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1、乙型肝炎病毒,1,乙型病毒性肝炎（hepatitis B,HB）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的。HBV的感染不仅可以导致急、慢性病毒性肝炎和重性肝炎，而且还与肝硬化（liver cirrhosis,LC）和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展密切相关。20的慢性乙肝患者将发展成为肝硬化，HBV慢性感染的人罹患HCC的危险性是正常人的100 倍。,现状,致病性,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,HBV感染呈世界性分布。西欧、北美、澳大利亚为低流行区（乙性肝炎病毒表面抗原携带率在2以下）；东欧、日本、南美、北美和地中
2、海国家为中流行区；中国、东南亚与南非为高流行区（乙性肝炎病毒表面抗原携带率10左右）。,全世界共有约3.5亿人为HBsAg慢性携带者，其中3/4 在亚洲。HBV感染导致全球每年50120 万人死亡，其中死于HCC的约占32 万。我国是HBV感染的高发区，约60的人群感染过HBV，10的人群为携带者，多达1.2 亿。现有乙型肝炎患者约为1200 万，年发病率为158/10 万。,2,1907年，Dane在“澳抗”阳性者血清标本的电子显微镜观察中，发现了完整的血清型肝炎病毒体，即Dane颗粒，亦称乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）。乙肝病毒属于嗜肝DNA病毒科，是一个带有包
3、膜的DNA病毒，完整的病毒颗粒大小约42nm，具有独特的基因组结构和生物学特性。,乙肝病毒的结构形态,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,3,乙肝病毒的结构形态,HBV在动物病毒中是不寻常的，是由于在被浸染的细胞中能产生多类型的与病毒相关的颗粒，电镜下观察HBV的提纯制品，证明有三种类型颗粒。1.小球型颗粒2.管型颗粒 3.Dane颗粒,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,4,乙肝病毒的结构形态,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,5,乙肝病毒的感染特性,亚病毒颗粒不包含病毒基因组和衣壳蛋白,主要由病毒的包膜蛋白以及宿主细胞来源的脂质成分组成。在HBV感染病人的血清中,HBs
4、Ag亚病毒颗粒的含量远远超过Dane颗粒,血清浓度能达到1012/mL,是Dane颗粒的10 000到1 000 000倍。甚至在检测不到病毒DNA的情况下,HBsAg仍能持续大量存在。这种独特的现象是乙肝病毒所特有的,迄今尚未在其他病毒中发现。,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,6,乙肝病毒的理化特性及抵抗力,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,HBV对理化因素有较强的抵抗力。病毒在30 32 可存活至少6个月，在-20 可存活15年。病毒浓度高时，60 加热10h,或98 加热1min,以及乙醚或pH2.4处理均不能有效灭活乙肝病毒，能够灭活HBV的常用方法和条件包括121高
5、压灭菌20min,160 干烤1h，100直接煮沸2min,以及0.5%过氧化酸，3%漂白粉溶液，5%次氯酸钠和环氧乙烷等的直接处理。,7,乙肝病毒的基因组结构,HBV基因组结构特殊，成不完全闭合的双链形式，负（-）链为全长基因，约含3200个核苷酸，而正（+）链是负链长度的2080%，病毒颗粒内含有DNA聚合酶。在所有已知可感染人体而且具有独立复制能力的双链DNA病毒中，HBV基因组是最小但又是最高效的。它具有以下4个鲜明的特点：（1）不完全双链环状结构；（2）利用重叠的开放读码框（open reading frame ORF）编码多个蛋白质；（3）所有调控序列均位于蛋白质编码区内；（4）基
6、因序列具有多变性。,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,8,乙肝病毒的复制,HBV在细胞内的复制过程较为复杂,最主要的特征是其基因组的复制要经过由RNA中间体到DNA的这样一个逆转录过程。,转录,复制,循环,修复,侵入,释放,HBV的复制过程,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,9,乙肝病毒的复制过程,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,10,乙肝病毒的抗原,HBsAg,HBxAg,HBcAg,HBeAg,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,11,HBsAg,HBsAg是糖蛋白，具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体。存在于三种病毒颗粒的表面。可作为HBV感染的主要标志。
