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1、紫外-可见分光光度法的扩展Extension of UV/VisSpectrophotometry,紫外-可见分光光度法 定性分析,(一)定性鉴别1 对比吸收光谱特征数据 如max及(E)2 对比吸收度(或吸收系数)的比值 如 A1/A2(或E1/E2)3 对比吸收光谱的一致性(二)纯度检查1 杂质检查 如乙醇或环己烷中少量苯2 杂质限量检查 如肾上腺素中肾上腺酮等,定性分析,max E,安宫黄体酮 2401nm 408 炔诺酮 2401nm 571,VB12,E(361nm),E(278nm),=1.70-1.88,E(361nm),E(550nm),=3.15-3.45,定性分析,A,否定
2、性鉴别！,定性分析,红外光谱法是肯定性鉴别方法，那么，作为否定性鉴别方法的紫外光谱法，是否在定性分析中用处不大呢？,No!,定性分析,Wavenumber(cm-1),Transmittance,Absorbance,Wavelength(nm),UV/Vis,IR,定性分析,A,糯米、梗米、油、水、糖、豆沙 糯米、梗米、油、水、酱油、蛋黄 糯米、梗米、油、水、酱油、肉,定性分析,+0-,+0-,+0-,+0-,+0-,+0-,0(),1(),2(),5(),4(),3(),正交多项式基本图形,定性分析,图、安钠咖注射液（含苯甲酸钠和咖啡因二个组分）通过变换得到的褶合光谱群,Convoluti
3、on spectra of caffeine,these figure shows 164 convolution curves of 2-30 points,Qij,数学显微镜,褶合光谱法定性分析功能(一)定性鉴别(二)纯度（杂质限量）检查(三)稳定性试验,定性分析,丙酸倍氯米松-倍他米松紫外光谱图,定性分析,丙酸倍氯米松-倍他米松褶合光谱差谱图(差谱比率55.70%),Q,j=1 j=2 j=3n=2-30 n=3-30 n=4-30,定性分析,倍他米松-地塞米松结构图,R,定性分析,倍他米松-地塞米松紫外光谱图,定性分析,倍他米松-地塞米松褶合光谱差谱图(差谱比率13.36%),Q,j=
4、1 j=2 j=3n=2-30 n=3-30 n=4-30,定性分析,紫外-可见分光光度法 定量分析,测定样品 AX cX,(三)含量测定（定量灵敏度10-610-7g/ml）1 单组分定量(1)吸收系数法(绝对法)c=A/El(2)标准曲线法 标准溶液 c1,c2,c3,c4,c5 测定吸收度值 A1,A2,A3,A4,A5,(3)对照法 同条件配制 c标,c样 同条件测定 A标,A样 c样=c标A样/A标,定量分析,2 多组分定量两组分光谱互不重叠,a,b,A,寻找1,2互不干扰，作单组分处理,定量分析,两组分光谱部分重叠,a,b,A,寻找1,2，一处不干扰，另一处用A=A1+A2加和处理
5、,定量分析,两组分光谱完全重叠,A,b,a,(1)解线性方程组法,定量分析,(2)双波长分光光度法a.等吸收双波长消去法,1,2,A,a,b,Aa+b=A2a+b-A1a+b=A2a+A2b-A1a-A1b=A2b-A1b=(E2b-E1b)Cb,A,定量分析,Ax+y=kA2x+y-A1x+y=k(A2x+A2y)-A1x-A1y=kA2x-A1x=(kE2x-E1x)Cx.,b.系数倍率法,1,2,x,y,A2,kA2,A1,A,定量分析,导数光谱法：可以给出更多信息，提高分辨能力，能鉴别分子结构细微差别。特点：p157 零阶光谱 A=ECl,一阶导数光谱,二阶导数光谱,.,定量分析,导数
6、光谱法定量分析示意图,200,250,300,定量分析,褶合光谱法定量分析功能(一)单组分定量分析(二)双组分定量分析(三)多组分定量分析,定量分析,苯酚-间苯二酚双组分体系的褶合光谱图-1 苯酚(1)，间苯二酚(2)，混合物(3)在苯酚的过零点(271.90nm)计算间苯二酚含量,3,1,2,定量分析,3,1,2,苯酚-间苯二酚双组分体系的褶合光谱图-2 苯酚(1)，间苯二酚(2)，混合物(3)在间苯二酚的过零点(280.64nm)计算苯酚含量,定量分析,其它化学计量学方法多元线性回归法（MLR）Kalman滤波法偏最小二乘法（PLS）主成分回归法（PCR）,定量分析,紫外-可见分光光度法
