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1、楚 雄 师 范 学 院 本 科 生 毕 业 论 文题 目：盈江县羊奶果叶和茎中黄酮含量的测定及对羟自由基的消除作用研究 专 业： 科学教育 姓 名： 学 号： 20101053111 指导教师： 职称： 讲师 论文字数： 8032字 完成日期: 2014 年 5 月目录摘要I关键词IAbstractIIKey wordsII前言11实验部分21.1仪器、试剂和实验材料21.1.1仪器21.1.2试剂21.1.3实验材料21.2实验方法21.2.1 原料处理21.2.2总黄酮的提取21.2.3总黄酮的定性检验21.2.4总黄酮的定量分析21.2.4.1芦丁预处理21.2.4.2芦丁标准液的配制2
2、1.2.4.3测定波长的选择31.2.4.4测定方法依据31.2.4.5芦丁标准曲线的绘制31.2.4.6提取液中总黄酮的测定及提取计算31.2.5提取条件的单因素实验31.2.5.1乙醇浓度对提取效果的影响31.2.5.2料液比对提取效果的影响31.2.5.3回流温度对提取效果的影响41.2.5.4回流时间对提取效果的影响41.2.6正交试验41.2.7提取液对羟自由基（OH）的消除作用42结果与讨论52.1定性检验结果52.2定量分析结果52.2.1测定波长的确定52.2.2芦丁标准曲线的绘制62.3提取条件的单因素实验结果62.3.1乙醇浓度对提取效果的影响结果62.3.2料液比对提取效
3、果的影响结果72.3.3回流温度对提取效果的影响结果72.3.4回流时间对提取效果的影响结果82.4正交实验结果与分析82.5提取液对羟自由基（OH）的消除作用结果113结论11参考文献12致谢13盈江县羊奶果叶和茎中黄酮含量测定及对羟自由基的消除作用研究 摘要：以盈江县羊奶果叶和茎为原材料，用乙醇回流法提取其中的总黄酮并研究两种提取液对羟自由基（OH）的消除情况。实验是通过单因素实验和正交实验的方法探究最佳提取条件，所要研究的最佳提取条件包括：提取的温度、时间、料液比、提取剂的浓度。实验结果表明：对于羊奶果叶：在乙醇浓度为85%、料液比为1:9、回流时间为1.5h、提取温度在60的条件下提取
4、效果最好，总黄酮得率为1.000%；对于羊奶果茎：在乙醇浓度为75%、料液比为1:9、回流时间为2.5h、提取温度在70的条件下提取效果最好，总黄酮得率为0.998%；而羊奶果叶、茎的提取液对羟自由基（OH）的消除作用相比较，叶的提取液消除效果相对于茎的要好。 关键词：羊奶果叶和茎；总黄酮；羟自由基；消除。 Determination of the content of flavonoids in leaves and stems of fruit in Yingjiang County goatsmilk and eliminate the effect on hydroxyl free r
5、adicalAbstract: Taking Yingjiang County goatsmilk fruit, leaf and stem as raw material, the total flavonoids was extracted and studies two kinds of extraction on hydroxyl free radical by using ethanol reflux (OH) and the elimination of. Experiment by single factor experiment and orthogonal experimen
6、t the optimum extraction conditions, including the optimum extraction conditions to study: temperature, time, solid-liquid extraction ratio, extraction agent concentration. The experimental results show that: for goatsmilk fruit leaf: ethanol concentration 85%, ratio of solid to liquid was 1:9, extr
