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1、四环素类抗生素的分析,药本08级 苗露第三小组,What Ill show you：四环素发展的三个历史阶段四环素发展历史上的四个事件,四环素类抗生素 Tetracyclines，TCs,四环素类抗生素 Tetracyclines，TCs,1，药物历史 1500百年前的流传2，药物疗效及理化性质 耐药性和坏牙？3，典型药物及检测 人畜二次污染！？4，药物修饰及其发展 取代基！新活力！,1，1500百年前的流传,最新研究显示，1500年前的远古努比亚人深谙养生之道，他们在啤酒中有意地添加一种物质(链霉菌培养基），从而使啤酒富有大量的四环素，提高了身体免疫能力。,谷物制成发酵稀粥，然后掺入带有链霉
2、菌的土壤，链霉菌可生成四环素。四环素与人体钙物质结合，可沉积在骨骼中，从而易被检测。科学家在紫外线下观测发现，1500年前努比亚人骨骼中富含四环素。,1，1500百年前的流传,四环素类药物发展史,1948年Benj ami n Duggar从金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）中发现了第一个四环素类抗生素金霉素（Chlortetracycline）。同年，辉瑞制药的研究部门发现了土霉素（Oxyt et racycl i ne，氧四环素）。20世纪50年代，四环素（Tetracycline）和地美环素（Demeclocycline）被相继发现。这些天然产物被归类为第
3、一代（1948-1957）四环素。,四环素类药物发展第一阶段,四环素类抗生素,是放线菌产生的一类广谱抗生素。包括金霉素、土霉素、四环素及半合成四环素类抗生素。具有十二氢化并四苯基本结构。该类药物有共同的A、B、C、D四个环的母核，仅在5、6、7位上有不同的取代基。,四环素类药物发展第一阶段,临床用药：,盐酸四环素剂型需要，盐酸化片剂、胶囊、注射剂,四环素类药物发展第一阶段,金霉素、土霉素、四环素有相似的理化性质。化学结构中4位的二甲氨基显碱性，C3，C5，C6，C10，C12，C12a含酚羟基或烯醇基，显酸性，呈两性。能在酸性或碱性溶液中溶解。在干燥条件下比较稳定，但遇光易变色。在酸性、碱性条
4、件下均不稳定，失去活性。,四环素类抗生素,四环素类药物发展第一阶段,2 耐药性和坏牙？,四环素，高浓度时具杀菌作用。自20世纪50年代开始应用，至今已有50余年历史。上世纪70-80年代，四环素产销处于全盛时期，我国有上百家企业生产，临床用量很大。自20世纪80年代后期起，因细菌耐药性增加以及新的抗生素大量上市等原因，四环素产销逐渐萎缩，市场疲软。,四环素类药物发展第一阶段,2 耐药性和坏牙？,四环素与人体钙物质结合，可沉积在骨骼中，从而易被检测。在牙的发育矿化期服用四环素族药物，可被结合到牙组织内，使牙着色。1950年，国外有报道四环素族药物沉积于牙、骨骼以至指甲等，而且还能引起釉质发育不全
5、。国内直至70年代中期方引起注意，并逐渐停用。,四环素类药物发展第一阶段 OVER,四环素类药物发展史,第一代天然四环素的广泛使用，耐药性的问题促成了药物化学家对天然四环素的结构修饰。强力霉素（Doxycycline，辉瑞制药 1967年发明）和米诺环素（Minocycline 为代表的半合成的第二代（1965-1972）四环素问世。在80年代末第一代四环素类药物退出临床应用的范围，转投入兽医市场。,四环素类药物发展第二阶段,3，人畜二次污染！？,天然的四环素类抗生素中金霉素因毒性大，只作外用。土霉素和四环素现在在临床上也已少用，主要用作兽药和饲料添加剂。四环素类抗生素由于能有效地治疗和预防动
6、物疾病，被广泛用于畜牧养殖。可是长期滥用，造成畜牧产品中的高水平残留。人长期摄入这样的畜牧产品后，TCs不断在体内蓄积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生毒性作用,四环素类药物发展第二阶段,3，人畜二次污染！？,行之有效的四环素类抗生素监控检测方式很有必要。,四环素类药物发展第二阶段,药物身份,四环素类药物发展第二阶段,药物鉴别,四环素类药物发展第二阶段,药物检查,酸度（PH）澄清度（可见杂质 eg：菌种产物）HPLC检测四环素类抗生素相关物质的量。,四环素类药物发展第二阶段,有关物质 土霉素、4-差向四环素、盐酸金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素的峰面积分别不得大于对照溶液主峰面积的1/4（
7、0.5%减少一半）、1.5倍（3.0%）、1/2（1.0%）、1/4（0.5%减少至四分之一）、1/4（0.5%减少一半），新增加：其他各杂质峰峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1/2（1.0%）。,药物检查 CHP2010 与2005的区别,四环素类药物发展第二阶段,抗生素类药物的有关物质检查要求提升,抗生素四项常规检测,干燥失重杂质吸光度热原无菌（生物制取分离所得抗生素必须严格限制无菌）,四环素类药物发展第二阶段,HPLC测定药物含量,色谱条件与系统适应性实验,四环素类药物发展第二阶段,目的：建立快速检测四环素及其制剂中盐酸四环素含量的测定方法。（UV-VIS）方法：采用比色法，对经硫酸
