新乡市众富生物饲料有限公司受控文件化验指导书.doc

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1、化 验作业指导书新乡市众富生物饲料有限公司受控文件编制人：李倩审核人：尚同军批准人：王善智生效日期：2015年1月1日粗蛋白测定作业指导书1. 测定方法凯式定氮法2. 原理凯式法测定试样中氮的含量，即在催化剂的作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物为硫酸铵，加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。3. 试剂(1) 硫酸 化学纯 含量为98%，无氮（2）混合催化剂 0.4g硫酸铜，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。1:15（3）氢氧化钠 化学纯 40%水溶液 （m/v）（4）硼酸 化学纯 2%水溶液（m/v）（5）混合指示

2、剂：0.1%甲基红乙醇溶液，0.5%溴甲酚绿乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期不得超过三个月。（6）盐酸标准溶液 基准无水碳酸钠法标定 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3ml盐酸注入1000L蒸馏水中 0.02 mol/L盐酸标准溶液：1.67 ml盐酸注入1000L蒸馏水中 0.2N盐酸标准溶液：16.8ml盐酸注入1000L蒸馏水中（7） 蔗糖 分析纯（8） 硫酸铵 分析纯 干燥4.仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研体（2）分样筛 孔径0.45mm（40目）（3）分析天平 感量（4）消煮炉或电炉（5）滴定管 酸式，10，25ml（6）凯式烧瓶 250 ml（7）凯式蒸馏转置 半

3、微量水蒸汽蒸馏式（8）锥形瓶 150 250 ml（9）容量瓶 100 ml（10）消煮管 250 ml（11）定氮仪 以凯式原理制造的各类型半自动，全自动蛋白测定仪。5.试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。6. 操作步骤 （1）试样消煮称取试样0.5000-1.0000g，精确至0.0002，放入消化管中，加入6.4g混合催化剂，再加入12-15 ml浓硫酸，将消化管置于消化炉上消化，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360度-450度）。然后继续加热至少45min（消化时间视消化率而定，消化过

4、程至少2h）（2） 试样制备 将试样消煮液冷却，冷却后用约50m水稀释摇匀 ，做为试样分解液（3）试样蒸馏 采用半自动定氮仪时，将带消化液的管子固定在蒸馏托盘上，以25ml硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50ml 40%氢氧化钠进行蒸馏，蒸馏时间以吸收液体积达到100ml-150 ml时，降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。（4）半微量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入20 ml蒸馏水，装入100ml容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液，将半微量的装置的冷凝管末端侵入装有20ml硼酸吸收液和2滴

5、混合指示剂的锥形瓶内，蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10ml注入蒸馏转置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口处加水密封，再加10ml氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，在蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。（5） 滴定 蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色极为终点，同时按上述步骤做空白滴定。（6）空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，进行空白

6、测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml，消耗0.02mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.3ml，7.分析结果的计算和表述（V2-V1）C*0.0140*6.25粗蛋白=-*100m式中：V2-滴定试样时所需标准盐酸溶液体积，mlV1-滴定空白所需标准盐酸溶液体积，mlC-盐酸标准溶液浓度，mol/Lm-试样质量，g0.0140-每毫克当量氮的克数6.25-氮换算成蛋白质的平均系数0.02 mol/L盐酸标准溶液的标定方法 称取0.020.03g（视标液的浓度而定）于270-300度灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g溶于50 ml蒸馏水中，加混合指示剂3

7、滴，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变成暗红色，煮沸，冷却后继续滴定至在呈暗红色，反复几次，同时作空白实验，计算公式:mC=- （V1-V0）*0.05299式中;C-盐酸标准溶液浓度，mol/Lm- 无水碳酸钠质量，gV1-滴定试样时所需标准盐酸溶液体积，mlV0-滴定空白所需标准盐酸溶液体积，ml注意事项:盐酸标准溶液应每月标定粗蛋白含量大于30%时，称取0.50.7g，小于30%时，称取0.91.1g，保证滴定体积在12-17 ml之间。液体做粗蛋白时，称量时先固定消化管，称2.000g左右，加硫酸时需缓慢加入，以防止液体喷出，刚开始消化时保持温度在120-130度，赶走水分，防止喷射

