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1、.,1,国家自然科学基金 研究方案撰写技巧,.,2,NSFC项目申请书内容,简表、摘要立项依据研究方案研究条件与基础经费预算,.,3,NSFC研究方案:330分,1.研究内容和拟解决的关键问题（80分）范围合适：3-5个内容：n重点突出：1-2个重点：关键问题选择准确：2.技术路线（90分）设计合理：方法可行：成熟可靠;可重复性强 3.研究方法及手段（90分）方法先进：技术成熟可靠：有创新：4.研究的预期目标（70分）：可以达到，留有余地。发表论文：申请专利：可应用产品的开发：,.,4,摘要的主要内容是研究方案,如：“用方法进行研究，探索/证明问题，对阐明机制 揭示规律有重要意义，为奠定基础提
2、供思路”,.,5,立论依据、研究方案与研究基础的系 立论依据：阐述背景和理由，回答“为什么”研究方案：是申请书的核心，回答“怎么做”研究基础：展示积累和实力，建立“信任感”,.,6,研究方案,研究目标、研究内容和拟解决关键问题研究方法、技术路线年度研究计划及预期进展,.,7,1.研究目标,撰写要求：有限目标，与研究内容相呼应 如：探索问题，明确关系，揭示规律，阐明原理（机制），建立方法等,.,8,【研究目标】,筛选出与老年性白内障相关的基因，明确 部分基因在白内障形成中的作用，从晶状体上 皮变化的角度阐明白内障的发生机理，为防治白内障提供线索。,.,9,研究目标,1个目标:解决科学问题和学术性
3、问题关键问题12个，并与目标一致问题：目标“大、平、浅”没有做到“专、精、深”应提倡“小题大做”,.,10,2、研究内容,存在问题：内容过多，一个研究周期难以完成；内容分散，不能集中阐明研究目标。撰写要求：内容要适当，确保研究周期内完成；与目标相辅相成，为研究目标服务。篇幅要适度，注意与技术路线区别。,.,11,研究内容:相对集中的有限目标和研究目的要一致，要有能支持新思路相应的新内容，体现出创新点和特色。深入的文献调研：凝炼出的科学问题是什么？采用什么创新的方法、途径、思路解决这个科学问题？解决这个科学问题对学术界和临床有什么意义？对社会经济的发展有何潜在的指导价值？,.,12,3.研究方法
4、,（1）病例纳入与排除方法（2）（临床）检测指标与标本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）统计学处理,.,13,材料或研究对象 模型与目标及内容相吻合；材料 可靠，对象可控制；自拟处方 要论证。分 组(方 案)设计和样本量要符合统计学要求，对照要严格。方 法 在保证准确、可靠的前提下，尽 可能要有创新。指 标 针对性强是第一位。尽量采用最 新的专一性强的指标并要论证其 可行性和适用性。,.,14,介绍技术方法的技巧 成熟的方法要简要介绍，重点阐明应用于本研究的依据 新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研究 的理论依据和实验依据。注意：必须对所运用的技术方法原理、流程及在实际应用
5、中可能出现的问题要十分清楚。,.,15,研究方法常见问题 过于简单：在实验方案中只有方法名称而无具体步骤。过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。撰写要求：以研究项目的需求为前提，尽量采用目前 最先进的方法和手段，并将其操作步骤和关键环节体 现在技术路线当中。,.,16,4、拟解决的关键问题 什么是关键问题？-研究过程中对达预期目标有重要影响的 某些研究内容或因素。-为达预期目标所必须掌握的关键技术或 研究手段。撰写要求：找出关键问题，写出解决办法。,.,17,技术路线：路线图，简单明了,.,18,5、技术路线 存在问题：不清楚，不详细，不可行。撰写要求：清晰、详细、注意逻辑性。撰写方法：以时间