7、在药学各学科中的应用,(一)无机化学(二)有机化学/药物化学(三)天然药物化学/生药学(四)药理学/生化药学(五)药剂学,药学应用,(一)无机化学1、（混合）金属离子 Na+/Mg2+、Ag+/Cu2+、Fe2+/Fe3+、Cr3+/Cr6+、Ca2+、Hg2+etc.2、其它无机离子 HCl/HAc、KIO3/I2、NO2-etc.,药学应用,药学应用,常用显色剂：偶氮胂类、偶氮氯膦类、卟啉类、铬天青S、罗丹明B、四苯基硼酸萘胺、偶氮吡啶间苯二酚、四环素、苯甲酰茚满、氧氟沙星、8-羟基喹啉、二甲酚橙等,图 KMnO4试剂空白(1)与NaNO2作用(2)的Vis光谱,525nm,药学应用,(二
8、)有机化学/药物化学1、结构解析2、中间体/产物的纯度检查3、中间体/产物的稳定性试验4、其它 反应是否发生及机理研究 etc.,药学应用,图 偶氮染料Azo7在碱性DMF溶液中光照前后的UV/Vis光谱,图 聚苯胺(PANI)掺杂樟脑磺酸(CSA)前后的UV/Vis光谱,药学应用,图 卟啉化合物TAPP与cfDNA作用后的Vis光谱(Soret带),图 白蛋白与苯甲酸钠(0.0-0.50mmol/L)作用后的UV光谱,药学应用,(三)天然药物化学/生药学1、总生物碱、总黄酮、总皂苷 等的定量分析2、药材鉴别 紫外光谱/紫外谱线组法3、其它,药学应用,图 枳芩合剂(1)、黄芩苷对照品(2)和阴
9、性对照液(3)的UV光谱,A,药学应用,图 复方银黄口服液阳性(a)与空白(b)的UV光谱,图 马钱子粉中士的宁(a)与空白(b)的UV光谱,药学应用,酸性染料比色法：在一定pH介质中，生物碱类(B)与氢离子(H+)成阳离子(BH+)，一些酸性染料（如溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝、甲基橙等）在此条件下可解离成阴离子(In-)，与上述阳离子(BH+)定量地结合成有色的络合物(BH+In-)，从而被某些有机溶剂定量地提取，选择一定的波长测定吸收度值，即得生物碱含量。,药学应用,半夏、山药的乙醇提取液的UV光谱图(1.半夏 2.水半夏 3.掌叶半夏 4.天南星 5.山药 6.腾冲山药 7.木薯根)
10、,红曲的甲醇提取液UV/Vis光谱图(1.橙色红曲 2.变红红曲 3.发白红曲 4.巴克红曲 5.红色红曲 6.紫红红曲 7.烟色红曲 8.土曲霉),紫外光谱法,药学应用,怀牛膝和红牛膝的4溶剂浸液紫外谱线组图谱峰位值比较,紫花地榆和白花地榆的4溶剂浸液紫外谱线组图谱峰位值比较,紫外谱线组法,药学应用,(四)药理学/生化药学1、酶活力（效价）测定 木瓜蛋白酶、谷胱甘肽过氧化 物酶、脂肪酶、碱性磷酸酶、对氧磷酶、酯酶 etc.2、其它 DNA纯度检查、生物体液药物 含量 etc.,药学应用,酶活力是酶催化生化反应能力的表征，一般以在规定条件下，每ml酶溶液，每分钟促进或抑制某生化反应达某程度(如
11、50%)时的酶量定义为1个酶活力单位。,酶活力=K A,其中，K为常数，A为酶（或底物、产物）作用前后的吸收度差值。,药学应用,图 MMO还原酶随NADH(底物)加入量增加(14)的UV/Vis光谱变化,460nm,药学应用,图 过氧化物酶氧化邻苯二胺(底物)的UV/Vis光谱变化(扫描间隔0.3min),220nm,422nm,药学应用,图 鱼精DNA(1)、苯酚(2)、N-乙酰-L-色氨酰胺(3)、N-乙酰-L-酪氨酰胺(4)、N-乙酰L-苯丙氨酸乙酯(5)、内毒素(6)的UV光谱,药学应用,(五)药剂学1、均匀度测定2、溶出度测定3、制剂、配伍稳定性4、其它 体外吸附试验 etc.,药学
12、应用,表 头孢吡肟和甲硝唑混合液的含量、pH值变化(n=3,251),图 头孢吡肟、甲硝唑的UV光谱,?,药学应用,紫外-可见分光光度法 设计性实验,设计性实验,目的,教员：提高学员学习兴趣，提升教学质量 发现适合“第二课堂”的苗子 实验教学新模式的改革与探索学员：见识“验证性”实验以外的实验模式 锻炼初步的科研思维 锻炼综合能力与动手能力,设计性实验,内容,利用已学习的紫外光谱定量分析方法（解线性方程组法、等吸收双波长消去法、系数倍率法、导数光谱法、褶合光谱法等），自行设计实验方案并分析下列双组分体系：,乙酰水杨酸(阿司匹林)+水杨酸,设计性实验,图 水杨酸(1)、乙酰水杨酸(2)和乙酰水杨酸+水杨酸(3)的UV光谱,A,220 250 300 nm,1,3,2,设计性实验,查阅文献或图书资料,紫外光谱实验网络教学,设计性实验,设计性实验,实施,报名方式：自愿报名，择优遴选时 间：遴选(2003.5.09)设计(2003.5.26)实验(2003.6.16)总结(2003.6.24)联 系 人：70389-3(汪),-5(陆),Thanks,