8、以及对下一步去蒸馏的影响。水分测定作业指导书1.原理 试样在1052烘箱内，在大气压下烘干，直到恒重，遗失的重量为水分。2.仪器设备 (1) 电子天平 ：0.0001g(2) 电热恒温烘箱： 可控温度为1052(3) 称样皿： 玻璃或铝质，直径40mm以上，高25mm以下 (4) 干燥器：用氯化钙 （干燥试剂）或变色硅胶做干燥剂3.测定步骤(1)洁净称样皿，在1052烘箱中烘1h取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.0002g(2)用称样皿称取两份平行试样，每份2g左右（预混料1-2g），准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在1052烘箱中烘3h，取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30mi

9、n，称重。 (3)在同样烘干1h，冷却，称重，直至两次称重量差小于0.0002g。4. 结果计算（W1-W2）100水分（%）=- W1-W0 式中：W1-105烘干前试样及称样皿重，g W2-105烘干后试样及称样皿重，gW0-已恒重的称样皿重，g5 注意事项 （1）水分放在托盘上烘干，烘干后取出要盖上盖子。（2） 放入水分时，应使烘箱达到105时再放入，以保证升温到105的时间最短，减少影响。（3）称重时应注意按顺序保证先取出先称量，105烘干时间在5min。130烘干时间在1min之内。粗灰分测定作业指导书1. 原理试样在550灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣中主要是氧化物，盐类等

10、矿物质，也包括混入饲料中有沙石，土等，故称粗灰分。2仪器与设备（1） 样品粉碎机（2） 电子天平：0.0001g（3） 高温炉：55020（4） 坩埚 ：25ml或50ml（5） 干燥器3.测定步骤（1）坩埚的恒重：将干净坩埚放入高温炉，在55020下，灼烧30min，等温度降至300以下时，取出在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min后称其重量。（2）样品的炭化：在已恒重的坩埚中称取2.000-5.000g（预混料称量0.7g左右）试样，准确至0.0002g，在电炉上小心炭化，在碳化过程中，应将试样在较低温度下（600w）加热至无烟(0.5h-1h)，才升温灼烧至样品无炭颗粒。（3）

11、样品的灰化：把炭化好的样品放入高温炉中，于55020下灼烧4h以上，等温度降至300以下时，取出在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min后称其重量。4.结果计算 m2-m0粗灰分（%）=- m1-m0式中：m0-为恒重坩埚的质量，gm1-为坩埚加试样的质量，gm2-为灰化后坩埚加灰分的质量，g所得结果应表示为0.01%5.允许差 应同时做至少两个平行样，算其平均值为分析结果。 粗灰分含量在5%以上的允许相对偏差为1%，粗灰分含量在5%以下的允许相对偏差为5%。6. 注意事项要保证先取出的坩埚先称重； 炭化时最好不要开排风扇，以防止炭化过快，试料飞溅； 灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关

12、，含铁高时为红棕色，含锰高时为淡蓝色，但有明显黑色炭粒时，为碳化不完全，应延长灼烧时间。水溶性氯化物测定作业指导书1.测定方法 本方法规定用硝酸银直接滴定测定饲料中可溶性氯化物的方法。2.原理 溶液澄清，以10%的铬酸钾为指示剂，用标准硝酸银溶液滴定，使样品中的氯化物形成氯化银沉淀，呈现砖红色为滴定终点，根据消耗硝酸银的用量，计算出氯化物的含量。3.试剂（1）10%铬酸钾指示剂：称量10g铬酸钾溶解于100ml水中；（2）硝酸银标准溶液 0.02molL：称取3.4g硝酸银溶于1000ml水中，存于棕色瓶中。4. 测定步骤 称取5-10g样品，准确至0.0001g，准确加蒸馏水200ml，搅拌

