微镜即可见。颗粒必须远离细胞边缘，以免与变性珠蛋白小体混淆。2、染色时间必须充分，当室温较低时，需适当延长染色时间或
4、置37水浴箱内。3、制片应厚薄适宜，否则会造成网织红细胞分布不均。4、网织红细胞体积较大，常在血膜尾部和两侧较多，计数应该兼顾。5、复染会使网织红数值降低，因此不采用瑞氏染料复染，用二甲苯擦涂片也会使结果降低。6、染料配制必须祛除沉渣。,Company Logo,方法学评价,显微镜法可直接观察细胞形态，不需特殊仪器，其中试管法操作简便，重复性较好，被列为手工网织红细胞计数的参考方法但工作效率不高，实验精密度低。受主观因素影响较多，且耗时费力。仪器法 测定快速，重复性好，避免主观因素，易于标准化，测量细胞多，精确性高。根据荧光强度可反映网织红细胞幼稚程度，并计算出网织红细胞成熟指数 但幼稚白细胞
5、、晚幼红细胞及巨大血小板等可干扰计数结果，仪器价格贵，试剂成本较高。,Company Logo,临床应用,网织红细胞计数是反映骨髓红细胞造血功能的重要指标 网织红细胞计数增多 溶血性贫血 放疗化疗后，造血恢复 贫血治疗有效时 脾功能亢进 红细胞生成素治疗后 骨髓移植功能良好的指标 网织红细胞计数降低 再生障碍性贫血 慢性病性贫血，如恶性肿瘤、慢性肾衰、内分泌疾病等,Company Logo,二、血小板计数,（一）原理将血液用适当的稀释液稀释后，充入计数池中，计数一定体积内血小板的数目，再换算成每升血液中的血小板数。（二）试剂与器材分为破坏红细胞稀释液：如草酸铵溶液 不破坏红细胞稀释液：如红细胞
6、稀释液 血细胞计数板,Company Logo,（三）操作步骤1、2ml红细胞稀释液2、采集10ul末梢血，充分混匀3、混匀的血小板悬液充池，静置10min，高倍镜下计数中央大方格的血小板数。4、计算：N*10*200*106/L参考范围（100-300）*109/L,Company Logo,Company Logo,（四）注意事项1、针刺应稍深，保证采血顺畅，忌挤压，操作要迅速，无需擦掉第一滴血，若同时做其他实验时，先做血小板计数。2、所用器材和稀释液必须清洁，无菌无尘。器材应标准化3、血小板易聚集，充池前应充分混匀但不能用力太大，会破坏血小板4、待血小板下沉后再计数，否则结果偏低5、应在
7、1h内计数完毕，否则结果偏低6、注意血小板与杂质、结晶等区别。7.检查前，应避免服用影响到血小板功能的药物,Company Logo,（五）方法学评价,目视显微镜法 不需特殊仪器，操作简便，成本低，但影响因素较多，耗时费力。血细胞分析仪法 重复性好，测定速度快，适用于临床应用。目前血细胞分析仪逐步普及，一般均以全血作为标本。但由于血细胞分析仪不能完全将血小板与其他类似大小的物质(如红细胞或白细胞碎片、灰尘等杂物)区别开来，因此计数结果有时仍需显微镜目视计数法来作校正。,Company Logo,（六）临床意义,1生理性 正常人血小板数1d内可有6%10%的变化，表现为 早晨较低，午后较高；春季
8、较低，冬季略高；平原较低，高原较高；月经前较低，月经后较高；妊娠中晚期升高，分娩后即降低；运动后升高，休息后恢复；静脉血比毛细血管血高10%。,Company Logo,2病理性（1）血小板减少：血小板数量低于100109/L，原因：血小板生成障碍：如再障、巨幼贫、急白、骨髓纤维化、放射线损伤；血小板破坏增加：如ITP、脾亢；血小板消耗增多：如DIC、TTP、SLE、输血后血小板减少症 血小板分布异常：如脾肿大（肝硬化）、血液被稀释（输入大量库存血或血浆）,Company Logo,（2）血小板增多：数量超过400109/L。原因：骨髓增生性疾病：如原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、慢性粒细胞白血病；急性大出血、急性溶血；脾切除后；感染及炎症性疾病：如骨髓炎、结核病、急性风湿热、类风关肿瘤；不明原因的血小板增高标本中，约50来自恶性疾病患者其他：外科手术或创伤后、肾上腺皮质醇增多症、肾病综合征,
