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1、厌氧菌,重点：厌氧菌的实验室检查常见厌氧菌的生物学特征,概述,一、厌氧菌的种类与人体分布：定义：在有氧条件下不能生长，无氧的环境中才能生长的细菌。（缺乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进行能量代谢）分类：(1)生物学分类:1.革兰+有芽胞杆菌2.G+无芽胞杆菌、G-无芽胞杆菌、G+厌氧球菌、G-厌氧球菌(2)对氧耐受程度分类:对氧极端敏感的厌氧菌、中度厌氧菌、耐氧厌氧菌分布：自然界广泛分布，是人体正常菌群，其中肠道中厌氧菌量最多。,二、临床意义感染普遍，以混合感染为主。内源性外源性，无芽胞.芽胞.感染原因1.局部组织的氧化还原电势（Eh）2.机体免疫功能 3.机体局部屏障作用破坏感染的临床及细菌学
2、指征：1.局部气体产生 2.发生在黏膜附近的感染3.深部外伤4.有特殊的分泌物5.某些抗生素治疗无效的感染6.其它：镜检有菌而培养阴性等,临床标本肉眼观察分离培养增菌培养及直接镜检厌氧培养2-7d确定厌养培养需氧培养厌氧培养生长无生长生长兼性厌氧菌专性厌氧菌保存菌种分类鉴定药物敏感试验形态与染色菌落特性生化反应药敏性鉴定气液相色谱,厌氧菌的检验,梭状芽胞杆菌属,严格厌氧菌，革兰阳性芽胞比菌体粗，菌体膨大呈梭状，抵抗力强周鞭毛，无荚膜（除产气荚膜梭菌外）致病菌产生外毒素致病，病情严重防治：类毒素与抗毒素,引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌 细菌名称 所致疾病 破伤风梭菌 破伤风 产气荚膜梭菌 菌
3、血症、气性坏疽、软组织感染、食物中毒等 肉毒梭菌 食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤 肉毒症 艰难梭菌 抗生素相关性腹泻、抗生素相关性 伪膜性肠炎,破伤风梭菌（Ctetani）(一)生物学性状图 1.形态染色:革兰阳性芽胞圆形，比菌体大，位于菌体顶端 呈鼓槌状，无荚膜，有鞭毛。2.培养特性:专性厌氧菌,在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽 毛状，庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，恶 臭，产少量气体。3.生化反应：不发酵分解糖类，硝酸盐，H2S，明胶 4.抵抗力：芽胞耐12120min或干热1501h，在干燥的土壤 和尘埃中可存活数年对P、C、E、TE等敏感，氨基糖苷类耐 药。,二、致病条件,伤口
4、需形成厌氧微环境伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口无侵袭力，仅在局部繁殖，外毒素致病,对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)属神经毒(neurotoxin)，毒性极强(对人致死量1g)蛋白质，不耐热,三、致病因子,四、破伤风痉挛毒素,结构菌体：一条多肽释出菌体：轻链（A链）-S-S-重链（B链）B链：神经节苷脂结合的单位A链：毒性作用,作用机制,苦笑面容,角弓反张,五、免疫性,破伤风免疫属外毒素免疫，主要是抗毒素发挥中和作用抗毒素人工免疫,六、微生物
5、学检查法,一般不进行涂片镜检和分离培养典型的症状和病史即可作出诊断,七、防治原则,防止创口厌氧微环境的形成特异性预防：注射破伤风类毒素紧急预防：注射破伤风抗毒素（tetanus antitoxin，TAT）特异性治疗：早期足量抗毒素及抗生素,产气荚膜梭菌(Cperfringens)（一）生物学性状 图1.形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于 菌体中央或次极端，直径不大于菌体，但较少形 成，有荚膜，无鞭毛。2.培养特性：生长迅速，代谢活跃，45生长最好血平板上双 层溶血环，Nagler反应，“汹涌发酵”3.生化反应：H2S，明胶，葡萄糖，乳糖，麦芽糖，蔗糖，卵磷脂酶,二、致病物质
6、,毒素以A型产生量最大引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损在气性坏疽的形成中起主要作用、毒素引起坏死损伤和血管通透性增加肠毒素,气性坏疽,食物中毒,三、微生物学检查法,直接涂片镜检深部创口取材涂片革兰阳性大杆菌白细胞少且不典型伴有其他杂菌早期诊断可避免病人最终截肢或死亡,分离培养及动物实验接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定动物实验如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105病菌/克食品或106病菌/克粪便可确立诊断,四、防治原则,预防及时处理伤口，破坏和消除厌氧微环境预防性的使用抗生素治疗局部感染的处理抗生素抗毒素高压氧舱法,肉毒梭菌（一）生物学性状：图1.形态染
