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1、,实验五,白细胞分类计数,一、实验目的,掌握显微镜外周血白细胞分类计数（,DLC,）的,方法；,掌握外周血各类白细胞的正常形态。,二、实验原理,将血液制成细胞分布均匀的血涂片，,用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特,点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。,通常计数,100,个白细胞，计算得出各种白,细胞所占的百分率。,三、实验器材与试剂,器材：,显微镜，香柏油，擦镜纸，清洁液,试剂：,Wright,染液。,四、实验标本：,制备良好的血涂片,五、操作步骤,1.,制备血涂片：,按照正确的操作方法制备血涂片,2.,染色：,用,Wright,染液对血涂片染色，冲洗干净，,自然干燥后备用,。,3.,低倍镜
2、观察：,低倍镜下观察全片，包括白细胞飞分,布和染色情况。,4.,油镜观察：,选择血涂片体尾交界处细胞分布均,匀、着色良好的区域，滴加,1,滴香柏油，按一定,的方向顺序对所见到的每个白细胞进行分类，并,用白细胞分类计数器做好记录，共计数,100,个白,细胞。,5.,计算：,求出各类白细胞所占的百分率。,6.,报告方式：,百分率（,%,）。,六、参考区间,WBC,百分率,（,%,）,绝对值（,10,9,/L,）,中性杆,Nst,15 0.040.50,中性分,Nsg,5070 2.007.00,嗜酸性,E,0.55 0.050.50,嗜碱性,B,01 00.10,淋巴,L,2040 0.804.0
3、0,单核,M,38 0.120.80,七、注意事项,1.,计数区域：以体尾交界处最佳。,2.,分类方法：遵循一定的方向，以“城垛式”连续,进行，避免主观选择视野；结果的记录可采用计数,器、手工画“正”字或“+”。,3.,计数的白细胞数：白细胞总数在（,3.0,15.0,）,10,9,/L,之间者，分类计数,100,个白细胞；总数在,15.0,10,9,/L,以上时，计数,200,个；总数低于,3.0,10,9,/L,时，应选用两张血涂片计数,50,100,个白,细胞。,4.,计数结果：用各类白细胞的百分率乘以白细胞总数，,即可求得每升血液中各类白细胞数量的绝对值。,5.,血涂片中有有核红细胞时
4、，应逐个计数，但不计入,100,个白细胞内，以分类,100,个白细胞过程中见到的有,核红细胞个数来报告，并注明其所属阶段。,6.,分类中还应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、,染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及,其他异常所见。,外周血各类白细胞的正常形态,白细胞,粒细胞,淋巴细胞,单核细胞,一、白细胞的组成,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,白细胞是机体抵抗病原微生物等异物,入侵的主要防线,全能干细胞,髓系干细胞,淋巴系干细胞,粒,-,单核系祖细胞,T,淋巴系祖细胞,B,淋巴系祖细胞,原粒细胞,T,原淋巴细胞,B,原淋巴细胞,分叶核粒细胞,单核细胞,T,淋巴细胞,B,淋巴细胞
5、,浆细胞,GM-CSF,T,幼淋巴细胞,B,幼淋巴细胞,早幼粒细胞,中幼粒细胞,晚幼粒细胞,杆状核粒细胞,幼单核细胞,原单核细胞,嗜酸性,粒细胞,嗜碱性,粒细胞,中性粒细胞,（,Neutrophil,，,N,）,具有趋化、变形、黏附、吞噬、杀菌作用，,防御和抵抗病原菌侵袭,二、白细胞的功能,淋巴细胞,（,Lymphocyte,，,L,）,B,细胞,浆细胞,生成,Ab,体液免疫,T,细胞,免疫活性物质,细胞免疫,单核细胞,（,Monocyte,，,M,）,吞噬，杀灭病原体,清除损伤或已死亡的细胞,处理抗原,嗜碱性粒细胞,（,Basophil,，,B,）,通过释放,嗜碱性颗粒,（组胺、肝素、慢反,
