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1、激光共聚焦显微镜 光谱扫描型(倒置显微镜)简易使用说明书,启动系统显微镜镜下观察微分干涉差观察 荧光观察 取图的操作界面 如何取图平面单标 平面双标同步扫描方式 序列扫描方式 平面单标 微分干涉差扫描双标 光谱扫描 操作界面 图像分析打开文件 图像的叠加 比例尺的使用 图像的重建 图像的旋转 保存图像 保存到关闭系统附录,内容,.打开计算机.打开激光器.(打开钥匙开关.).多线氩离子(,)(打开电源开关后,打开钥匙开关.).氦氖绿().氦氖红()打开汞灯电源开关.登陆 系统.双击快捷方式：打开 应用软件.*系统软件的启动需要等待一定时间.,开启系统,:,:,微分干涉差观察,.使用手控面板选择物
2、镜.(参照.).插入起偏镜.插入微分干涉滑块.点击软件中的图标.标本聚焦.,按照的操作转换物镜的倍率之后，对：物镜各物镜对应的元件*进行操作.,*元件,.使用滑块控制卤素灯的光强.检查滤色片转盘的位置是否为“”.如果不是,用手柄按下图标.,显微镜镜下观察,手控面板,用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节.,荧光观察,显微镜镜下观察,.使用手控面板选择物镜.点击软件中的图标.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照.).标本聚焦.,.选择第步后,显微镜进入荧光观察状态.注意此时汞灯的机械快门要打开.(建议通常机械快门要放在关闭的位置().).检查滑块是否拉出.,关于荧光滤色片：蓝色激发绿色荧光（例：、等）
3、：绿色激发红色荧光（例：、等）,.观察之前，检查汞灯的机械快门要放在开启的位置().,图像的拇指索引,明场观察(显微镜镜下观察),荧光观察(显微镜镜下观察),染料选择,光路图,取图条件的保存,调出取图条件,设定,取图的操作界面,扫描的按钮选择或每个通道的调节 共聚焦的孔径大小卤素灯的光强调节 方式,图像显示窗口,内存中所显示的文件,扫描模式扫描速度像素数缩放和平移 激光输出的调节,扫描的设定物镜聚焦时间间隔和时间计数(用于或扫描),扫描带宽选择,获取单张图像（平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（）,点击软件中的按钮 关闭汞灯快门.同时,点击按钮 关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中,
4、双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤.点击按钮.(关闭染料选择面板可以用按钮.),染料选择后的显示界面,如何取图(平面单标),扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描),如何取图(平面单标),.点击 按钮开始扫描.调节绿色()图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录.).点击按钮停止扫描.(参照.),如何取图(平面单标),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).点击按钮取得一幅图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像
5、:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.格式:创建单个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,获取单张图像（平面）（荧光图像）例：绿色荧光（）红色荧光（）二重染色同步扫描,如何取图(平面双标),点击软件中的按钮 关闭汞灯快门.同时,点击按钮 关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤.点击按钮.(关闭染料选择面板可以用按钮.),染料选择后的显示界面,
6、如何取图(平面双标),扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描),.点击 按钮开始扫描.调节绿色()图像和红色()图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录.).点击按钮停止扫描.(参照.),如何取图(平面双标),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).点击按钮取得一幅图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单