8、处理后的样品在431 nm波长处测定吸收值，通过回归方程计算出对应的含量。结果 此方法在0330 gL 的范围内呈良好的线性关系，回归方程：Y=90510 X-68210；r=09995。结论：该方法简单、快捷、靶向性高，重现性好，可用于四环素及其制剂含量的快速初筛。关键词：四环素；快速检测；含量,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段,标准溶液的制备：精密称取标准品（盐酸四环素）适量(约75 mg)，置25 ml容量瓶中，加01 molL 的盐酸10 ml溶解后，再加水至刻度，摇匀，再精密量取上述溶液1 ml，加水至10 mI，摇匀，制成03 gL 的溶液，作为标准溶液备用
9、。,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段,标准曲线精密量取上述标准溶液0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.4、0.5 m1分别置10 ml容量瓶中，分别加入浓硫酸0.45 ml，振荡5 min，再加水稀释至刻度，摇匀，冷却至室温。以空白溶剂为参比，于431 nm波长处测定吸收值。以吸收值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。通过线性回归，标准曲线方程为：r：0.9995 结果显示本品溶液在033 gL 的范围内呈良好的线性关系。,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段,样品的测试：取本品1片，去除包衣，研成细粉，置100ml量瓶中，
10、加01 mol/L 的盐酸10 ml，振摇溶解后，加水至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50ml，加浓硫酸0.45ml，振荡5 min后，加水至10 ml，冷却至室温。于431 nm波长处测定吸收值。然后将测得的吸收值依回归方程计算得对应的浓度值，同法测定3片，取其平均值与样品标示量进行比较，来判别含量是否符合要求。结果：重现性好，RSD为10,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段,快速检测四环素片含量的测定方法,四环素类药物发展第二阶段 Thats all,此方法快速检测含量的适用前提是该产品已鉴定为真品。常规的实
11、验环境下，重现性好。尽管当前检测四环素的方法 有很多，但是适应快速初筛要求的目前还没有。而该法在配备一台便携式精密比色计的情况下，运用经验证的标准曲线，就可以走出实验室，装备于当前的快速检测车，一般就可以在20 rain左右的时间里初筛出可疑产品。,四环素类药物发展史,直到1993 年，9-叔丁基甘氨醯氨基米诺环素（Tigecycline，替加环素）的发明，从而产生了第三代强效抗耐药的甘胺醯四环素。同时自2005年以来，随著临床研究人员发现四环素及其衍生物的许多新用途，四环素及其衍生物的发展也由此进入了新的阶段。,四环素类药物发展第三阶段,替加环素是一种新型的广谱活性静脉注射用抗生素，对有抗药
12、性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也有活性，是甘氨酰四环素类中的首个药品，美国食品药品管理局（FDA）于2005年6月批准上市的新药。,四环素类药物发展第三阶段,4，取代基，新活力！,(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲氨基)-9-(叔丁基氨基)乙酰胺基-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺,4，取代基，新活力！,四环素类药物发展第三阶段,本品是首个被批准用于临床的静脉内给药的甘氨酰环素类四环素抗生素。用于成人复杂皮肤及软组织感染和成人复杂的腹内感染，包括复杂阑尾炎、烧伤感染、腹内脓肿、深部软组织感染及溃疡
13、感染。光谱抗箘性好，耐药性反馈良好。本品在国内尚处于临床研究，申报生产阶段。（截止2007年4月）,4，取代基，新活力！,四环素类药物发展第三阶段,经典文献研读：,1、畜肉中四环素类残留检测方法研究进展 卢运战 祁克宗 朱良强 16731085(2006)100036042、快速检测四环素片含量的测定方法探讨 李传响，刘红3、高效液相色谱法测定复方四环素片中盐酸四环素含量 邱洪，王宝佳，龚红 中国人民解放军第44 医院药剂科，贵阳4、ChP 2005 ChP 2010,谢谢！,Lecturer：苗露Team Member：王鹏 刘伯石 王庆斌 苏玉怀 吴迪 何琨 唐飞 胡建军 王书一 曾伟 张琛,
