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1、血细胞直方图,检验科 马燕,血细胞计数原理,一、电阻抗法 库尔特原理(亦称：电阻法、电脉冲法与电感应区技术)：悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，取代相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。,与等渗电解质溶液相比，血细胞为不良导体，血细胞电阻值稀释液的电阻值血细胞通过检测器小孔管微孔的孔径感受器区时，检测器内外电极之间的恒流源电路上电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号。脉冲信号数=细胞数,小孔管：电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分。当电流接通，位于小孔两侧的电极产生恒定电流。若供给的阻抗是稳
2、定的，则小孔的电压不变。当有一个细胞通过小孔时，电阻会增加，瞬间引起电压变化，即“通过脉冲”细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数量越多，脉冲数量越多,各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各个通道，运算出各种细胞参数。细胞群体大小分布情况的图形，就成为“细胞体积直方图”,脉冲信号经过以下步骤，得出细胞计数：信号发生：各种微粒通过检测小孔时，“信号发生器”产生脉冲信号放 大：将血细胞产生的微弱脉冲信号，通过“放大器”放大阈值调节：“阈值调节器”在一定范围内调节参考电平的大小，能区分不同群细胞合适的信号电平，使计数结果尽可能符合实际甄 别：利用“甄别器”，根据阈值调节器提供的参考电平，将
3、低于参考电平的假信号（细胞碎片、杂质微粒）去掉整 形：通过“整形器”，将脉冲信号波形修整成一致标准的平顶波，显示为不同类群的细胞数计 数：经过以上步骤偶，进入“计数系统”，得出结果电阻抗法可精确测出细胞（或类似颗粒）大小，是三分类的主要应用原理，也与光学检测原理，共同应用于五分类血细胞分析仪中。,仪器将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并储存在相应体积通道中，每个通道收集的数据被统计出：相对数，表示在Y轴上；体积，表示在X轴上。白细胞体积从30-450fl分为256个通道，每个通道1.64fl，依据体积大小分别放在不同通道中，得出直方图。,第一群：小细胞群，主要为淋巴，体积35-90fl第二群：
4、中间细胞群，主要为单核，体积90-160fl第三群：大细胞群，主要为中性粒，体积可160fl,Plat和RBC共用一个孔管。正常人RBC体积和Plat体积有明显的界限，因此Plat计数准确容易。当血细胞悬液中含有异常血细胞(如小RBC）时，则划分界限不清。为使Plat计数有较高的准确性，计算机对Plat和RBC分布图进行判断，将Plat计数的上限阈值判定线放在RBC和Plat分布图交叉部分的最低处计数。,白细胞直方图,三分类血球仪一般以电阻抗原理进行WBC分类。依据大多数正常形态的WBC在溶血素作用后的大小排列，人为设置4个鉴别线，将直方图分为三个区域。,计数WBC时，加入溶血素，使RBC破坏
5、，而WBC膜受到破坏后胞浆流失，WBC体积大小发生变化。因此，WBC直方图上细胞排列顺序不是细胞的原始大小，而是经溶血液修饰后的细胞大小。,电阻抗原理：血细胞非导电性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，通过检测小孔时，引起电阻的变化，从而对血细胞计数和分类,加入溶血素前的细胞大小,加入溶血素后的细胞大小,一、设置鉴别线：低鉴别线(LD)：自动寻找30-60fl之间最适位置 高鉴别线(UD)：定在300fl，用作粒度分布异常监视 鉴别线1(T1):自动寻找从LDUD之间WBC分布曲线的波谷，第一波谷值设为“TROUGH”T1 鉴别线2(T2):自动寻找从LDUD之间WBC分布曲线的波谷，第二波谷