13、15min，放置15min，准确移取上清液20ml，加蒸馏水50ml，10%铬酸钾指示剂1ml，用硝酸银标准溶液滴定，呈现砖红色，且1min不褪色为终点（每换一次硝酸银溶液测一次空白）。5. 结果计算 V2*C*200*0.05845*100 NACL(%)=- m *20式中： m-样品质量 g V2-滴定消耗硝酸银溶液的体积 ml C- 硝酸银的摩尔浓度，molL 0.05845-与1.00ml硝酸银标准溶液c(AgNO3)=1.000 molL相当的以克数表示的氯化物的质量。硝酸银的标定：取基准试剂氯录化钠少许，在105-110烘干2小时，取出冷却。准确称取0.02g，加蒸馏水25ml，

14、加入10%铬酸钾0.25ml，用配好的标准硝酸银溶液滴定，溶液由浅黄色稍稍变为红褐色既为滴定终点，每次至少标定3个，使之滴定结果更加平均，准确。 Nacl重量*1000AgNO3溶液浓度=- 58.44* AgNO3（滴定ml数）6.允许差每个样品应取两份平行样进行测定，以算术平均值分析结果；氯化钠含量在3%以下（含3%），允许绝对差0.05，氯化钠含量在3%之上，允许相对偏差3%。钙测定作业指导1.测定方法乙二胺四乙酸二钠络合滴定法2.原理 将试样中有机物破坏，使钙溶液解制备成溶液，用三乙醇胺，乙二胺，盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用EDTA标准溶液络

15、合滴定钙，可快速测定钙的含量。3 .仪器设备（1）电子天平：0.0001g（2）高温炉：电加热，可控温在55020（3）坩埚：瓷质（4）容量瓶：100ml（5）滴定管：酸式，25ml（6）玻璃漏斗（7）定量滤纸：中速，7-9cm（8） 移液管：10ml（9） 烧杯：200ml4 .试剂（1） 盐酸水溶液： 1+3 （v1+v2）（2） 氢氧化钾：200g/L（3） 三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2）（4） 乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）（5） 淀粉溶液：10g/L，称取1g可溶性淀粉入200ml烧瓶中，加5ml水润湿，再加入95ml沸水搅拌均匀，煮沸，冷却备用（现配现用）（6）孔雀石绿水

16、溶液：1g/L（7）钙黄绿素甲基百里香酚蓝指示剂：0.1g钙黄绿素与0.13甲基百里香酚蓝，5g录化钾研细混匀，储存于磨口瓶中备用。（8）钙标准溶液 0.0010g/ml 称取2.497g与105110干燥3h至恒重的基准碳酸钙，溶于40ml（1：3）盐酸中，加热赶除二氧化碳冷却，用水转移至1000ml容量瓶中，用水稀释到刻度。（Ca离子的含量=g/ml）（9）EDTA标准溶液的配制称取3.8gEDTA入200ml烧瓶中，加200ml水，加热溶解冷却后转至1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度。（即为0.004g/ml=1mol/l）（10）EDTA的标定准确吸取钙标液10ml，按试样测定进

17、行滴定。 滴定度的计算： *VT=- V0式中： T -EDTA标准溶液对钙的滴定度，g/ml-钙标液的浓度，g/mlV-所取钙标液的体积 ，mlV0-EDTA标准溶液的用量，ml5. 测定步骤 试样的分解 取测定粗灰分后盛灰坩埚，加入 盐酸10ml和浓硝酸数滴（或1ml），小心煮沸，保持微沸约1min，冷却，转入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，为试样分解液。试样的测定 准确移取试样分解液10ml于锥形瓶中，加水50m，加淀粉溶液10ml，三乙醇胺2ml，乙二胺1ml，1滴孔雀石绿，再加氢氧化钾10ml(氢氧化钾过量)，每加一种试剂都须摇匀，加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA标

18、准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点，同时做空白。6. 结果计算 T*（V2-V3）*V0*100Ca=- m*V1式中： T-EDTA标准溶液滴定对钙的滴定数，g/ml V0-试样分解液的总体积，mlV1-移取试样分解液的体积，mlV2-实际消耗EDTA标准溶液的体积，mlV3-空白消耗EDTA标准溶液的体积，mlm -试样的质量，g总磷量测定作业指导书1.测定方法钒钼黄显色光度法2.适用范围 本标准适用于配合饲料，浓缩饲料，预混合饲料和单一饲料，测定饲料范围磷含量0-20ug/ml。3.方法原理 将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的（NH4）