7、具有不同的亚型。各亚型均有共同抗原决定簇a和两组互相排斥的亚型决定簇d/y和w/r，按不同组合形式，构成HBsAg 4个亚型，即adr、adw、ayr、ayw。亚型的分布有明显的地域差异，并与种族有关。,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,12,HBcAg,HBcAg是磷酸化蛋白质，是内衣壳成分，存在于Dane颗粒核心部位的表面。其外表被HBsAg覆盖，血清中不易检出。HBcAg在感染的肝细胞表面表达，是杀伤性CD8+T细胞识别并清除HBV感染细胞的靶抗原之一。HBcAg抗原性强，能刺激机体产生HBc。抗HBc IgG在血清中持续时间较长，而抗HBc IgM则提示HBV处于复制状态。,检
8、测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,13,HBeAg,HBeAg，e是抗原决定簇的名称，为蛋白质，由PreC和C基因编码。在内质网腔，该蛋白质经过处理后分泌至细胞外，成为HBeAg。HBeAg游离于血清中，因其消长与病毒体及DNA聚合酶的消长一致，故HBeAg作为体内有HBV复制及血清具有强感染性的指标。,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,14,HBxAg,HBxAg为反式激活蛋白，能广泛激活病毒和细胞的启动子，促进病毒复制或细胞癌基因的表达，故HBxAg可作为致癌蛋白，与原发性肝癌的发生和发展有关。临床上不作为HBV感染的血清学指标。,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,致病性,1
9、5,乙肝病毒的传播途径,简介,检测技术,诊断与防治,治疗,致病性,日常生活触传播,医源性传播,性接触传播,母婴传播,1,2,4,3,16,乙肝病毒的致病性,简介,检测技术,诊断与防治,治疗,致病性,乙型肝炎的临床表现呈多样性，包括无症状病毒携带者、急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和原发性肝细胞癌（PHC）发生相关等。1.急性肝炎 HBV感染的前驱症状包括发热、疲劳和厌食，常伴有恶心、呕吐和腹部不适。由于肝损伤出现典型的黄疸。约1%黄疸型肝炎发生重症肝炎，死亡率较高。如出现变态反应，可伴有皮疹、关节炎、急性坏死性血管炎和肾小球肾炎。,2.慢性肝炎 在HBV感染中，约5%-10%的患者发生慢性肝炎，临
10、床表现轻微或仅能检出转氨酶轻度升高等肝功能异常。约10%的慢性肝炎发展为肝硬化和肝功能衰竭。,3.原发性肝细胞癌 慢性肝炎与PHC之间的潜伏期短至9年，长达35年。人群流行病学研究显示，HBsAg携带者较无HBV感染者发生肝癌的危险性高217倍。肝细胞损伤和肝组织的不断修复、HBV基因组的整合、HBxAg的反式激活作用等均可导致肝细胞的过度生长，最终引发PHC。,17,乙肝病毒的致病性,简介,检测技术,诊断与防治,治疗,致病性,HBV在肝细胞内增殖，并不直接导致肝细胞的损伤，病毒基因组能与肝细胞整合，引发病毒的潜伏感染。HBV的致病机制以免疫病理损伤为主。,由于患者血液中存在大量的HBsAg或
11、HBeAg，因此体液免疫对肝细胞的损害及中止病毒增殖和扩散作用是有限的；相反与HBsAg或HBeAg的抗原抗体复合物所致的肾小球肾炎、关节炎等肝外免疫病理性损害有关。,在急性乙型肝炎患者外周血中，分离出被HBsAg或HBcAg/HBeAg致敏的CD8+T细胞，但在慢性乙型肝炎患者外周血和肝内，上述CD8+T细胞数量明细那减少，这可部分解释有效的细胞免疫在清除HBV感染靶细胞的同时损伤肝细胞，从而引起急性感染；而在慢性肝炎中，由于抗HBV特异性CD4+T细胞的缺乏，致使有限的细胞免疫不能有效清除病毒，允许HBV在体内持续存在及引起肝持续性炎症反应，甚至由于特异性细胞免疫严重缺乏，成为无症状携带者
12、。,18,检测技术,乙肝病毒检测技术,简介,致病性,检测技术,诊断与防治,治疗,19,微生物学诊断,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,乙肝病毒抗原抗体系统的检测：目前乙型肝炎的病毒学诊断，主要因考血清学方法检测HBsAg、HBeAg及抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe，统称二对半抗原抗体系统。临床上ELISE法最常用。,20,乙肝疫苗,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,第一代血源性乙肝疫苗,第二代基因工程疫苗,第三代新型乙肝疫苗,21,抗HBV临床应用的药物,代表药物a干扰素（interferon-a,IFN-a）高剂量重组干扰素的持续应答率低，一般只有30%-40%，而且伴有