6、值设为“TROUGH”T2,仪器是如何分类WBC?,报警信息列表WL：LD的相对度数规定值，可能 存在Plat聚集？较多巨大Plat?WU：UD的相对度数规定值，可能 溶血不充分？较多异常细胞？T1：当第一谷值不能决定时T2：当第二谷值不能决定时F1：小WBC分布异常。T1的相对度数规定值F2：中WBC分布异常。T1或T2的相对度数规定值F3：小WBC分布异常。T2的相对度数规定值,2、监视WBC粒度分布的情况，提供异常分布信息分布正常时，直方图为三峰性分布，在LD、UD之间有两个谷值T1和T2当各值鉴别线不能设定，或在设定的鉴别线位置的度数比规定值高时，将标有WBC粒度分布的异常报警。,二、
7、鉴别线作用：1、对正常形态的WBC进行粒度分类 LDT1：为W-SCR%，相当于LYM%T1T2：为W-MCR%，相当于MEX%(M、E、B）T2UD：为W-LCR%，相当于NEUT%,1.3.LD度数高，无T1、T2：WBC有结果，但标有报警“WL”。其余结果无，报警“WL”。,1.1.LD度数高：所有结果都有，但标报警“WL”。常见于：存在RBC溶血不全？有核RBC？大Plat增多？Plat聚集?纤维蛋白析出？,1.2.LD度数高、无T2：WBC、L%、L#有结果，但标有报警“WL”。其余结果无，报警“WL”。无T2：不能设定中间细胞与中性粒细胞之间的波谷鉴别线 常见于：幼稚粒细胞？RBC
8、溶血不全？标本放置时间过长？,WL LD的相对度数规定值,1.4.黄疸病人的特征性改变：黄疸病人RBC膜上脂质含量增多，蛋白质含量减少，对溶血素的拮抗作用增加，RBC难于破碎,WL：LD的相对度数规定值,2.无T1、无T2：WBC数无报警，但WBC分类结果无,且报警“T1”常见于：幼稚粒细胞？RBC溶血不全？,T1 T1相对度数规定值,第一谷值不能决定,WBC数无报警，L%、L#结果报警“F1”，其余结果无，且报警“T2”常见于：幼稚粒细胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？标本放置时间过长？,T2 T2相对度数规定值 第二谷值不能决定,F1 T1相对度数规定值 小WBC群分布异常,3.
9、1.T1高、无T2：WBC数、L%、L#无报警，其余结果无，报警“T2”,3.2.仅T1高：WBC数、N%、N#有结果，无报警；L%、L#结果报警“F1”，M%、M#结果报警“F2”,3.3.仅T2高：WBC数、L%、L#有结果，无报警；M%、M#结果报警“F2”、N%、N#结果报警“F3”,3.4.T1、T2都高：WBC数报警“WU”；L%、L#结果报警“F1”，M%、M#结果报警“F2”；N%、N#报警“F3”常见于：原始细胞？幼稚粒细胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？标本放置时间过长？,F1 T1相对度数规定值 小WBC群分布异常F2T1或T2相对度数规定值中WBC分布异常F3
10、T2的相对度数规定值大WBC分布异常,4.LD高、UD高：LD高：Plat值标有报警“AG”UD高：WBC报警“WU”,其余结果无报警 常见：溶血不充分?Plat聚集？异常细胞？,WU UD的相对度数规定值,小结,一、“结果不输出”原因分析：T1负责监视淋巴区域和中间细胞区域 T2负责监视中间区域和中性粒区域 当WBC粒度分布曲线异常，仪器找不到谷底T1和/或T2时，T1、T2负责监视的细胞群结果就不输出。二、“WBC直方图异常”原因分析1、病理因素：直方图的变化，可反映血液中WBC群体的变化，但无特异性。引起血液学变化的病 因很多，但其直方图变化是相近的。因此，出现提示报警，就是给检验师命令
