脂代谢及脂代谢紊乱检验课件.ppt

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1、,第9章 脂代谢及脂代谢紊乱检验,一、血脂及血浆脂蛋白,血脂：是血浆中脂类的总称，包括三酰甘油(TG)、磷脂(PL)、游离胆固醇(FC)及胆固醇脂(CE)、游离脂肪酸(FFA)等。,定义：,脂蛋白：由于TG和TC难溶于水，不能直接溶解在血液里被转运，也不能直接进入组织细胞中。所以在血浆中它们是与特殊的载体蛋白和极性类脂（PL）结合成微溶于水的一类球形大分子复合物而被运输，这种球形大分子复合物就称为脂蛋白,9.1 概 述,4,一、血脂及血浆脂蛋白,1、超速离心法：,乳糜微粒（CM）,极低密度脂蛋白（VLDL）,中间密度脂蛋白（IDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）

2、（Lp(a)）,（一）血浆脂蛋白的分类,6,各类脂蛋白颗粒的密度及体积,依据血浆脂蛋白分子中蛋白质表面电荷多少的不同而分离。通常可分成：CM、-LP、pre-LP、-LP 四条区带分别相当于CM、LDL、VLDL、HDL IDL也有移动度，在IDL异常时可显现宽带,2、电泳：,（一）血浆脂蛋白的分类,8,（一）血浆脂蛋白的分类,（二）血浆脂蛋白的组成与结构,组成：,主要由蛋白质、三酰甘油、磷脂（PL）、游离胆固醇（FC）及胆固醇酯（CE）等成分组成。但其组成比例及含量却相差很大。,相同点：蛋白质+脂类(TG、PL、FC+CE),不同点：(1)蛋白质和脂类的含量不同(2)蛋白质(Apo)的种类及

3、其含量不同,结构：,大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的核心和亲水性的表层。核心由不溶于水CE与TG组成，表层由载脂蛋白、PL及FC组成，FC及PL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。,血浆脂蛋白的主要功能,1.CM 运输外源性TG至外周组织2.VLDL 运输内源性TG至外周组织3.LDL 运输胆固醇至外周组织，与冠心病成正相关4.HDL 从外周组织逆转运胆固醇至肝脏或其他组织再分布，与冠心病成负相关,（三）载脂蛋白,脂蛋白中的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo)，具有结合与转运脂质及稳定脂蛋白结构等功能，在脂蛋白代谢中具有

4、重要的生理功能。,定义：,1.载脂蛋白的种类与功能：,按1972年的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、ApoB、ApoC、ApoD、ApoE等。,Apo种类多，类-亚类亚亚类。ApoA：ApoAI、ApoAII 和 ApoAIV ApoB：ApoB100 和 ApoB48 ApoC：CI、II、III ApoD 及 ApoE、Apo(a)、ApoH、ApoJ,13,分 类,（三）载脂蛋白,14,功 能,与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。运转胆固醇和三酰甘油。作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。激活某些与血浆脂蛋白代谢有关

5、的酶类,（三）载脂蛋白,（四）脂蛋白受体,定义：,脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。,脂蛋白受体的作用：,不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。,种类：,主要有LDL受体、残粒受体及清道夫受体。,（四）脂蛋白受体,各种脂蛋白受体功能,（四）脂蛋白受体,LDL受体 不仅能识别ApoB100，也可识别ApoE，在细胞结合、摄取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。,残粒

6、受体 能识别ApoE，是清除血液循环中CM残粒和-VLDL残粒的主要受体，它也能结合含ApoE的HDL。,各种脂蛋白受体功能,清道夫受体 主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰LDL(包括氧化LDL和-VLDL)从血液循环中清除。,（五）胆固醇酯转运蛋白,定义：,血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白（LTP）。,LTP包括三种成分：胆固醇酯转运蛋白（CETP）三酰甘油转运蛋白（TTP）磷脂转运蛋白（PTP）,(六)血浆脂蛋白代谢,CM是运输外源性TG的主要形式（1）合成部位：小肠粘膜细胞（2）组成特

