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1、手工法及自动血细胞分析仪法进行,红细胞、白细胞、血小板检查,小榄人民医院,检验科,血液的基本知识,Add Your Text,血液的组成,concept,Concept,Concept,Concept,5/6/2020,血液的基本知识,?,血液的概况,?,血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、,血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、,酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。,水分占,91%92%,。,?,理化特征：红色（血红蛋白）不透明，含量占体,重的,7-9%,，约,5L,。,Ph,值为,7.357.45,，比重为,1.051.06,，相对粘度为,45,，渗透压为,2.63.9k
2、Pa,。,5/6/2020,血液的基本知识,血细胞的分类和形态,寿命：,7,天,120,天,8,天,直径：,60120fl 1201000fl 230fl(20um)(6.77.7um,(23um),功能：抗感染，免疫,携氧，代谢产物,凝血功能,白细胞,红细胞,血小板,5/6/2020,血液的基本知识,?,白细胞的种类,中性粒细胞（,75%,）单核细胞（,5%,）淋巴细胞（,25%,）,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞（顺序同下图）,经过瑞氏染色后的各种白细胞,5/6/2020,手工法检测血细胞,?,手工计数红细胞（显微镜法,）,?,检测原理,显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，,计数
3、一定范围内的红细胞，经换算得每升血液中的红细胞,数。,?,操作,1,、,10ul,末梢血或,EDTA,抗凝静脉血,2,、加入,2ml,等渗液中，混匀,3,、混悬液充入,改良牛鲍计数板,4,、高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个中方格内的红细胞总数,A,。,5,、换算,5/6/2020,手工法检测血细胞,?,手工计数白细胞（显微镜法,）,?,检测原理,显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，,计数一定范围内的白细胞，经换算得每升血液中的白细胞,数。,?,操作,1,、,20ul,末梢血或,EDTA,抗凝静脉血,2,、加入,380ul,等白细胞稀释液液中，混匀,3,、混悬液充入,改良牛鲍
4、计数板,4,、高倍镜下计数四角及中间,5,的大方格的白细胞总数,A,。,5,、换算,5/6/2020,手工法检测血细胞,手工法计算血小板,显微镜直接计数法,（,1,）普通光学显微镜计数法,（,2,）相差显微镜计数法,1,、普通光学显微镜检查（手工法）,原理：类似红（白）细胞手工法计数,计数中央大方格内四角和中央共,5,个中方格的血小板。,5/6/2020,2,、,相差显微镜直接计数法,利用样品中质点折射率的不同或质点厚度的不,等，产生光线的相位差，提高细胞的清晰度和立,体感，增强分辨率。（手工法的参考方法）,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,血细胞分析仪的知识,1,、血球仪发展
5、,?,50,年代,80,年代（半自动）：需将样本经机外稀释后才能,检测，易受干扰，随机误差也大。,?,80,年代后（全自动）：血液直接被吸入血液细胞分析仪后，,在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测，有较高的精,确度和准确性。,?,近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、涂片,机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。自动加样系,统和真空采血管的应用，避免实验室的随机误差，提高工,作效率，避免实验环节造成的血行感染，成为仪器发展和,使用的潮流。,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,2,、工作原理,细胞分析原理：阻抗法,?,血红蛋白测量,:,光电比色法,氰化高铁血红蛋白,(HiCN
6、),测定法。,?,其它参数：通过计算机内换算,?,白细胞分析原理,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,白细胞分析原理,?,加溶血素后，白细胞大小分布如下：,第一群：小细胞区（,3590fl,）,淋巴细胞,第二群：中间细胞（,90160fl,）,嗜碱性、嗜酸性、单核,第三群：大细胞区（,160fl,以上）,中性粒细胞,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,血细胞分析仪的基本工作原理,?,血细胞分析仪的类型,?,电学型,电阻型：利用血细胞通过微孔时瞬间的电阻变化,产生脉冲电流而计数。,电容型：利用电极间加高频，血细胞通过时，静,电容量发生变化而计数,?,光学型,血细胞固定
7、型：利用光散射计数。,血细胞流动型：利用流体力学原理计数,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,1,、电阻抗法,?,电阻阻抗法计数原理,血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗,法计数的核心部件,-,阻抗法测试传感器（见下页示意图），,管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，,小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔,瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变,大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大,的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直,到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在,电极两端产生一连串的电压脉冲
8、。脉冲的个数与通过小孔,的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些,脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞,分类、计数的原始数据。,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,电阻阻抗法计数原理,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,白细胞的计数,1,、白细胞的三分类,?,血液细胞分析仪将白细胞按体积大小（电压幅值,的高低）从,35450fL,分为,256,个通道，每个通道,1.64fL,，细胞按大小放在不同的通道中，得到白细,胞的直方图。,?,第一群（,3590fL,）：淋巴细胞,?,第二群（,90160fL,）：单核细胞（中间细胞）,?,第三群（,160f