7、action time 1.5h, extraction temperature 60 the best extraction, the extraction rate of total flavone was 1.000%; for goats milk fruit stem: ethanol concentration 75%, ratio of solid to liquid was 1:9, the extraction time was 2.5h, extraction temperature 70 the best extraction, the extraction rate o
8、f total flavone was 0.998%; and the extract goatsmilk fruit and leaf, stem on hydroxyl free radical (OH) to eliminate the effect of phase comparison,extract leaf removing effect is better than the stem.Keywords: Goatsmilk fruit stems and leaves; total flavonoids; hydroxyl radical; eliminate.盈江县羊奶果叶和
9、茎中黄酮含量测定及对羟自由基的消除作用研究前言羊奶果又名密花胡颓子、南胡颓子和大果胡颓子。为胡颓子科、胡颓子属的多年生常绿攀缘灌木，它属于我国云南省德宏州的特产，在亚洲热带，越南、马来西亚、印度以及广西南部都有其分布1。羊奶果初生的枝条比较柔软而且呈披散状，主干不是很明显，它主要是靠枝条之间相互支撑，呈现出一个棚状,他有很强的抗逆力，根系比较发达，每个小枝除了顶端的几片叶外，其它的叶腋都育有数量不等的小花，它的花期主要是在10-11月，果期在次年的3-4月，果实的营养成分比较丰富，可食率可以达到73.3-91%，而成熟果实一般是呈鲜红色或紫红色 2。奶果叶呈椭圆形，长6cm左右，顶端骤尖，基部
10、呈圆形，叶面幼时具银色鳞片，脱落后呈深绿色，上面银白色，幼枝比较密且常常被锈色鳞片，芽呈现绿色 2。叶、茎都可以入药，功效有：止咳平喘，收敛止泻而且在治疗哮喘，虚咳，慢性支气管炎，肠炎，腹泻，跌打肿痛，风湿疼痛，黄疸等方面疗效也比较可观3。黄酮类化合物（flavonoids）又叫黄碱素、黄酮体、类黄酮，是普遍存在于大自然中的一类化合物。它主要的功效有：抗衰老、抗疲劳、抗癌、抗肿瘤、降血脂、降血清胆固醇、增加机体免疫等作用4。本课题采用的是用乙醇回流法提取叶和茎中的总黄酮的含量及其对羟自由基的消除作用研究，旨在为更好地开发羊奶果叶、茎资源提供科学依据，对羊奶果的药用及经济价值有着重要意义。1实验
11、部分1.1仪器、试剂和实验材料1.1.1仪器摇摆式植物粉碎机；HH-S2S恒温水浴锅（国华电器有限公司）；722型光栅分光光度计（山东高密分析仪器厂）；CP214C电子天平（奥豪斯仪器有限公司制造）；202-00型电热恒温干燥箱（上海市崇明实验仪器厂）。1.1.2试剂锌粉，氢氧化钠，氯化铁，硝酸铝，盐酸，无水乙醇，过氧化氢，亚硝酸钠，水杨酸，芦丁，硫酸亚铁，上述试剂均为分析纯（AR）。1.1.3实验材料 新鲜羊奶果叶和茎（采集于盈江县）1.2 实验方法1.2.1 原料处理 羊奶果叶和茎洗净晒干烘干粉碎备用1.2.2 总黄酮的提取流程分别称取一定质量的羊奶果叶、茎的细粉于圆底烧瓶中，用一定浓度的
12、乙醇溶液作提取剂，放入恒温水浴锅中回流一定的时间，过滤，并用相应的乙醇浓度定容到50ml容量瓶中，备用。1.2.3 总黄酮的定性检验5-7铁离子反应：取提取液2.0ml于试管中，加入1滴5%三氯化铁溶液，振荡。提取液显墨绿色，表明有黄酮存在。盐酸锌粉反应：取提取液2.0ml于试管中，先加入少量的锌粉，再加入几滴浓盐酸，振荡。提取液显亮黄色，表明有黄酮存在。氢氧化钠反应：取提取液2.0ml于试管中，加入几滴4%氢氧化钠溶液，振荡。提取液显橙红色，表明有黄酮存在。硝酸铝反应：取提取液2.0ml于试管中，加入几滴1%硝酸铝溶液，振荡。提取液显黄色，表明有黄酮存在。1.2.4 总黄酮的定量分析1.2.