7、独分割.格式:创建单个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,获取单张图像（平面）（荧光图像）例：绿色荧光（）红色荧光（）二重染色序列扫描(这里介绍线序列扫描.),如何取图(平面双标),点击软件中的按钮 关闭汞灯快门.同时,点击按钮 关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤.点击按钮.(关闭染料选择面板可以用按钮.),染料选择后的显示界面,如何取图(平面双标),.点击序列扫描,并选择线序列方式.点击 按钮开始扫描.调节绿色()图像和红色()图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附
8、录.).点击按钮停止扫描.(参照.),如何取图(平面双标),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).点击按钮取得一幅图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.格式:创建单个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,获取单张图像（平面）（荧光图像微分干涉）例：绿色荧光（）图像,如何取图(平面单标微分干涉差),.点击软件
9、中的按钮 关闭汞灯快门.同时,点击按钮 关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤.点击按钮.(关闭染料选择面板可以用按钮.).选择.,染料选择后的显示界面,如何取图(平面单标微分干涉差),扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描),.点击 按钮开始扫描.调节绿色()图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录.).点击按钮停止扫描.(参照.),如何取图(平面单标微分干涉差),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除
10、.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).点击按钮取得一幅图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.格式:创建单个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,和 按钮:点击移动.:点击移动.,获取图像()(荧光图像)例:绿色荧光()和红色荧光()双标这里介绍线序列扫描取图的过程.,如何取图(扫描双标),.采用和页步骤到.输入大小(点击按钮可以使用推荐的值),并选择.点击 按钮开始扫描.点击 和 按钮上移
11、焦点位置.(参照.).当图像显示到达上限时,点击 按钮确定.点击 和 按钮下移焦点位置.(参照.).当图像显示到达下限时,点击 按钮确定.点击按钮停止扫描.,确定轴的上限和下限如下.,如何取图(扫描双标),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).选择按钮.点击按钮取得图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.格式:创建单
12、个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,*可以通过调用扫描状态来实现该设置.更多的信息,参照附录.,获取光谱图像()例:绿色荧光()和绿色荧光()双标,如何取图(光谱扫描),.点击软件中的按钮 关闭汞灯快门.同时,点击按钮 关闭卤素灯快门.点击按钮 检查光路.做如下设置.,选择 或.,选择作为激发光源.,选择.,只选择.,如何取图(光谱扫描),.点击按钮,出现光谱设置窗口.设置光谱带宽为,以此 为例.(参照附录关于改变光谱带宽的方法.).点击 按钮开始扫描.在观察图像的同时,移动光谱带到图像最亮的位置状态.(参照附录关于改变光谱带宽的方法.)注:移动光谱带位置要保持光谱 带宽为 不变.
13、调节图像.(参照附录.).点击按钮停止扫描.,如何取图(光谱扫描),.选择,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用 方式.更多的信息，参照附录.).设定要扫描的波长范围,光谱带宽 和步距.开始波长 结束波长 光谱带宽 步距.选择按钮.点击按钮取得图像.点击按钮,“()”界面就出现.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”和类型是 软件专用的图像格式.),.双击资源管理器中要选择打开的文件.,图像分析(打开文件),的操作界面,图像分析(图像的叠加),.点击按钮 并选择.,.要保存此图像,右击此图像,选择
14、 并命名.,图像分析(比例尺的使用),.点击按钮.点击图像的同时,拖放此比例尺到一个特定的位置.点击手柄的左端或右端,移动鼠标.选择比例尺并右击选择属性的设置.设置具体的比例尺属性.,改变比例尺的大小,改变文本,颜色,字体等.,以一定的角度观察图像,观察图像的某个横截面,图像分析(图像的重建),.点击按钮.创建图像.拖动鼠标以一定的角度观察图像.要保存此图像,进行下一页第步的 操作.,.点击按钮 并选定.拖动鼠标观察某个垂直横断面.要保存此图像,进行下一页第步的 操作.,保存上一页中第、选项的图像,图像分析(图像的重建),.点击按钮.会创建一个图像(带文件名).保存该幅图像:右击图像管理器中显