11、，要求我们进行镜检复核。2、非病理因素：1）仪器因素：凡影响细胞脉冲信号的因素，都可以使直方图发生变化血细胞自身体积、仪器的阈值、孔电压、脉冲的增益 2）试剂因素：试剂性能好坏直接影响直方图，因此，应使用配套试剂 稀释液的电导率、渗透压、离子强度 溶血剂的种类、浓度、用量、溶血时间：抗凝剂的种类、浓度：EDTAK2 1.5-2.2mg抗凝1ml全血 3）样本放置时间：一般认为样本采集后20分钟2h内检测。过短，可能存在Plat未完全解离，抗凝剂未完全溶解等；过长，则细胞变形，特别是免疫功能亢进的病人，其淋巴细胞容易变成异型淋巴，从而影响直方图变形。,红细胞直方图,红细胞直方图,分析范围：36-
12、360fl正常RBC主要分布在50-200fl直方图上可见两个细胞群：50-150 fl 几乎两侧对称、较狭窄、正态分布;125-200 fl 大RBC和Ret,分类规则（按体积）：在RLRU之间分析 RBC RL Plat和RBC的分界线。可反映出小RBC、大Plat、血小板簇 RU 可反映出RBC聚集,RL与直方图交点高：,电子噪声干扰、破碎RBC、大Plat增多、Plat聚集,MCV 高 MCHC 低 RDW 高,RU与直方图交点高 DW：相对度数20%处的鉴别线与直方图曲线交点增高,RU：电子噪声干扰、冷凝集素干扰、WBC极度增高DW:RBC明显大小不均,MCV 高 MCHC 低 RD
13、W无法得出,RBC曲线跨度大：,小RBC干扰?,曲线不光滑：抬尾,RDW:明显增高,Plat:报警PL PDW:报警DW MPV:报警PL 无法测出,RBC大小不均,RBC大小不均,主峰位于65fl:小RBC,MCV:低 MCH:低 MCHC：低 RDW：轻度增高,抬尾、不与横坐标重合、浮动界标PU在20fl定位：小RBC出现,缺铁性贫血,RBC外观无异常,双峰：,接受贫血治疗、输血，出现多种大小的RBC群,MCHC：低 RDW:高 报警MP,治疗2w后（输血、铁剂）：双峰,MCV:低 MCH:低 MCHC：低 RDW：高 报警MP,治疗4w后：双峰，但以正常RBC为主,MCV:低 MCH:低
14、 MCHC：低 RDW：高 报警MP,缺铁性贫血治疗后,无T2：,出现连续体积大小的细胞,RBC:低 Hb:低 HCT：低 MCV：高,WBC：高 M:无法得出 报警T2 N:无法得出 报警T2,曲线右移 大细胞性贫血：,大细胞性贫血（CML）,血小板直方图,分析范围：2-30fl正常Plat直方图：左偏态，主要分布在2-15fl3条鉴别线：2条固定鉴别线：PL：2-6fl;PU:12-30fl 1条浮动鉴别线：12fl,RBC分析范围：36-360fl,对于和Plat大小相似的细胞大小，成为“非Plat颗粒”，包括小RBC、RBC碎片、WBC碎片、细菌、真菌、免疫复合物，误认为Plat，使得
15、假性增高；对于聚集的Plat因体积增大，而不归类为Plat，使得假性减低,PU Plat和RBC的分界线。可反映出 小RBC、大Plat、血小板簇,报警PL:LD 相对度数超过设定值,Plat:报警PL PDW:报警PL MPV:报警PL P-LCR：报警PL 低,存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎RBC、白血病性WBC碎片等的干扰,报警PU:UD 相对度数超过设定值,Plat:报警PU PDW:报警DW 无法得出 MPV:报警PU 无法得出 P-LCR：报警PU 无法得出,存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎RBC、小RBC、大Plat、Plat聚集等,报警DW:峰值高度20%度数处，粒度分布宽度异常,破碎RBC、Plat大小不均、冷凝蛋白,报警MP:2个以上峰,PDW:报警MP 无法得出 MPV:报警MP 无法得出 P-LCR：报警MP 无法得出,Plat聚集、Plat值过低,
