植物生物技术考试重点.docx

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1、植物生物技术考试重点植物生物技术考试重点 1、生物技术？现代生物技术主要包括哪几个方面的技术？ 生物技术(biotechnology)，也称生物工程, 是指以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理, 按照预先的设计改造生物体或加工生物原料, 为人类生产出所需要的产品或达到某种目的的一系列技术。 先进的工程技术：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程等新技术。 改造生物体：获得优良的动植物品种。 为人类生产所需的产品：食品、医药、能源、原料等。 生物技术的产生以DNA重组技术的建立为标志。 现代植物生物技术包括：植物组织培养技术、人工种子技术、细胞工程技术、

2、基因工程技术。 2、什么是胚培养？有什么意义？ 无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。 意义：克服远缘杂交不亲和性和杂种不育性，获得种间或属杂种。种间或属杂交中，受精作用能正常完成，胚也能进行早期的发育，但由于胚乳发育不良，杂种胚最终将夭折，因而不能形成有发芽能力的种子。 3、什么是基本培养基？ 仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基 4、什么是转基因沉默？ 5、什么是逆转录酶？ 6、植物组织培养？ 将植物的离体器官、组织、细胞以及去除细胞壁的原生质体，甚至幼小的植株，在人工控制的无菌环境下，应用人工培养基创造适宜的培养条件，使其生长、分化并成长为完整植株的过

3、程。也称为离体培养或试管培养。 7、愈伤组织的形成的过程？ 8、愈伤组织的定义和特点？ 愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过细胞分裂，形成一种高度液泡化、无定形状态、由薄壁细胞组成的排列疏松的组织。 细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明 9、阐述外植体的成苗途径。 1 10、植物组织培养常用的培养基及各自的特点？ 据其营养水平分：基本培养基、完全培养基 据其态相分： 固体培养基、液体培养基 据其作用分：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 据培养物的培养过程分：初代培养基、继代培养基 组织培养中常用的培养基主要有：MS、White、N6、B5、Heller、Nitsch、

4、Miller、KM-8P 培养基种类 固体培养基：加凝固剂的培养基； 液体培养基：不加凝固剂的培养基。 初代培养基：用来第一次接种从植物体上分离下来的外植体的培养基。 继代培养基：用来接种继初代培养之后的培养物的培养基。 基本培养基：只含有机和无机成分，但不包括糖、激素和复杂有机添加物等。 完全培养基：基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如植物生长调节物质和其它复杂有机附加物等。 2、培养基的特点 MS培养基-大量元素。 特点：无机盐的浓度高，具有高含量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，同时还含有一定数量的铵盐，这使得它营养丰富，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿

5、质营养的要求，有加速愈伤组织和培养物生长的作用，当培养物久不转移时仍可维持其生存。 White(WH)培养基。 特点：无机盐浓度较低。它的使用也很广泛，无论是生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。 N6 培养基。 特点：KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养和组织培养。 B5 培养基。 特点：含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用，但它适合于有些植物如双子叶植物特别是木本植物的生长。 KM-8P 培养基。 特点：特点是有机成分较复杂, 它包括了几乎所有的单糖和维生素、呼吸代谢中的

6、主要2 有机酸。主要用于原生质体培养。 固体培养基和液体培养基： 固体培养基：使用简便，一般用于组织、愈伤组织、短枝、茎尖等材料的培养。特别适合植物的快速繁殖。 缺点：一块外植体只能部分接触培养基，不能浸没在培养基中，结果培养物上下部因接受养分不匀而形成差异，不易使细胞群体保持一致。 液体培养基(不加琼脂)：提供比较均匀的营养，而且细胞的增殖速度快，一般用于细胞，原生质体的培养，也可用于愈伤组织的培养，胚状体等材料的继代培养。 11、植物组织培养室需要控制的条件。 温度：大多数植物组织培养温度在2327之间。低于15时培养，植物组织会表现生长停止，高于35时对植物生长不利。不同植物培养的适温不

7、同。月季是2527、番茄是28。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28为最好，在12以下，33以上形成率皆最低。 光照：主要表现在光照强度、时间长短、光照质量等。有的材料培养需要光，有的则不需光；不同的植物所需的光照强度也不一样。一般1000-5000Lx/12-16h/天。 湿度：湿度影响包括培养容器内湿度和环境湿度。容器内湿度水平主要受培养基水分含量和封口材料的影响。封口材料直接影响容器内湿度情况。封闭性差的材料易导致培养基干燥；封闭性高的封口材料易引起透气性不好。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗

8、透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。 气体环境: 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。 12、植物组织培养最常用的C源、常用的激素及其作用和浓度？ 蔗糖 2%5% 作为植物生长发育所需的营养物质和调节培养基中的渗透压 生长素 诱导细胞分裂和根的分化 细胞分裂素 促进细胞分裂和由愈伤组织形成

9、器官，分化不定芽 赤霉素 刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株 油菜素内酯 促进伸长 提高植物內源生长素 乙烯 促进RNA和蛋白质合成和使细胞膜透性增加 脱落酸 抑制外植体形成体细胞胚状体 13、植物组织培养中培养基配制过程中应注意的环节？ 培养基的配制：准备工作、母液的配置和保存、培养基配置、培养基的灭菌 配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。各种药品要充分溶解再依次混合.配制时注意一些离子之间易发生沉淀(如Ca2+和S042-)。 铁盐容易发生沉淀，需单独配制。 培养基的配制注意事项： 1、溶解特征：大量元素易沉淀； 2、标签 3、保存期：发现沉淀不能用。 培

10、养基的配制步骤： 1、将配制好的母液按顺序排列， 3 2、列表计算各母液用量 3、先取适量的蒸馏水放入容器，再依次加入母液 4、加入肌醇和蔗糖，定容后调pH 5、加入琼脂，煮开至完全溶解 6、分装到组培容器 7、封口，贴标签 14、植物组织培养的理论依据？ 植物细胞全能性 组织培养的生理依据： 激素调控 15、植物组织培养技术在目前农业生产上的应用？ 1 育种上的应用: 单倍体育种：快速纯化个体，缩短育种年限， 提高育种效率等作用。 远缘杂交：克服杂交不亲和性，用于植物的远缘杂交；体细胞杂交；胚珠培养。 体细胞变异的应用：果树苗木等。 单细胞突变体的筛选：抗性育种。 2 种子繁育与生产： 快速

11、繁育：兰花、香蕉、甘蔗、咖啡等。 获得脱毒植株，提高种性：病毒可通过维管束传递，茎尖细胞分裂很旺，几乎没有病毒， 如土豆。 人工种子：不受气候影响，苜蓿、芹菜、胡萝卜等。 3 植物产品的工厂化生产： 喜树的喜树碱，人参皂苷，香料植物的香油精。 4 种质资源的保存： 对于难于产生种子，种子不易保存，或珍稀的植物。 番薯的块根保存很难，可以取其茎尖进行组织培养，进行保存。 16、简述植物组织无菌培养的一般步骤？ 外植体表面消毒：将外植体置于有螺丝盖的玻璃瓶中, 注入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液, 使材料完全浸没在消毒液中, 盖上盖, 把玻璃瓶置入超净工作台。消毒期间摇动 2-3 次, 使消毒液

12、充分接触植物组织。 消毒处理后, 打开瓶盖, 倒出消毒液, 注入适量的无菌蒸馏水, 再盖上盖, 摇动数次, 将水倒掉如此重复 34 次。 将材料取出, 置于一个已经灭菌的培养皿中。 器械消毒：将所要使用的器械 (如解剖刀、镊子、剪刀等) 置入 95 % 乙醇中, 取出后于酒精灯火焰上灼烧, 待冷却后即可使用。所有操作器械需使用一次, 消毒一次。 用这些消过毒的将已经过表面消毒的材料切取或剥取适当的外植体。 将培养容器的盖或塞子打开,将外植体接种到培养基上,如果使用的是玻璃培养容器,把瓶口置酒精灯火馅上烘烤数秒钟,然后迅速用瓶盖或瓶塞封严。 17、与整体植物相比，植物离体组织有哪些特点？ 整体植

13、物不同的器官具有明显的分工，只要有水和无机盐就可以完成整个生命过程。离体组织与植株没有了物质、能量和信息的交流，从而： 1、生长发育不受植株的控制，可以脱离原来的发育路线； 4 2、得不到生长发育所需要的培养，从自养变成异样。 3、所需要的营养与活体组织所需要的营养具有很大的差别。能量来源；有机成分、激素等。 18、简述激素在植物组织离体培养过程中的作用？ 19、常用的PCR技术有哪些？ 20、PCR反应的条件？ 21、PCR反应中关键的试剂有哪些？ 22、什么是离体授粉？ 23、柯斯质粒？ 24、载体的种类以及载体应具备的特性？ 25、质粒载体构建的基本原则，以及质粒载体的一般生物学特性？