7、点：含TG多、蛋白质少、颗粒大、密度小。（3)功能：转运外源性TG的主要形式，将外源性TG肠运往全身。（4）代谢过程,1.外源性代谢途径,(六)血浆脂蛋白代谢,2、内源性脂质代谢,VLDL是运输内源性TG的主要形式。1.合成部位：肝（主）小肠也可合成少量2.组成特点：富含TG(50%-70%)，以含ApoB100为主要特点。,3.功能：是内源性TG由肝脏运往全身的主要形式4.代谢过程,(六)血浆脂蛋白代谢,24,VLDL的生理功能：运输内源性TG,内源性VLDL的代谢,定义：HDL可将胆固醇从外周组织（包括动脉粥样斑块）运回到肝进行再循环或以胆酸的形式排泄，这一过程称为胆固醇的逆转运。,25,

8、3.胆固醇逆转运(RCT),(六)血浆脂蛋白代谢,26,血 浆 脂 蛋 白 代 谢 总 图,（一）高脂蛋白血症,高脂血症：是指血浆中TC或和TG水平升高。高脂蛋白血症:是指血浆中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白出现一种或几种浓度过高的现象。,血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一定是高脂蛋白血症。因而，采用脂质异常血症能更全面准确地反映血脂代谢紊乱状态。,二、脂蛋白代谢紊乱及其 与动脉粥样硬化的关系,(1)血清(血浆)外观：在4冰箱放置16-24h后的血清外观(2)血脂浓度：血清TG、TC含量(3)各种血浆脂蛋白升高程度,高脂蛋白血症分类,WHO的分型系统主要依据为：,1.按临床

9、表型分类：,按临床表型分类,型高脂蛋白血症又称家族性高乳糜微粒血症或脂蛋白酶缺乏症。其生化检查特征：4静置过夜，表面奶油状，下层澄清。血清TG，血清TC正常或轻度。血清脂蛋白电泳，CM。,（1）型高脂蛋白血症,a高脂蛋白血症 又称高-脂蛋白血症或高胆固醇血症。其生化检查特征：4冷置试验，血浆外观澄清。血清TC，尤其是LDL，TG正常。血清脂蛋白电泳，-LP。临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，结局为心肌梗塞。,（2）a高脂蛋白血症,b型高脂蛋白血症 其生化检查特征：4冷置试验，血清外观澄清或微混。血清TC，TG，VLDL和LDL均。血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP。,（3）b型高脂蛋白血症

10、,（4）型高脂蛋白血症,（5）型高脂蛋白血症,（6）型高脂蛋白血症,2.按是否继发于全身性疾病分类：,高脂蛋白血症分类,（1）原发性高脂血症,（2）继发性高脂血症 糖尿病 甲状腺功能低下（甲减）肾疾病 药物 其他,3高脂血症的基因分型法,家族性高脂血症的临床特征,主要有四种类型：1.家族性低-脂蛋白血症 2.-脂蛋白缺乏血症,3.家族性低-脂蛋白血症4.Tangier病（无HDL血症）,（二）低脂蛋白血症,动脉粥样硬化(AS)是指动脉内膜因脂质、血液成分的沉积、平滑肌细胞及胶原纤维增生，并伴有不同程度坏死及钙化等一类慢性进行性的病理改变。最终导致血管壁呈增厚、狭窄，使某些脏器(尤其是心、脑)供

11、血不足而损伤，甚至危及生命。,（三）脂蛋白代谢紊乱与动脉粥样硬化,主要的危险因素：高脂血症 高血压（或高脂蛋白血症）吸烟 性别遗传因素 内分泌因素前三项是促进AS发病全过程的三大主要因素,1、动脉粥样硬化的危险因素,应 用：CM颗粒大，一般不致动脉粥样硬化,但易诱发胰腺炎。近年研究表明,CM残粒(代谢残骸)可被巨噬细胞表面受体所识别而摄取,因而可能与AS有关。,42,（1）乳糜微粒与动脉粥样硬化 CM 功 能：运输外源性TG到全身各组织,2、引起动脉粥样硬化的脂蛋白,（）极低密度脂蛋白与动脉粥样硬化,43,功 能：运输内源性TG的主要形式,应 用：血浆VLDL水平升高已被确认为冠心病的危险因子

12、。,VLDL 合 成：肝细胞,（3）中间密度脂蛋白与动脉粥样硬化,因富含TG的VLDL经LPL水解生成脂蛋白残粒（IDL），并转变成富含胆固醇酯和ApoE的颗粒沉积于血管壁，具有致AS作用。研究表明，血浆IDL浓度增高常伴发周围动脉粥样硬化。,（4）低密度脂蛋白与动脉粥样硬化,应用：LDL相对较小,易于穿过动脉内膜，是首要的致AS性脂蛋白。已证明AS斑块中的胆固醇主要来自循环中的LDL。,LDL功能：携带胆固醇由肝脏转运到全身血浆中,临床意义：血浆LP(a)是导致As的独立危险因子。,46,(5)脂蛋白(a)与动脉粥样硬化,HDL之所以具有血管保护作用，被认为人体内具有抗AS的脂蛋白，在很大程