7、色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形位于菌体次极端，比菌体粗，呈网球拍状。无荚膜，有鞭毛。2.培养特性：普通培养基生长，血平板上溶血环，庖肉培养 基肉渣消化，变黑，恶臭。3.生化反应：H2S,明胶,葡萄糖,乳糖,麦芽糖,吲哚,脂酶（二）临床意义 肉毒毒素-毒性最强 嗜神经性。食物中毒。剧毒（对人致 死量为0.1g)（三）微生物学检查直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别,艰难梭菌（一）生物学性状：图1.形态染色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形或长方形，位于菌 体次极端，无荚膜，有鞭毛。2.培养特性：严格厌氧，血平板无溶血环，CCFA平板呈黄色菌 落，在紫外灯下可见黄绿荧光。3.生化反应：H2S,蔗糖,葡萄糖,
8、乳糖,麦芽糖,吲哚,脂酶（二）临床意义 正常菌群。医院感染的重要病原菌。产生A、B两种毒素，即肠毒素和细胞毒素，引起假膜性肠炎（三）微生物学检查 直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别,革兰阴性无芽胞厌氧杆菌临床厌氧菌感染中最常见的病原菌一、类杆菌属 BBE平板上有黑色晕圈二、普雷沃菌属图 KVLB出现黑色菌落三、卟啉单胞菌属四、梭杆菌属,革兰阳性无芽胞杆厌氧杆菌一、丙酸杆菌属二、优杆菌属三、乳酸杆菌属四、双歧杆菌属,厌氧性球菌一、消化球菌属革兰阳性黑色消化球菌二、消化链球菌属革兰阳性厌氧消化链球菌图三、韦荣球菌属革兰阴性小韦荣球菌,谢 谢,标本采集采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气易污染
9、标本不宜厌氧培养齿龈、咽喉拭子、痰液或气管吸出物、小肠内容物、阴道或宫颈拭子、尿液或导尿液、粪便、洗胃液、皮肤表面或伤口边缘等标本不同部位标本采集法 针筒抽取、穿刺术、外科切开等即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行 2.无菌小瓶法：少量脓液运送，加指示剂 3.厌氧袋法：床边接种4.标本充盈法：大量液体标本5.组织块运送法：厌氧罐，钢丝绒 6.棉拭子法：急需时用A、B管,检验方法 直接镜检形态、大小、排列、染色性、有无芽胞、色素、气味等特分离培养1.初代培养：1）培养基：新鲜、预还原 非选择性培养基：BAP(血、维生素、氯化血红素等)选择培养基：KVL
10、B、EYA、BBE、TS2）标本接种固体和液体培养基同时接种3）培养方法厌氧罐培养法、厌氧气袋培养法、厌氧培养箱培养法 4）结果观察 2.次代培养和厌氧菌在确定 3.厌氧菌培养失误的原因 采集运送 培养基 厌氧环境 时间等因素,厌氧罐法以物理或化学方法造成无氧环境图美蓝指示剂（有氧蓝色）刃天青指示剂（有氧红色）抽气换气法：10%H2、10%CO2、80%N2、钯粒 冷触媒法：产气袋、钯粒、美蓝钯粒硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片 C2O+H2H2O钢末法：O2黄磷燃烧法：,气袋法：图 原理同上冷触媒法简便 厌氧手套箱：图 设备自动 其他：OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿可反复打开，Oxy
11、rase酶系统能使培养基中O2去除，并产生CO2。,鉴定试验,形态与染色：用24h内幼龄菌，多染色性，多形性 菌落性状：色素、溶血、荧光等 生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等 抗生素敏感试验：灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆S）、万古霉素等聚茴香脑磺酸钠（SPS）敏感试验：厌氧消化链S气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），过柱分析定性定量DNA G+C mol%值差越大，亲缘关系越远,药物敏感试验,考虑做体外药敏试验的临床情况：明确厌氧菌引起的严重感染、已确证厌氧菌感染而经验用无效、需长期用药的厌氧菌感染。方法 培养基 接种浓度 孵
12、育时间 优点琼脂稀释法 布氏血琼脂 105细胞点 48H 可同时测多 个菌株肉汤稀释法 布氏心老浸液 106CFUML 48H 经济，可商 品化 E试验 布氏血琼脂 0.5麦氏比浊度 2448H MIC精确内酰胺酶 琼脂培养基 单个菌落 3050min 经济快速 检测对青 霉素G和 AMP的耐药,耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药,厌氧菌直接镜检初步鉴别 菌名 革兰染色 形态及其他特征 破伤风杆菌 G+b 细长、梭形或鼓状，有芽胞、周鞭毛 产气荚膜梭菌 G+b 粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜 放线菌 G+b 分支呈棒状、X、Y、V或栅状，脓汁 中的黄色颗粒有琥珀酸气味产黑色素类杆菌 G-b 多形性，长短不一，标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光韦荣球菌 G-c 极小的革兰阴性球菌消化链球菌 G+c 革兰阳性呈现链状的小球菌,