14、26、噬菌体的特征？什么是溶菌周期，什么是溶源周期？ 27、同源基因的共抑制效应？ 28、基因克隆操作中常用的工具酶种类？ 29、基因克隆的本质以及基因克隆主要包括哪些内容？ 30、简述植物基因组文库构建的一般步骤以及构建原则？ 31、什么是转基因育种？转基因育种有哪些特点？ 32、理想的植物受体系统应符合的条件 33、根据你的理解详细说明农杆菌介导的转基因技术有哪些优点？ 34、以水稻为例详细介绍农杆菌介导的转基因技术的具体操过程? 35、外源基因整合到植物染色体上的主要的分子鉴定方法？ 36、转基因检测可以从哪些方面进行检测，具体的检测原理是什么？ 植物基因工程理论上的三大发现： DNA为

15、遗传信息的携带者。 5 DNA的双螺旋模型和半保留不不连续复制机制。 中心法则和操纵子模型。 植物基因工程技术上的三大发明： DNA体外切割与连接技术。 基因工程载体的使用。 DNA分析技术：电泳、测序、杂交技术。 基因工程的定义： 用人工的方法，从不同生物中提取外源基因及载体DNA，经过体外切割、拼接和重组，然后采取某种方法，把重组后的带有外源基因的载体DNA引入植物细胞，并使其在植物细胞内进行复制和表达，以达到预期改变受体植物细胞遗传特性的目的。 它的核心是重组DNA技术。也称：遗传工程，基因操作，基因克隆，分子克隆。 基因工程的生产应用： 克服远缘杂交的困难。 1、使基因在动物、植物，微

16、生物不同生物系统中传递。 2、快速、定向的获取人类所需要的生物新类型。 细胞工程的定义： 利用细胞培养、细胞融合等细胞生物学方法对细胞进行改造，使细胞按人类需要生产有用的产品，或者遗传物质，从而培育新的生物类型。包括：细胞杂交技术、单克隆抗体、细胞大规模培养技术。 细胞工程的应用-原生质体融合 植物组织培养室设计： 准备室 接种室 培养室 细胞室 培养基的成分: 水、无机盐、有机成分、植物生长调节剂、碳源、凝固剂及其它附加物 1、无机营养 无机物中有16种是植物必须的，即C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl。 I 虽然不是植物必需元素，但几乎所有的培养

17、基中都添加I。 植物所需要的浓度大于0.5mmol/L的元素为大量元素，小于0.5mmol/L的元素为微量元素。 缺氮：表现出一种很注目的花色素苷的颜色，愈伤组织不能形成导管； 缺钾或磷：细胞过度生长，形成层组织减退； 缺硫：愈伤组织褪绿； 缺铁：细胞分裂停止； 缺硼：细胞分裂停滞，细胞伸长；而缺锰铜则会影响细胞伸长。 2、有机成分-氨基酸 氨基酸是蛋白质的组成成分，也是一种有机氮化合物。 常用的有甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、丝氨酸、丙氨酸、半胱氨酸以及多种氨基酸的混合物等。 有机氮作为培养基中的惟一氮源时，离体组织生长不良，只有在含有无机氮的情况下，氨基酸类物质才有较好的效果。 6 有机成分 -

18、 维生素类 能明显地促进离体组织的生长。 培养基中的维生素主要是B族维生素，如硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸、生物素、钴胺素、叶酸、抗坏血酸等。 有机成分 - 天然有机物 有机附加物包括有些成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳(CM)、香蕉泥、番茄汁(TJ)、马铃薯泥、苹果汁、生梨汁、西瓜汁、酵母提取液、麦芽浸出物等。 有机成分 - 肌醇 肌醇：环己六醇，帮助活性物质作用 其他：单核苷酸等。 3、碳 源 糖在植物组织培养中是不可缺少的。 它不但作为离体组织赖以生长的碳源，且还能使培养基维持一定的渗透压。 渗透压对细胞的增殖和胚状体的形成都有十分明显的影响。一般多用蔗糖调节渗透压，其浓度为15，也可用麦