13、4.1 芦丁预处理 称取一定量的芦丁于洁净、干燥的烧杯中，在120的恒温干燥箱中干燥1.0h，备用。1.2.4.2 芦丁标准液的配制称取芦丁10mg，加入70%乙醇溶液溶解后，用相应的乙醇溶液定容到50ml的容量瓶中，摇匀，所得的溶液就是0.2mg/ml的芦丁标准液。1.2.4.3 测定波长的选择 吸取1.0ml芦丁标准液、羊奶果叶、茎提取液于25ml的比色管中，加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，放置6min；然后加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入4%氢氧化钠溶液4.00 ml，最后加入70%的乙醇，将其定容到10ml刻度线处，摇匀，放置10min。以试剂空白作
14、参比，在460nm530nm之间测定络合物的吸光度，确定最大吸收波长（此后的吸光度均在最最大波长下测定）。1. 2. 4. 4 测定方法依据以芦丁标准液作为对照品，测定羊奶果叶、茎提取液中总黄酮得率，加入5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、4%氢氧化钠溶液，在碱性条件下总黄酮与铝盐形成络合物，在可见光区可以获得较稳定的特征吸收峰，吸光度与总黄酮浓度服从朗伯比尔定律。1.2.4.5 标准曲线的绘制8吸取0.2mg/ml的芦丁标准液0.00ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00 ml、2.50ml、3.00ml分别置于25ml比色管中，各加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀，放
15、置6min；然后加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入4%氢氧化钠溶液4.00 ml，最后加入70%的乙醇，将其定容到10ml刻度线处，摇匀，放置10min。在一定波长处，以试剂空白为参比测吸光度，绘制标准曲线，得回归方程。1.2.4.6 提取液中总黄酮的测定及得率的计算吸取提取液1.00ml于25ml比色管中，首先加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀，放置6min；然后加入10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，放置6min；再加入4%氢氧化钠溶液4.00 ml，最后加入70%的乙醇，将其定容到10ml刻度线处，摇匀，放置10min。在一定波长处，以试剂空白为参比测吸光度
16、，平行实验三次。将所测得的吸光度值带到回归方程中求出提取液中总黄酮浓度，按下式计算提取液中总黄酮得率9:提取液中总黄酮得率（%）= （CV1/MV2）5010-3100% (1-1)式中：V1为第二次定容后提取液的体积10ml；V2为从母液中量取的提取液体积1.00ml；C为提取液中总黄酮浓度(/ml)；M为羊奶果叶、茎的质量（g）。1.2.5 提取条件的单因素试验1.2.5.1乙醇浓度对提取效果的影响 在料液比为1:9（gml）、温度为60的条件下，分别用55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液作为提取剂，回流2.0h，过滤，然后将提取液用相应的溶液定容到50ml的容量瓶中，按1.2
17、.4.6操作方法后，在一定波长处测定其吸光度，平行实验三次，根据回归方程，计算提取液中总黄酮得率，取其平均值，选择较适宜的乙醇浓度。1.2.5.2 料液比对提取液的影响选用1.2.5.1实验中得出的较适宜的乙醇溶液作为提取剂，温度为60的条件下，分别用料液比（gml）为：1:5、 1:7、 1:9、 1:11、1:13，回流2.0h，过滤，然后将提取液用相应的溶液定容到50ml的容量瓶中，按1.2.4.6操作方法后，在一定波长处测定其吸光度，平行实验三次，根据回归方程，计算提取液中总黄酮得率，取其平均值，选择较适宜的料液比。1.2.5.3 回流温度对提取液的影响选取1.2.5.1实验中得到较适