6、顺序为主线设计技术路线以研究内容为主线设计技术路线分大小标题，突出逻辑关系。详细地写清楚每个具体步骤。,.,19,研究目标、研究内容、研究方法、技术路线及其关系 1、首先要确定研究目标：国内外现状分析中提出的 具体科学问题就是项目的研究目标2、依据目标确定研究内容，根据内容选择研究方法3、研究内容与技术路线的区别：研究内容：重点回答观察什么指标、阶段目标。技术路线：重点回答怎么做的操作流程。,.,20,6、可行性分析 理论分析：学术可行性 研究手段、方法分析：技术可行性 预实验结果分析：前期基础 对所具备的实验条件进行分析 对项目组成员搭配及其运用技术方法的能力分析,.,21,7、创新性 对创
7、新的理解：创新性与先进性是有根本区别的。原始创新：填补空白或修改传统的理论；新技术、新方法的发明创造。跟踪创新：在前人工作基础上补充、完善现有理论；对原有技术方法修改后产生112的效果。,.,22,8、年度研究计划及预期研究结果 年度研究计划：按年度列出：研究内容及其阶段目标；拟组织 的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等。预期研究结果：理论成果：建立/丰富/补充/填补.技术方法：建立/完善.专 利：可望获得 论 文：国际、国内 人才培养：青年科技骨干、博硕研究生,.,23,研究方案写作要点,条理清楚 逻辑性目标明确 重要性论据充分 科学性方法可行 可行性基础良好 优越性,.,24,案例分享
8、,题目：温肾健脾针法对脾肾两虚型肥胖肠道脂代谢核心菌群的调控机理,.,25,【摘 要】,肠道菌群不仅转化胆汁酸影响脂肪吸收，而且与体重及肥胖关系密切。中医将单纯性肥胖分为脾虚湿阻、脾肾两虚等型，针药均有肯定疗效，但缺乏诸如调节肠道菌群等微观机理研究。本课题拟纳入脾肾两虚型单纯性肥胖患者及健康志愿者各50例，比较其肠道菌群构成与脂代谢特征、大便胆酸盐谱及短链脂肪酸谱、大便能量与膳食纤维残存量、血液脂代谢关键激素(Leptin,insulin,Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾肾两虚型肥胖证之能量收获及脂代谢核心菌群，及其导致机体脂质异常和肥胖的关联机制。以温肾健脾针法治
9、疗至肥胖症状及BMI指标明显改善；采用前述方法检测疗效前30名每2周收集的血清与大便样本，获得温针法对肠道菌群及其脂代谢的动态调控模式。本项目可望揭示脾肾两虚型肥胖与肠道菌群之能量与脂代谢异常亢进的相关性，发现温肾健脾针法的全新治疗机理，拓展中医药肥胖治疗理论，并为多学科攻克肥胖作出奠基性贡献。,.,26,研究意义,肠道菌群与机体能量及脂质代谢关系密切，肥胖患者肠道含有促进能量收获与脂肪贮存的核心菌群。但不同证型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾肾两虚型肥胖相关核心菌群有何特征？针刺减肥作用机理之中，是否包括并如何调整肠道菌群？本课题拟完成这些十分重要的探索性研究。具体研究意义有三：（1）揭示脾
10、肾两虚型肥胖证能量及脂代谢核心菌群，开启针刺减肥研究新领域；（2）建立温肾健脾针法经由调整肠道脂代谢相关的核心菌群而减肥的新学说；（3）构建针药减肥与肠道菌群研究新平台，促进肥胖机理研究与药物研发。,.,27,研究目标,揭示脾肾两虚型单纯性肥胖患者促进能量收获与脂代谢的肠道核心菌群，阐明温肾健脾针法通过调整脂代谢菌群而治疗肥胖的新机制，建立证候与肠道菌群研究平台。,.,28,2.1 研究内容,基于上述目标，本项目拟纳入脾肾两虚型单纯性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及疗效评分前30名患者治疗中采集样本，完成下述研究：2.2.1筛查促进脂肪代谢的肠道核心菌群。筛查对脂肪代谢起促进、抑制或双向作用
