病理组织学检测.docx

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1、病理组织学检测病理组织学检测 收集检测病料,各种典型病变的组织器官,用10%福尔马林溶液固定,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察。 具体操作步骤如下: 取材:选择刚死的新鲜的组织;采取样品的时候要注意,将动物剖检之后,要尽快的的采取相关组织的材料;采样的刀片一定要锋利,切取组织块时避免前后过度的拉动或用力挤压,以防止造成组织结构变形或人为损伤。 固定:将采集好组织样品固定于10%的中性福尔马林溶液中,过夜固定或者至少固定24h。 组织修块及水冲:将福尔马林溶液固定好的组织进行修整,选好病变部位组织的切面,尽量修的薄一些,将修整好的组织块放在流动的自来水下冲洗10-16h,以便去掉组织中的甲醛。

2、脱水:将修好的组织块依次放入70%、80%、85%、90%、95%以及100%梯度酒精中进行脱水处理。脱水的具体程序及时间为:70%酒精2h80%酒精2h85%酒精2h90%酒精1h95%酒精30min无水乙醇I 45min无水乙醇II 45min。 透明及浸蜡:组织块完全脱水后,将其分别浸入二甲苯中进行透明,具体透明时间因组织块厚薄而异。将透明好的组织块,放在55左右的恒温箱中,进行浸蜡2-4h。 包埋:将70融过的石蜡倒入铁制的包埋框内,整齐的摆放组织块,一段时间后再进行修切。 切片:先将切片机调至3mm厚度,开始切片。 展片及粘片:将切好的组织片取下放到40的温水中,利用酒精将之展开。 烤片:将捞出的组织切片放于37培养箱中烤片2h或者过夜。 HE染色:按照下面的时间及顺序进行。首先二甲苯15min二甲苯10-15min酒精/二甲苯3-5min无水乙醇3-5min95%酒精3-5min85%酒精3-5min75%酒精3-5min蒸馏水4-6min苏木素染色液3-5min自来水冲洗约1min1%盐酸酒精45s流动的自来水冲洗10-15min90%酒精2-4s1%伊红染色液3-6s95%酒精3s95%酒精1-2min无水乙醇2-4min无水乙醇5min二甲苯20-30min。 封片:将经过二甲苯清洗的盖玻片盖于滴加了中性树脂的组织切片上,37温箱中烤干,在光学显微镜下观察。

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