13、度上是因为HDL可将泡沫细胞中的胆固醇带出来，逆转运至肝进行分解代谢，可减少脂质在血管壁的沉积。大量的流行病学资料表明，血清HDL-C水平与冠心病发病成负相关。,3、HDL的抗动脉粥样硬化功能,4、TG水平与动脉粥样硬化,临床中，血清TG增高多见于糖尿病和代谢综合症。,血清TG轻度到中度升高，患者冠心病的危险性增加。,血清TG重度升高，患者常伴有急性胰腺炎。,血清TG升高，影响LDL和HDL结构，直接致AS发生。,5、载脂蛋白与动脉粥样硬化,血清ApoB的含量可反映LDL的含量，血清ApoB浓度升高与冠心病发生率成明显正相关。当高TG血症(VLDL升高)时，小而密的LDL（SLDL,即B型LD

14、L）增高，与A型LDL相比，则ApoB含量较多而胆固醇较少，故出现LDL-C虽然不高，但血清ApoB增高的现象，即所谓“高ApoB脂蛋白血症”，它反映B型LDL增多。因此 ApoB与LDL-C同时测定有利于临床判断。ApoA反映血液中HDL的数量，与冠心病发生率成负相关。,6、非高密度脂蛋白胆固醇与动脉粥样硬化,非HDL-C 是指除HDL以外其他脂蛋白中含有胆固醇的总和，主要包括LDL-C和VLDL-C，其中LDL-C占70%以上。非HDL-C的计算公式如下：非LDL-C=TC-HDL-C,7、致动脉粥样硬化脂蛋白谱的应用,致动脉粥样硬化脂蛋白谱是指一组血脂异常，包括TG升高、HDL-C降低和

15、sLDL颗粒增多。此三项同时出现异常，常提示为糖尿病和代谢综合征所伴随的血脂异常。此时发生冠心病的危险性明显增加，必须引起临床重视。,目前临床上开展的血脂测定项目包括TC、TG、HDL及其亚类胆固醇、LDL-C、Lp（a）以及部分载脂蛋白如ApoAI、ApoB等。其中 TC、TG、HDL-C、LDL-C 测定是血脂测定的四个基本指标。血浆4冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可初步估计各种脂蛋白的变化状况。血浆脂蛋白电泳结合TC、TG水平有助于高脂血症分型。,9.2 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定,血脂测定标准化,血脂分析前变异来源于：生物因素，如年龄、性别、种族等因素的个体差异。生活方式，包括饮食习

16、惯、吸烟、运动及应激等。临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。血标本采集与处理方面,分析前的准备：包括受试者的准备，标本采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。,一、血清（浆）静置试验,（一）化学测定法,化学测定法通常需抽提纯化。显色剂主要有两类：醋酸-醋酐-硫酸 高铁硫酸。这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。,特点：,二、血清（浆）总胆固醇测定,1Liberman-Burchard反应,1885年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，1890年Burchard用此反应测定胆

17、固醇称为L-B反应。,ALBK法已被国际上公认为参考方法，其测定结果与同位素稀释-气相色谱-质谱法（决定性方法）测定结果接近。,2ALBK法,（一）化学测定法,(二)酶 法,COD-PAP法,【原理】,H2O2与4-氨基安替比林（4-AAP）及酚三者合称PAP,【参考范围】3.95.7mmol/L,1.优点（1）酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析（2）灵敏度高、准确度高、精密度好、线性范围宽。2.缺点（1）CHE对胆固醇水解不完全（2）表面活性剂影响CHE活性（3）易受还原物质的干扰。,试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CHE，表面活性剂促进胆

18、固醇从脂蛋白中释放。,【方法评价】,TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。,【临床意义】,高TC血症：原发和继发,低TC血症：原发和继发,严重肝病患者，血清TC不一定很低，血清胆固醇酯占TC的比例可低至50%以下,三、血清（浆）三酰甘油测定,TG测定的决定性方法为同位素稀释-质谱法，常规方法为酶法（GPO-PAP）,（一）化学测定法,1.抽提 2.皂化 3.氧化 4.显色,(二)酶 法,1.GPO-PAP法,【原理】,本法酶试剂比较稳定，灵敏度高，线性范围较宽。两步法为中华医学会