11、的代表性菌属，然后采用自动菌种鉴定仪进一步鉴定到种。这三方面代表性细菌，组成与脂代谢直接相关的肠道核心菌群。2.2.2分析胆汁酸谱、短链脂肪酸谱等大便脂代谢相关分子种类与含量。2.2.3 检测单位大便卡路里残存率、膳食纤维含量。2.2.4测试肥胖相关激素(leptin,insulin,Cholecystokinin)与FIAF酶含量。2.2.5体外试验该核心菌群的能量收获效率。2.2.6整合研究，揭示患者能量与脂代谢核心菌群特征，以及针刺减肥新机理。,.,29,2.3 拟解决的关键问题,宿主的生存环境、生活方式、遗传背景、生理病理状态、免疫功能、疾病史与用药史等多种因素，都可影响特定个体的肠道
12、菌群。如何排除众多干扰因素，获得脾肾两虚型单纯性肥胖患者促进能量收获与脂肪代谢的肠道核心菌群，是本项目拟解决的关键问题。本项目拟采取下述四种方法，针对性地排除干扰因素，解决此关键问题（1）严格病例纳入。采用中西医肥胖诊断权威标准，病证结合纳入病例。（2）巧妙设计对照。（3）强化检测指标的互补性、相互验证性。（4）设计体外验证实验。,.,30,图2.实验技术路线流程简图,.,31,3.2 研究方法和技术要点简述,3.2.1 典型脾肾两虚型肥胖证患者的纳入、治疗与疗效判断标准为保障试验结果具有统计意义，同时考虑不超过20%的退出率，确定样本量为50例。由经过培训的中医与西医诊断学专家，纳入符合脾肾
13、两虚型肥胖证患者，以及年龄、性别、生活状况等相匹配的健康对照。,.,32,3.2.1.2治疗方法,脾肾两虚型肥胖针灸治疗上，以温肾健脾为主。故多选用脾经、肾经、任脉和背部膀胱经的腧穴。因为临床显著的个体差异，本项目仅在此提出治则，具体的治疗方案随临临床症状体征而灵活应用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原则：腧穴选择：主穴之体穴主要取天枢、神阙、中极、关元、足三里、太溪、丰隆、三阴交、脾俞、肾俞等，均取双侧；耳穴：内分泌、大肠、三焦、脑点等。脾肾两虚型配穴常取脾俞、肾俞、太白，等。针法选择：选用温针或温补法为主。操作方法：在本校附属医院针灸科诊断室以常规方法，完成操作。隔日针灸1次，1
14、0次为一疗程，20天后观察疗效。休息3日，继续第2疗程治疗。针刺治疗时间选择在饭后1小时后进行。,.,33,3.2.2 实验方法简介,3.2.2.1 核心菌群的筛查采用选择性培养基，从待测大便样品中筛选出与脂代谢密切相关的菌属。拟采用下述培养基（丁维俊等,2007）：双歧杆菌属：BS培养基(但用申请者改进的以新鲜番茄汁代替多种维生素)。乳杆菌属：LBS培养基;按标准配方自制。类杆菌属：KV培养基;将购自上海生物制品所的厌氧菌基础培养基(NO：98404)灭菌后冷却至55，加入兔血(5)、卡那霉素(100g/m1)、硫酸链霉素(5g/m1)及Vk1(0.1)，倾注平皿。柔嫩梭菌属：MRS培养基;
15、M.Smithii菌:MBC培养基（补充3g/L formate,3g/L acetate,0.006%Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Shaedler培养基；均按Martin等（2007）介绍的肠道菌选择培养基配方自制。实验时，用无菌称量纸取粪便0.1g放入0.9ml稀释液，使之稀释10倍。然后用一系列无菌稀释管作对数稀释至10-8。依据申请者前期研究经验及相关文献报道，选择不同培养基的接种稀释度。用微量移液器取20l滴于培养基表面。每个稀释度滴三滴，同一培养皿上滴种三个稀释度。然后迅速置于DY-II型厌氧培养箱中，37培养48h。计数培养皿表面的菌落形成单位数量，乘以稀