15、示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“”类型是 软件专用的图像格式.),专用的图形格式格式:创建“一个含()的图像”和“一个附属文件,”不能单独分割.格式:创建单个的格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.,动画的播放,图像分析(图像的旋转),.点击按钮.创建图像.拖动鼠标以一定的角度观察图像.,.点击并控制按钮 实现图像围绕着 轴旋转.再次点击停止旋转.点击并控制按钮 实现图像围绕着 轴旋转.再次点击停止旋转.点击并控制按钮 实现图像围绕着 轴旋转.再次点击停止旋转.,图像分析(图像的旋转),.点击按钮.点击 菜单.选择旋转轴.输入旋转的角度.选择类型并点击按钮.输入一个文件名并
16、点击按钮.,开始角度 结束角度 旋转速度 单次旋转的角度,图像分析().每种荧光染料的定位都很明显的情形,基于图像中类似荧光光谱相连的原则,通过已知的每种荧光染料的定位分解光谱并得到图像.,例:绿色荧光()和绿色荧光()双标,.打开一幅 和 双标的图像.分别为 和 选定一个封闭的区域.从下拉菜单中选择 图标.双击和区域.检查处理类型设置为“”并且 点击按钮.获得图像.,记载的荧光光谱在此显示.,图像分析().基于使用单标样品作参照的情形,从单标记的图像中取出单个荧光光谱作为参照,进行光谱的分解并得到图像.,例:绿色荧光()和绿色荧光()双标,.打开一幅 单标取样 的图像.为 选定一个封闭的 区
17、域.从下拉菜单中选择 图标.双击区域.点击 图标.输入保存的名字并且点击按钮将 的光谱记载到数据库中.对于单标,重复步.,图像分析().基于使用单标样品作参照的情形,.打开一幅 和 双标的图像.从下拉菜单中选择 图标.双击数据库中记载的 和 图标.检查处理类型设置为“”并且 点击按钮.获得图像.,图像分析().基于只知道一定数量标记的荧光染料的情形(),基于图像中类似荧光光谱相连的原则,通过已知的一定数量的荧光标记分解光谱并得到图像.,例:两种类型荧光标记的样品,.打开一幅具有两种类型荧光标记的图像.从下拉菜单中选择 图标.选中两个检查框用于计算.(具有三种类型荧光标记时要选中 三个检查框.)
18、.检查处理类型设置为“”并且 点击按钮.获得图像.,或者图像的每个通道存为 格式的文件,.右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像.设置 类型为 并保存.*存为 和 格式也可以.,图像分析(保存图像),*,或者通道合并的图像存为 格式的文件,带有比例尺的图像存为格式的文件,.右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像.设置 类型为 并保存.检查要合并的通道并保存.*存为 和 格式也可以.,.右击该幅图像.选择 并以新的文件名 保存该幅图像.,动态图像存为格式的文件,.右击该图像.选择 并以新的文件名 保存该图像.,保存到,.插入一张光盘.点击.选择文件并拖放到的窗口.
19、点击.点击.开始刻录.点击按钮结束.,关闭系统,.选择,退出软件.退出.()选择.()在 窗口中,选择 并点击按钮.关闭激光器.(关闭钥匙开关.).多线氩离子(,)(等待风扇停止,关闭电源开关.).氦氖绿().氦氖红().关闭汞灯电源.,激光共聚焦显微镜 光谱扫描型(倒置显微镜)附录,共聚焦的原理和调节原理,附录,:探测器灵敏度的调节()给定值 灵敏度 图像亮度(注意背景噪音变得突出.)*推荐值为或以下.按钮:改变电压以为一个单位(投射光通道设定为)调节()给定值 图像亮度 依照放大率的变化,图像变得更亮.按钮:改变增益以 为一个单位 调节()给定值 图像亮度 按钮:改变增益补偿以为一个单位,
20、C.A.:共聚焦孔径大小的调节(m)给定值 C.A.大小 图像亮度(注意光学切片的厚度变大.)*推荐使用Auto设置.经过调节C.A.要恢复初始值,再次点击Auto.按钮:改变孔径大小以1m为一个单位.,M_Ar or HeNeG,HeNeR:激光输出强度的调节(%)给定值 输出强度 图像亮度(注意荧光漂白变得明显.)*激光输出强度尽量要小.按钮:改变输出强度以1%为一个单位.,获取图像如何降低背景噪音,降低扫描速度,通过降低扫描速度探测器从开始检测就 忽略背景噪音.优点:相比Kalman方式,能够取到更锐的图.缺点:单次扫描的速度很慢.,1.选择扫描速度.,附录2,*,Auto ON:扫描速度变慢时,背景噪音被去除而图像亮度不变.Auto OFF:扫描速度变慢时,背景噪音被去除而图像亮度增加.,Kalman方式,通过重复获取一定数量的图像进行平均算法运算处理.从而去除背景噪音和粗糙度.优点:单次扫描的速度很快.缺点:由于图像平均而图像模糊.,1.点击Kalman并选择Line或Frame方式.2.输入累计数字(扫描的次数).,