18、宜的乙醇溶液为提取剂，1.2.5.2实验中得到的较适宜的料液比，分别在温度为50、60、70、80、90，水浴锅中回流2.0h，过滤，然后将提取液用相应的溶液定容到50ml的容量瓶中，按1.2.4.6操作方法后，在一定波长处测定其吸光度，平行实验三次，根据回归方程，计算提取液中总黄酮得率，取其平均值，选择较适宜的回流温度。1.2.5.4回流时间对提取效果的影响选取1.2.5.1实验中得到的较适宜的乙醇溶液为提取剂，1.2.5.2实验中得到的较适宜的料液比，1.2.5.3实验中得到的较适宜的温度，分别回流1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h，过滤，然后将提取液用相应的溶液定容于50m
19、l的容量瓶中，按1.2.4.6操作方法后，在一定波长处测定其吸光度，平行实验三次，根据回归方程，计算提取液中总黄酮得率，取其平均值，选择较适宜的回流时间。1.2.6 正交实验 根据单因素实验，设计正交实验，选取出从羊奶果叶、茎中提取总黄酮的最佳提取条件。1.2.7 黄酮提取液对羟自由基（OH）的消除作用9参照Fenton反应的方法建立反应体系模型，利用H2O2与Fe2+混合后产生存活时间短，具有很高反应活性的OH这一性质，在反应体系中加入水杨酸后，就能有效的捕捉OH，并产生有色产物，该产物在510nm波长处有较强吸收。若加入具有消除能力的黄酮类化合物，黄酮类化合物就会与水杨酸竞争OH，从而使有
20、色产物生成量减少。采用固定反应时间法，在510nm波长处测量含被测物反应液的吸收度，并与空白液比较，便能测定被测物对OH的消除作用。反应体系为：在10ml比色管中首先加入9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2.00 ml，再加入不同体积的羊奶果叶、茎的总黄酮提取液，最后加入8.8mmol/L H2O22.00 ml并启动反应，加蒸馏水定容到10 ml处，将比色管放入37的水浴锅中，让其反应30min，以蒸馏水做参比，以试剂空白做比较，在510nm波长处测定吸光度。考虑到提取液本身的吸光度，在10 ml比色管中加入9mmol/LFeSO4溶液2.00ml，9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2.00 ml，
21、,不同体积的羊奶果叶、茎的总黄酮提取液，加蒸馏水定容，将比色管放入37的水浴锅中，让其反应30min，做为提取液的本底吸收。按下式计算样品液对羟自由基的消除率： OH消除率（%）=A0-(AX-AX0)/A0100%此式中：A0为空白对照溶液吸光度；AX为提取液的吸光度；AX0为不加H2O2提取液的本底吸光度。2结果与讨论2.1 定性检验结果 按照1.2.3操作，对羊奶果叶、茎提取液中黄酮类化合物进行鉴定，结果见表2-1和表2-2.表2-1羊奶果叶提取液中黄酮类化合物的显色鉴定试剂Fe3+HCl-ZnNaOHAl(NO3)3显色现象墨绿色亮黄色橙红色黄色表2-2羊奶果茎提取液中黄酮类化合物的显
22、色鉴定试剂Fe3+HCl-ZnNaOHAl(NO3)3显色现象墨绿色亮黄色橙红色黄色 由表2-1和2-2说明，通过显色反应鉴定，羊奶果叶、茎的提取液显色与黄酮显色一致，表明提取液中含有黄酮类化合物。2.2 定量分析结果2.2.1 测定波长的选择 按1.2.4.3操作，得到图2-1所示的吸收曲线123图2-1芦丁标准溶液和提取液的吸光度与波长关系图 从图2-1可知，芦丁溶液和羊奶果叶、茎黄酮提取液在波长460nm510nm之间，吸光度随着波长的增大而增大，在波长为510nm处吸光度值最大，当吸收波长大于510nm时，吸光度随着波长的增大而减小。故本实验选择510nm为最大吸收波长，此后吸光度均在
