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1、医学微生物学实验二,基础医学院病原生物学教研室,主要内容,革兰染色（Grams stain）培养基及接种,革兰染色（Grams stain）,Gram stain-由丹麦细菌学家革兰(Hans Christian Gram)创建的一种鉴别染色法。原理程序结果意义,革兰染色原理,细胞壁结构不同 等电点差别,革兰染色程序,程序:涂片 干燥 固定 染色 镜检,染色过程及结果,革兰染色 采用4种试剂分4步：结晶紫 碘液 95%乙醇 复红（初染）（媒染）（脱色）（复染）革兰阳性菌 革兰阴性菌（菌体为紫色）（菌体为红色）,1min 水洗,1 min水洗,30 s 水洗,1 min水洗,革兰染色意义,鉴别细
2、菌帮助临床选择用药理解细菌的致病作用,培养基及接种,培养基制备（示教）培养基接种细菌的培养方法,基础培养基制备（示教）,1.培养基的概念：将适合于细菌生长繁殖的各种营养物质用人工的方法配制而成的营养基质。,2.培养基的制备过程,以牛肉膏汤培养基为例（液体）成分：牛肉膏3克蛋白胨10克氯化钠5克蒸馏水1000毫升,调配,加热融化,过滤,调pH,分装,高压灭菌,无菌检测,冰箱备用,肉汤培养基,取1000毫升肉浸液，加入10克蛋白胨和5克氯化钠 经上述步骤制成。其营养价值较牛肉膏汤要高。但因肉浸液制作烦琐，而牛肉膏汤培养基制作简单，故常用。,固体、半固体琼脂培养基,琼脂：属于凝固剂，其化学成份主要是
3、酸性多糖。其特点是当温度达到98以上可融化于水，45以下则凝固。半固体琼脂培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入0.30.5琼脂制成。固体琼脂培养基：取100毫升pH7.8的肉汤或牛肉膏汤培养基加入23克的琼脂制成。,培养基的种类,按照培养基的用途可分为五类。按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。,厌氧培养基,基础培养基,营养培养基,选择培养基,鉴别培养基,培养基按照物理性状分类,液体培养基 固体斜面培养基 半固体培养基,固体平板培养基,培养基接种,固体平板培养基固体斜面培养基液体培养基半固体培养基,固体平板培养基,用途：分离混杂的细菌接种方法：连续平行划线法和分
4、区划线法生长现象：呈菌苔和菌落样生长,1连续平行划线法,涂基线划线划线完毕，将琼脂平板培养基复盖皿盖，并在培养皿底玻璃上，用蜡笔注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等，将培养皿倒置放在37孵育箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下，同时可以保持琼脂表面的湿润。,平行划线法的示意图,A B是最常使用的、最基本的方法，其中图B常用于含菌量较少的标本。,2分区划线法,基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。用于含菌量较多的混杂标本。本次试验要求同学掌握细菌分离培养的分区划线法。,固体平板培养基,用途接种方法生长现象,细菌在固体平板培养基上的生长现象,细菌
5、在固体平板培养基上呈菌苔或菌落样生长。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色、溶血环等性状。,细菌在固体平板培养基上呈菌苔和菌落样生长,细菌在固体培养基中的生长情况,固体斜面培养基,用途：观察细菌的培养特性、生化反应、保存菌种。接种方法：连续划线法。生长现象：呈菌苔样生长。,操作手法,斜面接种法,固体斜面培养基接种后细菌生长现象,液体培养基,用途：增菌及检测生化反应。接种方法：研磨接种。生长现象：浑浊、沉淀、菌膜样生长。,液体培养基接种法,细菌在液体培养基中的生长现象,半固体培养基,用途：检测细菌动力、生化反应。接种方法：接种针穿刺法生长现象：沿穿刺线生
6、长-无动力。沿穿刺线扩散生长（呈云雾状或羽毛状）-有动力。,穿刺培养的生长特征,细菌在半固体培养基中的生长现象,A、有动力 B、无动力、C、空白对照,细菌的培养方法,普通培养法 二氧化碳培养法 厌氧培养法,普通培养箱 厌氧罐 厌氧袋,厌氧培养箱,Thank You!,细菌的细胞壁（cell wall）,1.化学组分：聚糖骨架 革兰 肽聚糖 peptidoglycan 四肽侧链 阳性 五肽交联桥 菌 磷壁酸 techoic acid 革兰 肽聚糖 peptidoglycan 阴性 脂多糖 lipopolysaccharide,LPS 菌 脂质双层：内有OMP 外膜 脂蛋白,G+菌肽聚糖结构,G-菌肽聚糖结构,革兰阳性菌细胞壁结构,革兰阴性菌细胞壁结构,外膜,