9、L,）：中性粒细胞（大细胞）,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,WBC,直方图,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,RBC,直方图,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,PLT,直方图,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,2,、新的方法,容量、电导、光散射（,VCS,）测导法,阻抗与射频技术联合检测分类法,光散射与细胞化学技术联合应用,其它：多角度偏振光散射白细胞分类（,MAPSS,）,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,1,、激光法,?,近十余年来，随着半导体激光器技术的进步，使,用（相关试剂处理加激光加流式细胞术）方法的,白细胞五分类血球仪
10、成为当前的主流。,?,激光法五分类血球仪使用光散射进行测量都是基,于,Mie,散射理论,，如东亚,SF3000,?,通过激光激发产生荧光进行血细胞分析成为高档,机型的基本技术，如东亚,XT1800,系列，,XE2100,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,激光法检测原理,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,2,、多角度激光偏振光散射检测法,90,消偏振光散射,将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其它细胞中分,离出来,10,狭角散射光,用来测定细胞结构,0,前角散射光,用来测定细胞的体积,90,垂直散射光,对细胞内部颗粒及细胞质进行测量,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞
11、,3,、鞘流技术,液体流动状态有一个分界点，这是一个常量等,于,2300,，既称为雷偌数,Re,。,Re=dv/,d,管内经，,-,密度，,v,流速，,-,粘滞系数,当,Re2300,时液流处于层流状态，,Re2300,时液流处于湍流状态。,假设：流体为纯水=1，=1，,d=100m 代,入公式计算得：,v=23,米,/,秒,此值即是纯水的湍流、,层流分界点。,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,射频检测原理,细胞壁不能使低频电流通过能通过高频电流。细,胞核的大小和密度不同，它们对高频电流的阻抗,也不同，因此可以用来区分白细胞。,射频与电阻抗联合检测原理,5/6/2020,自动血细胞
12、分析仪检测血细胞,5,、电阻抗和射频电导,这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞,淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞,检测系统：在细胞悬浮,淮中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细,胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统,时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导,法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分,成淋巴细胞、单核细和中性粒细胞三个群体。,嗜酸性细胞和嗜碱性细胞,两种检测系统：在细胞悬浮淮中,加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他,细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱,性细胞进行计数。,幼稚细胞,检测系统：在细胞
13、悬浮淮中加入硫化氨基酸，由,于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且,对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，,只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。,SYSMEX,公司的,SE9000,血细胞分析仪,5/6/2020,自动血细胞分析仪检测血细胞,?,血液分析仪法检测红细胞,?,采用电阻抗法或激光检测法,5/6/2020,?,方法学评价,方法,优点,缺点,适用范围,显微镜,计数法,传统方法，设备,简单，廉价,费时费力，,精密度低,参考方法；分析,仪异常结果复核,血液分,析仪法,操作便捷，,易于标准化，精,密度高,价贵；环境,要求较高,健康人群普查；,大批量标本筛检,5/6/
14、2020,血液分析仪法检测血小板,电阻抗法,核酸染色荧光散射法,单克隆抗体染色荧光散射法,5/6/2020,?,1,血小板,2,大血小板,3,红细胞,?,4,红细胞碎片,5,碎片,6,红细胞影,B,低,角,度,放,大,的,散,射,光,信,号,A,高角度放大的散射光信号,5/6/2020,XE-5000,双方法检测血小板,方法一：鞘流电阻法,(PLT-I),?,能准确计数绝大数,正常,形态和数量,PLT,方法二：核酸荧光染色光散射法,(PLT-O),?,对,数量少形态异常,PLT,准确性高,?,鉴别,PLT,、小,RBC,、,各种细胞碎片准确性高,5/6/2020,荧光染色光散射法,FALS S
15、ensor,Laser,前向散射光,FALS Sensor,90LS Sensor,Laser,侧向散射光,前向散射光,侧向散射光,5/6/2020,?,流式细胞仪法,用免疫法荧光素标记特异的血小板,单克隆抗体。,（参考方法）,5/6/2020,?,方法学评价,计数方法,优点,缺点,备注,相差显微镜,直接计数法,准确性高，血小板,易于识别,所用仪器昂贵,手工血小板计,数的参考方法,血细胞分析,仪计数法,计数简便、快速、,重复性好，同时测,定,MPV,、,PDW,等,多项指标,不能完全区分血,小板与其他类似,大小的物质,常规筛检方法,流式细胞仪,法,特异性强，可区分,红细胞和血小板,检测成本高,参考方法,5/6/2020,?,血液细胞分析仪的评价,?,精确度（准确性）高,?,携带污染率低,?,重复性好,?,线性范围,?,可比性高,5/6/2020,手工法与自动血细胞分析仪检测血细胞的对比,?,手工法,血细胞分析仪,?,手工法,操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检,测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实,验结果的精确性、准确性差。,?,血细胞分析仪,测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、,高效。为临床提供更多有用的实验数据,Thank You!,Add,your,company,slogan,