23、该波长下测定。2.2.2 芦丁标准曲线的绘制 按1.2.4.4操作，在510nm波长处以试剂空白为参比测定吸光度，绘制标准曲线，得到回归方程为A=11.136C-0.0004，R=0.9998。所得标准曲线见图2-2. 图2-2芦丁标准曲线2.3 提取条件的单因素实验结果2.3.1 乙醇浓度对提取液效果的影响结果按1.2.5.1操作，采用不同浓度乙醇溶液回流羊奶果茎、叶中的总黄酮。在510nm波长处测定吸光度，计算提取液中总黄酮得率，结果见表2-3和表2-4。表2-3乙醇浓度对羊奶果茎提取效果的影响结果乙醇浓度55%65%75%85%95%吸光度0.526 0.564 0.625 0.605
24、0.548总黄酮得率（%） 0.788 0.845 0.936 0.906 0.821由表2-3可知，乙醇浓度在75%时测定的吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果茎中提取总黄酮时，采用75%的乙醇溶液为提取剂可以获得比较好的效果。表2-4乙醇浓度对羊奶果叶提取效果的影响结果乙醇浓度55%65%75%85%95%吸光度 0.564 0.644 0.667 0.645 0.568总黄酮得率（%） 0.845 0.964 0.999 0.966 0.851由表2-4可知，乙醇浓度在75%时测定的吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果叶中提取总黄酮时，采用75%的乙醇溶液为提取剂可以
25、获得比较好的效果。2.3.2 料液比对提取液的影响效果采用75%的乙醇溶液为羊奶果茎、叶的提取剂，按1.2.5.2操作，采用不同料液比回流羊奶果茎、叶中的总黄酮，在510nm波长处测定吸光度，计算提取液中总黄酮得率，结果见表2-5和2-6。表2-5乙醇浓度对羊奶果茎提取效果的影响结果料液比（gml）1:51:71:91:111:13吸光度0.358 0.422 0.546 0.584 0.497提取液中总黄酮得率（%） 0.536 0.632 0.818 0.875 0.744由表2-5可知，料液比为1:11（gml）时测定的吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果茎中提取总黄酮时，采用
26、料液比为1:11（gml）时总黄酮的提取效果比较好。表2-6乙醇浓度对羊奶果叶提取效果的影响结果料液比（gml）1:51:71:91:111:13吸光度 0.516 0.635 0.665 0.654 0.592提取液中总黄酮得率（%） 0.773 0.951 0.996 0.979 0.887由表2-6可知，料液比为1:9（gml）时测定的吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果叶中提取总黄酮时，采用料液比为1:9（gml）时总黄酮的提取效果比较好。2.3.3 回流温度对提取效果的影响结果 采用75%的乙醇溶液为羊奶果茎的提取剂，按料液比为1:11（gml），采用75%的乙醇溶液为羊奶
27、果叶的提取剂，按料液比为1:9（gml），按1.2.5.3操作，改变提取的温度回流羊奶果茎、叶中的总黄酮。在510nm波长处测定吸光度，计算提取液中总黄酮得率，结果见表2-7和2-8。 表2-7回流温度对羊奶果茎提取效果的影响结果回流温度（）5060708090吸光度 0.526 0.659 0.552 0.508 0.462提取液中总黄酮得率（%） 0.787 0.987 0.827 0.761 0.692由表2-7可知，在60时吸光度最大，所得的总黄酮的得率最大，说明从羊奶果茎中提取总黄酮时，采用60温度可以获得比较好的效果。表2-8回流温度对羊奶果叶提取效果的影响结果回流温度（）5060