19、芽糖、葡萄糖或果糖等。葡萄糖或果糖价格稍贵，但可防褐化。麦芽糖价格贵，细胞培养时用。 4、激 素 激素对愈伤组织的诱导、器官分化及植株再生具有重要的作用. 培养基中的关键物质: 主要包括生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯。 激 素 - 生长素 生长素能影响植物茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落、生根等现象。 离体培养中的作用： 诱导愈伤组织的产生；促进细胞脱分化；促进细胞的伸长；促进生根。 常用的生长素有吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸、2，4二氯苯氧乙酸。 IAA、NAA、IBA、2,4-D之类生长素，可先用少量0.1N氢氧化钠或乙醇溶解，然后再定容到所需要的体积。 激 素- 细胞分裂

20、素 细胞分裂素影响植物细胞分裂、顶端优势的变化和茎的分化等。培养基中加入细胞分裂素，主要是为促进细胞分裂和由愈伤组织形成器官，分化不定芽。由于这类化合物有助于解除顶端优势对腋芽的抑制作用，可用于茎的增殖。 细胞分裂素有天然的和人工合成的。常用的有玉米素、苄氨基腺嘌呤、激动素等。KT、BA等细胞分裂素则可用少量0.1N盐酸加热溶解，然后加水定容。 激 素 比 当配制的培养基中生长素/细胞分裂素的比例高时则有利于生根；生长素/细胞分裂素的比例低时则有利于生芽；若两者浓度相当时，既不利于生根，也不利于生芽，而是愈伤组织的产生占优势。 其它的一些激素：赤霉素，植物组织培养中常用的是GA3。脱落酸，在植

21、物组织培养中对培养物有间接的抑制作用，它可抑制外植体形成体细胞胚状体。水杨酸，能抑制ABA的形成，有利于胚状体的形成。 5、凝固剂 7 在固体培养时，琼脂是使用最方便、最好的凝固剂。琼脂是一种高分子的碳水化合物，以色白、透明、洁净的为佳，仅溶解于热水，冷后即凝固为固体状的凝胶。 琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸、过碱也会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。 琼脂糖：原生质体培养时用。Phytogel：新型凝固剂。 6、水 植物组织培养所必需 培养基的配制必须用超纯水 细胞培养主要用蒸馏水 7、活性炭 活性炭

22、加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。 活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根。 活性炭对物质吸附无选择性，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为0.10.5。 活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。 8、培养基的pH 培养基的pH因培养材料不同而异，大多数植物都要求在pH5.65.8的条件进行组织培养。 在培养过程中，培养基的pH不是一成不变的，往往随着培养基的水分和养料的消耗，pH会发生一些变化。高压灭菌会降低培养基中的pH。 配制培养基时，常用0.lmolL的NaOH和0.lmolL的HC

23、l来调节培养基的pH。 pH的高低会影响琼脂的凝固能力： pH6 培养基变硬， pH5 琼脂不易凝固 培养基的灭菌和存储： 培养基一般采用湿热灭菌法，压力108kPa、温度为121时，维持20min。 某些激素、抗生素以及某些维生素等，遇热时容易分解，不能进行高压灭菌。当使用这类化合物时，可选择使用孔径为0.45m或更小的细菌滤膜过滤灭菌。培养基一般需冷却到60以下再加入这些遇热分解化合物。 将滤膜安在过滤器里面进行高压灭菌。过滤器的灭菌温度不应超过121 。 植物组培培养中污染的来源： 培养基本身； 外植体； 接种室的环境； 操作用的器械； 培养室的环境。 可以通过灭菌措施防止或减少污染源

24、常用的灭菌方法： 物理灭菌：高温高压灭菌、干热灭菌(烘烧和灼烧)、湿热灭菌、辐射(紫外线、超声波、微波)灭菌、过滤灭菌。 化学灭菌：酒精、升汞、过氧化氢、高锰酸钾、次氯酸钠、抗生素等化学药品处理，根8 据工作中的不同材料不同目的适当选用。包括：熏蒸灭菌、喷雾灭菌、消毒液灭菌。 高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。 培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中含有活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强。 灭菌注意事项： 1、GA3、维生素、蔗糖等的降解问题； 2、灼烧问题； 3、紫外灯的危害； 4、消毒剂对皮肤的损害。

