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1、,微生物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,一、微生物的类群,(细菌、放线菌、蓝藻),(酵母菌、霉菌、大型真菌),(草履虫、变形虫、衣藻),(噬菌体、艾滋病毒),特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.,无细胞结构,原核(细胞壁、膜、质),真核(细胞壁、膜、质、核),真核(细胞膜、质、核),噬菌体烟草花叶病毒流感病毒,细菌(形状菌)放线菌,霉菌、蘑菇、酵母菌,衣藻、草履虫、变形虫,DNA或RNA,DNA,DNA,DNA,增殖：吸附注入合成装配释放,分裂生殖(二分裂),孢子生殖出芽生殖,分裂生殖有性生殖,拟核，大型环状DNA,质
2、粒(含抗生素抗药性，固氮基因),其成分为肽聚糖,芽孢,细菌的休眠体，对恶劣的环境有抵抗力,细菌的营养,蓝藻 硝化细菌等,菌落可作为菌种鉴定的重要依据,细菌的代谢,自养,硝化细菌、铁细菌、硫细菌等。,异养,大肠杆菌、乳酸菌、枯草杆菌等。,枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根瘤菌等。,破伤风杆菌、乳酸菌等。,需氧型：,厌氧型：,二、培养基：,培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,、概念：,、营养成份：,营养成份：水、碳源、氮源、无机盐其它：、特殊营养物质、氧气（15）,3、培养基的类型和用途,（1）按物理状态来分：固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离
3、、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。,（4）选择培养基的常见用途,加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基 分离固氮微生物不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞,1、伊红美蓝培养基为常用鉴别培养基,2、刚果红与纤维素等多糖类物质反应形成红色复合物，添加刚果红的培养基呈红色，接种的微生物若能够分解纤维素，就会在其菌落的周围形成透明圈,（5）鉴别培养基,4、培养基配制的操作步骤：,三、无菌技术操作,无
4、菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,四、微生物的纯化培养：自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯化培养，首先要将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体。包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段，纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。,（一）.微生物实验室培养的基本操作程序,1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存,1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,（1）、溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?,可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中，减少误差。,（2）、加
5、琼脂的目的是什么?,作为凝固剂,（二）、纯化大肠杆菌,计算,称量,溶化,灭菌,倒平板,3、在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？,在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。,4、培养皿能否用高压蒸汽灭菌？,不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,5、倒平板,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌,1、接种最常用方法有：,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布
6、平板法,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（二）纯化大肠杆菌,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,划线接种的基本步骤和说明:,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（1）系列稀释操作：,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,（1）系列稀释操作：,1、接种最常用方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（1）系列稀释操作：,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠
7、杆菌,（2）涂布平板操作,（2）涂布平板操作,1、接种最常用方法有：,2、平板划线法,3、稀释涂布法,（二）纯化大肠杆菌,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,三、纯化大肠杆菌,将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录,四、菌种的保藏,1.斜面保藏,临时保存,2.甘油保藏,长期保存,3、某种微生物数量的测定,生长：个体体积的增加繁殖：个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新 个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。,在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。,细菌太小，往往讨论其群体生长。,（一）微生物生长概述,1、稀释
8、平板计数法 对样品进行适当稀释 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 肉眼可见的菌落 对菌落数目的计数推测样品中的微生物细胞数,（二）以数量变化对微生物生长情况进行测定,同一稀释度三个以上重复,取平均值；,每支移液管及涂布器只能接触一个稀释度的菌液；,样品充分混匀；,每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数；,要求：,每克样品中的菌株数=（C/V）*M,2.显微镜直接计数法采用细菌计数板或血球计数板，显微镜下直接计数（计算一定容积里样品中微生物的数量）。,取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
9、用10镜观察并将计数室移至视野中央。在10镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半,必修3P68,显微镜直接计数法缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；,土壤取样 选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）梯度稀释 将菌悬液涂布到有特定选择作用的培养基上 挑选单菌落 发酵培养,土壤中某样品细菌的分离与计数流程图表示如下：,（09宁夏理综）32生物选考题A生物选修I生物
10、技术实践某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_ 和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_ 和 _。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ _ _。,碳源,氮源,无机盐,高压蒸汽灭菌,水,（09宁夏理综）32生物选考题（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_ 中培养，培养的温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_ 作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌
11、落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。,恒温培养箱,无菌水,多,高,盐（或NaCl）,选择性培养基,4、利用微生物进行发酵来生产特定的产物,（1）果酒和果醋的制作,（2）腐乳的制作,（1）果酒和果醋的制作,果酒制作的原理：,酵 母 菌,有氧呼吸,无氧呼吸,最适温度,20 0C,醋 酸 菌,最适温度,30 0C 35 0C,特 性,好氧细菌,醋酸菌死亡,果醋制作的原理：,实验流程示意图:,（1）毛霉菌（2）根霉菌（3）曲霉（4）青霉（5）酵母菌,1、酿造腐乳的微生物,（2
12、）腐乳的制作,2、腐乳制作的原理,腐乳酿造是利用豆腐坯上培养的毛霉或根霉，培养及腌制期间由外界侵入微生物的繁殖，以及配料中加入的红曲中的红曲霉、面包曲中的米曲霉、酒类中的酵母等所分泌的酶类，在发酵期间，引起极其复杂的化学变化。蛋白质：水解成肽、氨基酸；淀粉：糖化，发酵成乙醇和其他醇类及有机酸；同时辅料中的酒类及添加的各种香辛料等也共同参与作用，合成复杂的酯类，最后形成腐乳所特有的色、香、味、体等，使成品细腻、柔糯而可口。,3、腐乳制作的实验流程,让豆腐上长出毛霉,5、发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,（一）、泡菜的制作,1、泡菜制作基础知识（1）乳酸菌 乳酸菌是异养厌氧型细菌，在无氧条件下，将葡萄
13、糖分解成乳酸。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌，乳酸杆菌常用于制作酸奶。,（2）亚硝酸盐 亚硝酸盐(包括亚硝酸钾和亚硝酸钠)为白色粉末，易溶于水。当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.30.5g时，会引起中毒，达3g时会引起死亡。,（3）腌制条件腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。温度过高、食盐用量不足10、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。,（二）、亚硝酸盐含量的测定,1、测定亚硝酸盐含量的原理在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与N-1萘基乙二胺盐酸盐结合生成玫瑰红溶液。将经过反应显色后的待测样品与标准液比色，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。,2、材料与器具泡菜、对氨基苯磺酸、N-1萘基乙二胺盐酸盐、氯化钠、氢氧化钠、氢氧化铝、氯化镉、氯化钡、亚硝酸钠、蒸馏水、移液管、容量瓶、比色管、榨汁机等,3、步骤,（1）配置溶液,（2）配制标准液,（3）制备样品处理液,（4）比色,