19、检验分会推荐方法。影响因素与胆固醇测定法相同。,【方法评价】,第一步反应,2乳酸脱氢酶法,由于反应消耗NADH，故可利用NADH在340nm吸光度降低来测定三酰甘油的浓度。,本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了做试剂空白外，还要做标本空白。,【方法评价】,3甘油氧化酶法,【原理】,血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。合适范围：1.70mmol/L(150mg/dl)，升高：1.70mmol/L(150mg/dl)。,【参考区间】,【临床意义】,升高：（1）原发性高TG血症，包括家族性高TG血症与家族性高脂（

20、蛋白）血症等。（2）继发性高TG见于糖尿病糖原贮积症、甲状腺功能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药等 降低:甲亢、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤。,四、血清（浆）脂蛋白测定,(一)血清脂蛋白电泳,脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类。,预染法的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。,电泳后染色法为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油红O进行染色。,临床上比较常用的是预染法电泳。,血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳：-脂蛋白：0.30-0.40，前-脂蛋白：0.13-0.25，-脂蛋白：0.50-

21、0.60，乳糜微粒：阴性。,【参考范围】,(一)血清脂蛋白电泳,（二）高密度脂蛋白胆固醇测定,常以测定HDL-C含量代表HDL水平。,参考方法:,超速离心分离HDL，然后用化学法（ALKB法）或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。,常规方法:,1磷钨酸-镁法,2HDL直接测定法,HDL-C合适范围：1.04mmol/L(40mg/dl),0.91mmol/L(35mg/dl)为减低。,【参考值】,【临床意义】,流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病呈负相关，HDL-C低于0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负”危险

22、因素。HDL-C下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。,（二）高密度脂蛋白测定,（三）低密度脂蛋白测定,1Friedewald公式法 LDL-CTCHDL-CTG/2.2（以mmol/L为单位时）。（血清中存在CM、TG4.56时不适用）,2聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对LDL-C作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（PVS）选择性沉淀血清中LDL，再以血清TC减去上清液（含HDL与VLDL）胆固醇即得LDL-C值。,3直接测定法:,目前各类方法测定的LDL-C

23、值都包括IDL和LP(a)的chol在内,3.12mmol/L,升高：3.64mmol/L,【参考值】,【临床意义】,LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。,（三）低密度脂蛋白测定,（三）脂蛋白()测定,Lp()测定有两类方法,一是以免疫化学原理测定其所含Apo()，结果以Lp()质量表示，也有以Lp()颗粒数mmol/L表示的。另一类方法测定其所含的胆固醇，结果以 Lp()-C表示。目前大都用免疫学方法测定。,正常人群的Lp(a)水平呈明显的正偏态分布，大多在200mg/L以下，平

24、均数在120180 mg/L，中位数约100mg/L。Lp(a)水平高于医学决定水平（300mg/L），冠心病危险性明显增高。,【参考值】,【临床意义】,血清Lp(a)水平是动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素,与动脉粥样硬化成正相关。,（三）脂蛋白()测定,（1）Apo测定的临床意义 作为s和心脑血管病的有价值的危险予估指标。目前主要检测项目是 ApoA、ApoB100、Apo（a）（2）载脂蛋白异常症的发现和诊断 如：ApoA缺乏症（angier症）ApoC缺乏症,五、血清载脂蛋白测定,免疫化学法：,单向免疫扩散（RID）电免疫分析（如火箭电泳法）放射免疫分析（RIA）酶联免疫吸附分析（ELI

25、SA）等,早期,目前：目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法，包括免疫散射比浊法（INA）和免疫透射比浊法（ITA）。,五、血清载脂蛋白测定,【参考值】,Apo AI：1.001.50g/L；Apo B：0.801.00g/L。,【临床意义】,ApoAI是HDL的主要结构蛋白，ApoB是LDL的主要结构蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。在某些病理情况下，ApoAI与HDL和ApoB与LDL并非成正相关，因此，同时测定载脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL对病理发生状态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。临床上常将ApoAI和ApoB比值作为冠心病的危险指标。,五、血清载脂蛋白测定,