13、严重的副作用,干扰素,代表药物拉米夫定（Lamivudine,3CT）可以通过抑制HBV的DNA聚合酶的活性来发挥迅速、有效的抗病毒的作用，但停药后的反弹和耐药株的出现是个亟待解决的难题。,核苷类似物,Section header,Section header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,22,乙型肝炎的基因治疗,基因治疗是指将正常的野生型基因或特定设计的治疗基因导入机体或特定的细胞内替代、修正、补偿有缺陷的基因功能；或封闭、抑制异常表达的基因以达到治疗某种疾病的目的。,Section header,Sect
14、ion header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,23,乙型肝炎的基因治疗,反基因技术,反义技术,核酶,DNA疫苗,基因治疗主要策略,1,2,3,4,5,6,单链抗体技术,负性多变体技术,Section header,Section header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,24,反义技术,反义技术是指设计与mRNA序列互补的核酸分子，导入细胞，使其遵循碱基配对原则与mRNA特异性位点结合，从而抑制或阻止蛋白质的翻译，达到抗
15、病毒的目的。反义技术有反义寡聚核糖核苷酸（antisense oligodexynucleotide,ASODN）和反义RNA（antisense RNA）。,Section header,Section header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,25,反基因技术,与反义技术不同，反基因技术是根据三螺旋结构DNA形成的原理，以靶基因中同聚嘌呤-嘧啶区域为靶位点，设计、合成反基因寡核苷酸或三螺旋形成寡核苷酸，导入细胞内，通过与双链DNA形成三螺旋结构，抑制或阻断靶基因的转录。,Section header,Se
16、ction header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,26,核酶（Ribozyme,Rz）,核酶（Ribozyme,Rz）是一种具有核酸内切酶活性的RNA分子，可特异性地与靶基因结合并切割靶mRNA。核酶在切割和降解完靶RNA后可重新形成高级结构，防止RNA酶对其自身的降解并循环催化其余的靶RNA。核酶是通过碱基互补配对与底物形成杂交双链结构，从而使核酶具较普通酶蛋白更高的底物特异性，同时作为核酶的底物需具备核酶的特异识别位点。,Section header,Section header,Section he
17、ader,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,27,DAN疫苗（DNA vaccine）,DAN疫苗（DNA vaccine）又称基因疫苗或核酸疫苗，是指将编码某一特定蛋白质抗原的基因片段插入适当的真核细胞表达载体中，构建重组质粒，然后经肌肉注射或基因枪技术直接接种到机体中，宿主细胞摄取质粒后，表达抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫应答。针对HBV的基因疫苗一般选择HBV C区和S区为靶点构建质粒，诱导机体产生特异性细胞免疫和体液免疫应答，达到清除病毒的目的。,Section header,Section header,Secti
18、on header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,28,负性突变体技术,负性突变体技术是通过构建病毒蛋白编码基因的突变体，在细胞内表达异常的病毒蛋白或多肽，从而干扰病毒核酸的包装及病毒颗粒的装配。,Section header,Section header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,29,单链抗体技术,单链抗体技术是将目的抗体基因转导靶细胞并产生抗体，中和病原体并抑制其复制的一种治疗方法。有研究表明，HBsAg的单链抗体（single chain variable fragments,scFv）可使细胞外的HBsAg降低85%。选择抗HBcAg的单链抗体基因在细胞内表达scFv，通过在细胞内形成抗原-抗体复合物和干扰HBcAg的功能可抑制病毒复制。,Section header,Section header,Section header,抗病毒治疗,Section header,简介,致病性,检测技术,诊断和防治,治疗,30,Thank You!,致病性,检测技术,诊断与防治,治疗,简介,31,
