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1、实验三、细胞膜的渗透性,一、实验目的了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。二、实验原理与人工脂双层膜不同的是，生物膜不但允许水和非极性分子借简单的物理扩散作用透过，还允许各种极性分子，如离子、糖、氨基酸、核苷酸及很多细胞代谢产物通过特有的机制通过。,血红蛋白从红细胞中逸出的现象称为溶血现象。将红细胞放置在各种溶液中，渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压，使水进入红细胞，引起溶血及细胞膜破裂。由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。因此，可通过溶血现象来测量各种物质通透性的差别。,三、材料、试剂和仪器1材料 一龄鸡，将鸡血溶于含有抗凝剂的等渗液中（肝素钠0.2mg/mL,一般范围在 0.01-
2、0.2mg/mL；等渗液为0.15mol/L NaCl）2.试剂 0.17 molL氯化钠，0.17 molL 氯化铵，0.17 molL硝酸钠，0.32 molL葡萄糖，0.32 molL甘油，0.32 molL乙醇，0.32molL丙醇；0.12 molL硫酸 钠，0.10 molL草酸钠，0.10molL醋酸钠，3.器材 试管，1mL移液枪，载玻片，盖玻片，光学显微镜等。,血液的主要成分,（一）血浆 血浆相当于结缔组织的细胞间质，为浅黄色液体，其中除含有大量水分以外，还有无机盐、纤维蛋白原、白蛋白、球蛋白、酶、激素、各种营养物质、代谢产物等。,（二）血细胞,血细胞分为三类：红细胞、白细胞
3、、血小板。1、红细胞呈双面凹陷的圆盘状，直径约为7.5微米，没有细胞核，细胞质内没有细胞器而有大量血红蛋白。血液的颜色就是由血红蛋白决定的。血红蛋白具有与氧和二氧化碳结合的能力。,2、白细胞在血液中呈球形，能以变形运动穿过毛细血管壁进入周围组织中。根据细胞质中是否含有特殊颗粒，可把白细胞分为粒细胞和无粒细胞。无粒细胞分为两种，淋巴细胞和单核细胞。粒细胞分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞。,3、血小板,也称血栓细胞，在流动的血液中呈双面凸的圆盘状，侧面看呈梭形，直径2-4微米。血小板的功能是参与止血与凝血。,红细胞压积：又称血细胞比容，指的是血细胞在血液中所占的容积百分比。正常成年男性为40
4、%50%，女性37%48%，它反映了血液中红细胞和血浆的相对数量变化。血清：血液经自然凝固12小时，血凝块回缩，析出淡黄色透明液体即血清。,两个概念,抗凝血剂的种类与特点,常用抗凝血剂包括：1.非肠道用药抗凝血剂：如肝素；2.香豆素抗凝血剂类：常用的有双香豆素、华法令和新抗凝等，通过拮抗维生素K使肝脏合成凝血酶原及因子、和减少而抗凝；3.抗血小板凝集药物：如阿司匹林，对血小板环氧化酶有抑制作用；4.蛇毒溶栓剂：如去纤酶、抗栓酶和清栓酶，可溶解已形成的血栓使血管再通，从而起到抗凝血作用。,肝素的作用机理,肝素在体内、体外均有强大抗凝作用。与其带大量负电荷有关，可使多种凝血因子灭活。这一作用依赖于
5、抗凝血酶III（antithrombin III，AT III）。At III是凝血酶及因子、等含丝氨酸的蛋白酶的抑制剂。肝素与At所含的赖氨酸结合后引起AT构象改变，使At所含的精氨酸残基更易与凝血酶的丝氨酸残基结合，形成At III凝血酶复合物而使酶灭活，肝素可加速这一反应达千倍以上。,四、实验程序1血红细胞悬液：用注射器吸入 2mL含有肝素的等渗液后从鸡翼下静脉取鸡血5mL，加 入50mL烧杯，将鸡血用等渗液进行1：10稀释。,2 溶血现象观察：取试管一支加入3mL蒸馏水，加入1滴或2滴稀释的鸡血，轻混一下，然后静止注意观察溶液的颜色变化。由于红细胞发生破裂，溶液颜色由浑浊的红色逐渐清亮
6、。此即为溶血现象。,3、溶血前后的镜检观察在溶血前、后分别取一滴血细胞，滴于载玻片上，并盖上盖玻片，光镜下观察血细胞的形态差异。,4 鸡红细胞的渗透性记时比较（1）分别取3只试管，各加入3ml的 0.17 molL氯化钠，0.17 molL 氯化铵，0.17 molL硝酸钠，加入2-3滴血红细胞悬液，观察反应现象。（2）分别取4只试管，各加入3ml的 0.32 molL葡萄糖，0.32 molL甘油，0.32 molL乙醇，0.32molL丙醇；加入2-3滴血红细胞悬液，观察反应现象。,4 鸡红细胞的渗透性记时比较（3）分别取3只试管，各加入3ml的 0.12 molL硫酸钠，0.10 mol
7、L草酸钠，0.10molL醋酸钠，加入2-3滴血红细胞悬液，观察反应现象。（4）在反应前、后分别取1-2滴血细胞，滴于载玻片上，并盖上盖玻片，光镜下观察血细胞的形态差异。,五、结果与分析将观察到的现象记录，并进行分析,六、思考题1.推断下列溶液的溶血反应会如何。0.17 mol/L氯化钾、0.17 molL硝酸钾 0.12molL氯化镁、0.12 molL氯化钙、0.10 molL硫酸钾、0.10molL醋酸钾、0.10mol/L 柠檬酸钠、0.32 molL甘露醇、0.32mol/L 蔗糖。2.抗凝血剂的种类有哪些？肝素抗凝血作用的机理？,渗透压（osmotic pressure）,用符号表示，单位：atm 的大小可用渗透计测定，或用渗透平衡时高出水面的溶液对下部产生的静水压力表示（hs比重=体积 比重）。也可用Vant Hoff提出的公式计算：=icRT或=n/VRTc=溶液的摩尔浓度；i=等渗系数 是溶液的渗透压（kPa），V是溶液的体积（dm3)，n是溶质的物质的量，R是摩尔气体常数，约8.314。,渗透压的大小和溶液的重量、摩尔浓度、溶液温度和溶质解离度相关，因此有时若得之渗透压的大小和其他条件，可以反推出溶质分子的分子量。,