19、3PO4NH4VO3.16MOO3,在波长400mm下进行比色测定。4.试剂（1）盐酸 ：（1+3水溶液）（2）硝酸：浓硝酸（3）钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸胺1.25g，加水200ml加热溶解，冷却后再加入250ml硝酸，另称取钼酸胺25g，加水400ml加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容1000ml，避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。（4）磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释到刻度，摇匀，既为50ug/ml的磷标准溶液（此溶液不能超过一个月）。5. 仪器与设备（1）样品粉

20、碎机（2）分析天平：0.0001g（3）高温炉：电加热，可控温在55020（4）坩埚：瓷质（5）分光光度计：可在420mm波长下测定吸光度（6）比色皿：10mm（7）容量瓶：50, 00, 1000ml（8）移液管： 0.5 1.0 2.0 3.0 5.0 10.0ml（9）凯氏烧饼：125 250ml（10 可调温电炉：1000w6.测定步骤（1）试样的分解 干法：(适用于配合，浓缩，单一饲料) 称取试样2-5g(精确至0.0002g)于坩埚中，在电炉上小心碳化，在移入高温炉，在550灼烧3h，（或粗灰分后继续进行），取出冷却，加入10ml盐酸溶液和硝酸数滴，小心煮沸10min，转入100m

21、l容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，为试样分解液。 盐酸溶解法：(适用于微量元素预混料) 称取试样0.21g(一般称量0.7g左右）精确至0.0002g于100ml烧杯中，缓缓加入盐酸10ml，使其全部溶解，冷却后转入100ml容量瓶，并稀释到刻度，摇匀，为试样分解液。（2）工作曲线的绘制 准确移取磷标准溶液，0.0 1.0 2.0 4.0 8.0 16.0ml于50ml容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0.0ml溶液为参比，在400ml波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（3）试样的测定准确

22、移取试样分解液1.010.0ml（含磷量50-750ug）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10min以上，用10mm比色皿在400mm波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查的试样的磷含量。7. 测定结果的计算及表述 m1*V X=- m *V1*104式中： X-以质量分数表示的磷含量，% m-试样的质量，g m1-由标准曲线查的试样分解液磷含量，ug V-试样分解液的总体积，mlV1-试样测定时移取分解液的体积。ml 所得到的结果应表示至小数点后两位。 8. 允许差：含磷量0.5%以下，允许相对差10%，含磷量0.5%以上，允许相对差3%

23、9.注意事项： 比色皿应用软纸或用擦镜纸擦拭，以免划伤比色皿。称重要适量，始终要控制磷的含量在26PPM之间。酸价检测作业指导书1. 原理 酸价（酸值）是指中和1g油脂所含游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。酸价高，说明油脂因水解而产生的游离脂肪酸多。酸价可直接说明油脂的新鲜程度和质量的优劣。2. 试剂（1）酚酞乙醇指示剂：1%（2）乙醇-乙醚混合液： 取化学纯95%乙醇和无水乙醚按2:1体积混合，然后加入酚酞乙醇指示剂3滴，用0.1mol/lKOH溶液中和至微红色。（3）0.1mol/lKOH标准溶液：称取5.8gKOH溶于1000ml水中。3. 测定步骤 准确称取5g待检油脂置于锥形瓶中，加入

24、乙醇-乙醚混合液50ml，振摇均匀后加入1%酚酞乙醇指示剂3滴，用0.1mol/lKOH标准溶液滴定至淡红色且在1min内不褪色为终点。4. 结果计算 C*V*56.11 酸价=- m式中：C-KOH标准溶液之物质的量浓度。mol/lV-消耗KOH标准溶液的体积，mlm-试样的质量，g 56.11-与1ml，1mol/lKOH标准溶液相当的KOH的质量。mg 0.1mol/lKOH标准溶液的标定： 称取笨二钾酸氢钾0.2g左右，放入锥形瓶中，加50ml蒸馏水，加1%酚酞乙醇指示剂2-3滴，用用0.1mol/lKOH标准溶液滴定至淡红色，在半分钟内不褪色为终点。 W笨二钾酸氢钾N氢氧化钾=-*1