25、脱分化：指高度分化的植物器官、组织或细胞，在离体培养条件下经过多次细胞分裂逐渐失去原来的结构、功能和分化状态，形成无组织结构的愈伤组织或细胞团的过程。 再分化：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株。 植物组织培养步骤： 植物组织培养的类型： 愈伤组织培养: 最为常见的组织培养 器官培养: 根、茎、叶、花等 胚培养：胚、胚乳、珠心、子房、 细胞培养和原生质体培养：悬浮培养、单细胞培养 外植体消毒的一般步骤： 1、预处理，先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。经过预处理的植物材料，其

26、表面仍有很多细菌和真菌。 2、将外植体置于无菌的玻璃瓶中，加入75%的酒精溶液浸泡材料10S左右。倒出酒精，用无菌水冲洗一次。 3、将适当浓度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸钠)，使材料完全浸没在消毒液中，盖上瓶9 盖，把玻璃瓶置入超净工作台灭菌一定时间。在灭菌期间须摇动玻璃瓶2-3次。 4、消毒处理后，将消毒液倒出，注入适量的无菌蒸馏水漂洗，将水倒掉，重复3-4次。 外植体培养 固体培养法：用琼脂或植物胶固化培养基来培养植物材料的方法。该方法操作简单，通气好，外植体固定，利于愈伤组织的诱导、分化，应用最广；但养分分布不均，生长速度不均衡，有毒物质积累，并常有褐化中毒现象发生。 液体培养法：

27、即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。一般用于愈伤组织的繁殖、分散；主要用于分离单细胞和产生体细胞无性系，生产次生代谢物质。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给， 优点：生长繁殖快、均匀，工厂化生产 缺点：需要摇床，频繁继代，不利分化。 初代培养旨在获得无菌材料和无性繁殖系。即接种某种外植体后，最初的几代培养。初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含有较多的细胞分裂素和少量的生长素。初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。 根据初代培养时发育的方向可分为:顶芽和腋芽的发育、不定芽的发育、体细胞胚状体的发生与发育。 继代

28、培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程，外植体或愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。继代培养的后代是按几何级数增加的过程。 生根培养是使无根苗生根的过程，目的是使生出的不定根浓密而粗壮。生根培养可采用1/2或者1/4MS培养基，全部去掉细胞分裂素，并加入适量的生长素(NAA、IBA等)。 快速繁殖中初代培养只是一个必经的过程，而继代培养则是经常性不停的进行过程。但在达到相当的数量之后，则应使其中一部分转入生根阶段。增殖只是贮备母株，而生根才是增殖材料的分流，生产出成品。若不及时将培养物转到生根培养基上去，就会使久

29、不转移的苗子发黄老化，或因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。 愈伤组织 外植体先形成愈伤组织，再分化成完整的植株。 10 在愈伤组织上同时长出芽和根，以后连成统一的轴状结构，育成植株； 在愈伤组织中先形成茎，后诱导成根，再发育成植株； 在愈伤组织中先形成根，再诱导出芽，得到完整植株。 但在培养中一般先形成根的，往往抑制芽的形成；而相反，一般先产生芽的，则以后较易产生根。 胚状体发生 组织培养中再生植株可通过与合子胚相似的胚胎发生过程，即形成胚状体，再发育成完整植株。 胚状体可以从以下几种培养物产生： 直接从器官上发生； 愈伤组织发生； 从游离单细胞发生； 从小孢子发生。 器官发生途径 外植体

30、经诱导后直接形成根与芽，发育成完整的植株 如茎尖、花芽、叶片、花托、鳞片等组织直接产生小苗，形成小苗之前也形成少量的愈伤组织。 利用在叶外植体的周围再分化出芽，如烟草。 利用从鳞茎分化芽或小鳞茎，如百合，水仙。 原球茎型 大部分兰花的培养属于这一类型。原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖或腋芽可直接产生原球茎，继而分化成植株，也可以继代增殖产生新的原球茎，这取决于培养条件和培养基。 污染的预防措施 防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体； 材料预培养。 严格外植体灭菌 接种用具灭菌彻底 严守无菌操作规程 保持培养室清洁 玻璃化现象：离体培养物的嫩茎或叶呈半透明水渍状，为生理失调症。 玻璃化苗外形与正常苗有显著差异。其叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低。 外植体褐变：指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。在褐变过程中，产生醌类物质，多呈棕褐色，扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。 11