16、释倍数，即得到每克粪便标本的菌落形成单位数（CFU）。采用PEMS 3.0统计软件包，用t检验分析不同组别的统计学差异显著性。,.,34,3.2.2.2 UPLCMS法分析大便胆汁酸及其代谢中产物谱,拟使用由四川大学华西医学研究中心开放实验室提供的Waters公司ACQUITY UPLC检测系统，参照Martin等(2007)建立的方法，完成大便检测。标准品由Sigma公司购买。质谱检测在Waters公司产品TOF LCT-Premier(Waters MS Technologies,Manchester,UK)完成。其操作过程如下。取低温保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液调整浓度至1
17、mg/ml，上ACQUITY BEH C18 1.7m柱，以500 ul/min流速洗脱12min，洗脱液组成由甲基氰：水40:60比例逐渐调整为60:40(pH4.0)。将分批收集的洗脱样品上Q-TOF质谱分析系统，以亮氨酸脑啡肽为参照，采用W-optic通路、毛细管电压2.6 kV、锥体电压50 V、喷雾气流600ul/h等条件，完成检测。每个样品重复扫描10次，得其平均值。,.,35,3.2.2.8核心菌群能量收获与脂代谢效率的体外试验,采用Kihara等(2002)建立的微量培养法，检测待测样本对大豆寡聚糖(soybean oligosacchride),乳果糖(lactulose),
18、棉子糖(raffinose),蔗果三糖(kestose)等四种代表性膳食纤维成分的分解与利用效率。其基本操作程序如下。将上述四种膳食纤维分别加到牛心脑浸出液（BHI）培养基中（终浓度为20g/L），按0.5ml/孔接种于24孔培养板。将待测大便样本作10-2,10-3,10-4,10-5稀释，然后接种于培养板(每个浓度梯度设置3个重复样)。放入细菌培养箱中培养6h后，应用前述“酶-重量法”测定培养液中膳食纤维残留量、GCFID 法分析新合成短链脂肪酸（SCFA）种类与数量（样本中原先含有的SCFA，但经102至105倍稀释后，可忽略不计），从而确认肠道菌群样本的能量收获与脂代谢功能。,.,36
19、,3.2.3可行性分析,3.2.3.1学术依据充分、实验方案合理，是本项目得以实现的理论基础3.2.3.2前期相关实验与临床经验，是本项目顺利实施得基本保障3.2.3.3 人员搭配合理、技术熟练，具备完成本项目的知识与人力资源 3.2.3.4 实验设备基本具备，缺少的设备也得到落实,.,37,4本项目的特色与创新之处,4.1 首次提出针灸减肥机理中，应包括调节肠道菌群之新假说。提出在针灸减肥的整体性调控机理中，尚应包括肠道菌群之局部调节。结合申请人研究经历与学科发展态势看，该假说是对传统针刺减肥原理的重要补充善，值得深入研究。4.2 研究方法的组合创新4.3多学科整合效应明显，突出中医自身的特色与优势,.,38,5年度研究计划及预期研究结果,2009年度:纳入患者与健康对照各20例，完成研究内容之14项；总结并优化研究方案，撰写研究论文12篇。2010年度：纳入患者与健康对照各30例，完成研究内容之14项；撰写论文24篇,发表论文34篇；培养青年科技骨干2名。2011年度：完成研究内容之5、6项研究。发表SCI论文2篇。项目结题。培养研究生2名。预期研究结果：理论成果：填补针灸调控肠道菌群的研究空白。技术平台：完善中医药候与肠道菌群研究平台。论 文：国际SCI论文23篇、国内35篇。人才培养：拟培养青年科技骨干2名、硕士研究生2名。,.,39,祝：各位申报成功！,