28、708090吸光度 0.439 0.520 0.649 0.457 0.358提取液中总黄酮得率（%） 0.658 0.779 0.972 0.685 0.536由表2-8可知，在70时测定的吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果茎中提取总黄酮时，采用70温度可以获得比较好的效果。2.3.4 回流时间对提取效果的影响结果采用75%的乙醇溶液为羊奶果茎的提取剂，按料液比1:11（gml），在60的温度；采用75%的乙醇溶液为羊奶果叶的提取剂，按料液比1:9（gml），在70的温度，按1.2.5.4操作，改变提取的时间，回流羊奶果茎、叶中的总黄酮，在510nm波长处测定吸光度，计算提取液中
29、总黄酮得率，结果见表2-9和2-10。表2-9回流时间对羊奶果茎提取效果的影响结果回流时间（h）1.01.52.02.53.0吸光度 0.417 0.474 0.528 0.493 0.468提取液中总黄酮得率（%） 0.625 0.710 0.789 0.737 0.701由表2-9可知，在2.0 h时吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果茎中提取总黄酮时，采用2.0 h的时间可以获得比较好的效果。表2-10回流时间对羊奶果叶提取效果的影响结果回流时间（h）1.01.52.02.53.0吸光度 0.597 0.649 0.616 0.588 0.435提取液中总黄酮得率（%） 0.8
30、94 0.972 0.923 0.881 0.652由表2-10，在1.5h时吸光度最大，所得的总黄酮得率最大，说明从羊奶果叶中提取总黄酮时，采用1.5h的时间可以获得比较好的效果。2.4 正交实验结果与分析 根据2.3单因素的实验结果，以提取液中总黄酮得率为考察指标，选定四因素三水平进行正交实验10-12。因素水平见表2-11和2-12。正交实验结果见表2-13和2-15。 表2-11羊奶果茎的因素水平表水平A乙醇浓度（%）B料液比（gml）C回流温度（）D回流时间（h）1651:950 1.52 75 1:1160 2.03 85 1:13 70 2.5表2-12奶果叶的因素水平表水平A乙
31、醇浓度（%）B料液比（gml）C回流温度（）D回流时间（h）1651:760 1.02 75 1:970 1.53 85 1:11 80 2.0 表2-13 羊奶果茎的正交实验结果实验序号 A乙醇浓度（%）B料液比（gml）C回流温度（）D回流时间（h）总黄酮得率（%） 1 1 1 1 1 0.902 2 1 2 2 2 0.858 3 1 3 3 3 0.913 4 2 1 2 3 1.001 5 2 2 3 1 0.925 6 2 3 1 2 0.997 7 3 1 3 2 0.610 8 3 2 1 3 0.835 9 3 3 2 1 0.776 K1 0.891 0.822 0.868
32、 0.878较优组合A2B3C3D3 K2 0.958 0.873 0.862 0.823 K3 0.740 0.895 0.871 0.900 R 0.218 0.073 0.009 0.077根据表2-13可以看出，本实验中A、B、C、D、四个因素的主次关系是ADB C，即A（乙醇浓度）为最重要，之后是D（回流时间），之后是B（料液比），影响最小的是C（回流温度）。可以从正交实验中看出，用乙醇回流法从羊奶果茎中提取总黄酮最优的条件组合为A2B3C2D3，即从羊奶果茎中提取总黄酮的最佳条件为，提取剂浓度75%，料液比为1:13，回流温度为70，回流时间为2.5h.按照正交实验所确定的最佳提取
33、条件，平行做三次验证性实验，实验结果见表2-14表2-14 最佳组合验证性实验结果吸光度 总黄酮得率（%） 总黄酮平均得率（%）0.6681.0010.6650.996 0.9980.6670.999 从表2-14中可以看出，在最佳提取条件下实验重现性好。表2-15羊奶果叶正交实验结果实验序号 A乙醇浓度（%）B料液比（gml）C回流温度（）D回流时间（h）总黄酮得率（%） 1 1 1 1 1 0.920 2 1 2 2 2 1.010 3 1 3 3 3 0.813 4 2 1 2 3 0.820 5 2 2 3 1 0.876 6 2 3 1 2 0.838 7 3 1 3 2 0.973