6、应物质等）参与超敏反应,嗜酸性粒细胞,（,Eosinophil,，,E,）,抑制,嗜碱性粒细胞,和,肥大细胞,合成和释,放活性物质，吞噬其释出颗粒，破坏组胺，,限制过敏反应,参与对寄生虫的免疫反应,1.,中性粒细胞,(N),?,直径,10-15um,?,胞质：粉红色，含较多,细小均匀,的紫红,色中性颗粒。,?,胞核：染色不均,三、白细胞正常形态,?,按胞核的形态分为：,N,杆状核,（,Nst,）,N,分叶核,（,Nsg,）,核径最窄处大于最宽处,1/3,为杆状核，核型多样，可,呈,C,形,、,S,形、,V,形或不规,则形。,核径最窄处小于最宽,处,1/3,为分叶核，细,胞分,25,叶，甚至,5
7、,叶,以上。,中性粒细胞,杆状核,分叶核,2.,嗜酸性粒细胞（,E,）,?,形态：略大于中性粒细胞,?,胞浆：胞浆内充满,粗大、整齐、均匀、,排列紧密、有立体感,的桔红色嗜酸性颗,粒,?,胞核：长呈分叶状，,二叶居多，呈眼镜,状,，,偶见,34,叶,染色质粗，染深紫红色。,嗜酸性粒细胞,（血涂片）,3.,嗜碱性粒细胞（,B,）,?,胞体呈圆形，略小于中性粒细胞,?,胞浆：,含粗大但大小不一、分布不均匀的,紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上，,致使核的轮廓与结构模糊不清,?,胞核：,核分叶不明显，形态不规则,。,嗜碱性粒细胞,（血涂片）,颗粒特点,大小不一,分布不均,嗜碱性强,4.,淋巴细胞（,
8、L,）,?,形态：,直径,6-15um,，分为大,L,和小,L,。,?,胞核：,圆形或肾形,，深紫红色。染色,质粗糙，排列均匀，大淋巴细胞核常,偏于一侧。,?,胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒，常呈裸,核。大淋巴胞浆丰富,，呈透明蓝色，常有,少量粗大、大小不均的紫红色,嗜天青颗粒,。,淋巴细胞,（血涂片）,5.,单核细胞（,M,）,?,形态：为外周血中最大的细胞，直径,15-25um,胞体呈圆形或不规则形,。,?,胞浆：丰富，染,淡蓝色或灰蓝色,，呈,毛玻璃,样半透明,。胞浆内含大量细小、弥散分布的,灰尘样,淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。,?,胞核：细胞核大，呈,不规则圆形、肾形、马,蹄形或不规则
9、分叶，有时折叠扭曲,。染色质,细致、疏松如网状，染为淡紫红色。,五类白细胞,外周血正常白细胞形态特征,细胞,直径,（,m,）,形态,胞质,细胞核形,染色质,中性杆,状核,10,15,圆形,粉红色。颗粒量多、细,小、均匀、紫红色,弯曲呈杆状、带状、蜡肠样,粗糙，深紫红色,中性分,叶核,10,15,圆形,粉红色。颗粒量多、细,小、均匀、紫红色,分,2,5,叶。杆状,5,8%,，,2,叶,30,35%,，,3,叶,40,50%,，,4,叶,15,20%,，,5,叶,0.5%,，,6,叶,0%,粗糙，深紫红色,嗜酸性,粒细胞,13,15,圆形,着色不清。颗粒橘黄、,粗大、整齐排列、均匀,充满胞质,多分
10、,2,叶，眼镜形,粗糙，深紫红色,嗜碱性,粒细胞,10,12,圆形,着色不清。颗粒紫黑色,、量少、大小不均、排,列杂乱、可盖于核上,核形因颗粒遮盖而不清晰,粗糙，深紫红色,淋巴细,胞,6,15,圆形或椭圆,形,透明、淡蓝色、多无颗,粒，大淋巴细胞可有少,量粗大、不均匀紫红色,颗粒,圆形、椭圆形、肾形,深紫红色，粗糙成,块，核外缘光滑,单核细,胞,12,20,圆形、椭圆,形或不规则,形,半透明、灰蓝色或灰红,色。颗粒细小、尘土样,紫红色,肾形、山字形、马蹄形、扭,曲折叠不规则形,疏松网状，淡紫红,色，有膨胀和立体,起伏感,四、一些异常结构及细胞的认识,1.,核左移,外周血中,杆状核,粒细胞增多或
11、出现,晚幼,粒、,中幼,粒、,早幼,粒细胞,2.,核右移：,主要见于,营养性巨幼细胞,性贫血、恶性贫血等,3.,毒性变化,?,大小不均：,病程长的化脓性炎症,?,中毒颗粒,：化脓菌感染及大面积烧伤,?,空泡：,败血症,?,Dohle,小体,（,蓝斑,）：是核和胞质发育不平衡表现,?,退行性变：,核固缩、核肿胀,、核溶解,中,性,粒,细,胞,大,小,不,均,大小不均,中,性,粒,细,胞,中,毒,颗,粒,中毒颗粒：粗大、大小不等、分布不均匀,的紫黑色或深紫红色颗粒,。,中,性,粒,细,胞,退,行,性,变,退行性变,中性粒细胞空泡性变：,中性粒细胞胞质内出,现一个或数个空泡,空泡,杜勒小体,：中性粒细胞胞质毒性变化保留,的局部嗜碱性区域，呈圆形、梨形、云雾,状，天蓝色或灰蓝色,杜勒体,?,异,形,淋,巴,细,胞,型（空泡型）,型（单核细胞型）,型（幼稚细胞型）,