34、 8 3 2 1 3 0.951 9 3 3 2 1 0.893 K1 0.908 0.904 0.903 0.896较优组合A3B2C1D2 K2 0.845 0.939 0.901 0.934 K3 0.939 0.848 0.887 0.861 R 0.094 0.091 0.016 0.073根据表2-15可以看出，本实验中A、B、C、D、四个因素的主次关系是ABDC，即A（乙醇浓度）为最重要，之后是B（料液比），之后是D（回流时间），影响最小的是C（回流温度）。可以从正交实验中看出，用乙醇回流法从羊奶果叶中提取总黄酮最优的条件组合为A3B2C2D2，即从羊奶果茎中提取总黄酮的最佳条件
35、为，提取剂浓度85%，料液比为1:9，回流温度为70，回流时间为1.5h.按照正交实验所确定的最佳提取条件，平行做三次验证性实验，实验结果见表2-16表2-16 最佳组合验证性实验结果吸光度 总黄酮得率（%） 总黄酮平均得率（%）0.669 1.0020.668 1.001 1.0000.667 0.996 从表2-16中可以看出，在最佳提取条件下实验重现性好。2.5黄酮提取液对羟自由基（OH）的消除作用结果按 1.2.7操作，羊奶果茎、叶的总黄酮提取液对自由基（OH）的消除作用结果见图2-312图2-3羊奶果叶和茎中黄酮提取液对羟自由基消除能力 由图2-3可知，随着提取液体积的增加，羟自由基
36、消除率也随之上升，羊奶果叶和茎中的提取液对羟自由基的消除率相比，叶的提取液比茎的效果好。3结论实验采用乙醇回流法从羊奶果茎、叶中提取总黄酮，探究了提取剂的浓度、料液比、温度、时间对羊奶果茎、叶中总黄酮得率的影响，并利用正交实验得出最佳的提取条件；探究了提取液对羟自由基（OH）的消除作用。实验表明：对于羊奶果叶：在提取剂为85%的乙醇、料液比1:9、回流时间为1.5h、提取温度在60的条件下提取效果最好，总黄酮得率1.000%：为对于羊奶果茎：在提取剂为75%的乙醇、料液比1:9、回流时间为2.5h、提取温度70的条件下提取效果最好，总黄酮得率为0.998%；而羊奶果叶、茎的提取液对羟自由基（O
37、H）的消除作用相比较，叶的提取液消除效果相对于茎的要好。参考文献1刘育梅，黄维南. 羊奶果种子脂肪酸组成和矿质元素分析J. 热带亚热带植物学报，2007，15（3）: 253255.2余海星. 德宏州特色水果羊奶果发展前景J. 云南农业科技，2009，195.3孔硕. 羊奶果果糕加工工艺的研究J. 中国食品添加剂，2011，11（6）：44-46.4唐浩国等著. 黄酮类化合物研究M . 北京：科学出版社，2009，1-15. 5张令文，计红芬，孙科祥等. 蒲公英总黄酮的提取工艺及定性分析J. 中国食品添加剂，2010，(5)：227-230.6李秀信，张院民，刘青利等. 香椿叶中黄酮成分的分析
38、鉴定J. 西北林学院学报，2001，16：86-87.7杨小凤，仇佩虹，叶筱琴. 马蹄金中黄酮成分分析J. 光谱实验室，2005，22(6)：1212.8曹春艳，赵永华.从芹菜叶中提取黄酮的工艺优化研究J.包装与食品机械，2013,31（4）；21. 9李会端，王仪. 酸角叶中总黄酮的提取及清除羟自由基的作用研究J. 安徽农业科学， 2013，4(23)：9613.10韩秋菊，马宏飞，李宁豫.3种方法提取枸杞黄酮效果的比较J.江苏农业科学，2013,41（2）；272.11溥丽华，刘忠华，魏振园，王晋飞.乙醇浸提法提取槐角愈伤组织中异黄酮的研究J. 北京林业大学生物科学与技术学院，2012，31（1）；4.12张怡，曾绍校，郑宝东. 柚子皮总黄酮提取工艺的研究J. 中国农学通报， 2011，27(14)：100-103. 附录：致谢在本次论文结束之际，特别感谢我系领导给予场地、仪器上的支持；感谢我的指导教师杨红卫老师在实验仪器、材料、开题、论文改进等各个方面给予的大力支持；同时感谢胡小安、王浩华老师给予宝贵的意见，感谢各位老师在生活上实验中的帮助；还要感谢我的同组成员在论文进行中的提示与帮助；最后还要感谢我的舍友和在学习中帮助我的每一个人。