25、000 204.23* V氢氧化钾6. 注意事项 若KOH溶液由沉淀时，不能继续使用国家标准混合油酸价不超过4%，豆油酸价不超过2%。5g试样加醇谜混合液50ml，10g试样加醇谜混合液100ml。粗脂肪测定作业指导书1. 原理 索氏脂肪提取器中用石油谜提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂，脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称为粗脂肪。2.仪器设备： （1）电热恒温水浴锅（2）恒温烘箱（3）脂肪提取器（4）中速脱脂虑纸（5）干燥器3. 试剂（1） 石油醚：分析纯（石油醚沸程3060）4. 测定步骤 准确称取样品约2g（脂肪含量小于5%时，称2g。脂肪含量大于5%时，称1.5g）

26、,用滤纸包好，置于105-110的烘箱中烘干2h，置干燥器中冷却后称重，然后放入提取器中。用石油醚提取57个小时，从冷凝管中的下流速度为56滴/秒，抽提器内的温度不超过70，抽提后，取出滤纸包，将其在105的烘箱中烘干2h，取出于干燥器中冷却至室温，称重，同时将瓶中的石油醚回收再提取管中，在回收于石油醚瓶中。5.结果的计算 W1-W2粗脂肪=-*100% W式中： W-样品重量，g W1-烘干后的滤纸包重量，g W2-提取物提取后滤纸包的重量，g6. 注意事项 每次称脂肪包时要保持双手的洁净； 脂肪包从提取器取出后，要先放通风橱内，待石油醚挥发后在放入烘箱中。挥发性盐基氮测定作业指导书1. 范

27、围 适用于鱼粉及鱼罐头副产品（鱼头粉）2. 原理 根据蛋白质在腐败过程中，分解产生的氨和胺类物质具有挥发性，可在弱碱剂氧化镁的作用下，游离出并蒸馏出来，被硼酸溶液吸收，用标准盐酸滴定，计算出含量。3. 试剂（同粗蛋白） 0.1mol/l盐酸标准溶液：移取8.3ml盐酸溶于1000ml蒸馏水中。4. 测定步骤 称取鱼粉或鱼头粉（样品不粉碎）于消化管中，加氧化镁0.5g，加热水70ml，将此消化管蒸馏（不加氢氧化钠），蒸馏的溶液用盐酸标准溶液滴定至紫红色为终点。5. 结果计算 （V-V0）*N*14.008 Mg/100gTVBN=-*100 W式中： V-测定样液消耗盐酸溶液的体积，ml V0-

28、空白消耗盐酸溶液的体积，ml N-盐酸标准溶液的当量浓度，mol/l W-样品重量，g 14.008-1N盐酸标准溶液1ml相当于氮的毫克数。6.结果判定： 此法正确度80% Mg/100g小于90%新鲜 90-120%中等新鲜120-150%不新鲜（臭味）大于150%腐臭味水洗蛋白测定作业指导书1. 测定步骤（1）准确称取0.5-1.0g(视样品含蛋白量而定)于50ml烧瓶中，加入50ml 蒸馏水，在磁力搅拌器上搅拌20min；（2） 中速定量滤纸过滤搅拌液，将转移用的玻璃棒及烧饼用蒸馏水冲洗干净，并反复冲洗滤渣，直到水溶性含氮物质冲洗干净为止。（3）将滤纸连同滤渣全部转至消化管中，消化，蒸

29、馏步骤同粗蛋白测定方法一样，同时做空白。（4）水洗蛋白结果计算：同粗蛋白的计算一样。（5）水洗蛋白与粗蛋白含量之差若小于3%时，视为正常。反之则视为不正常。备注： 芝麻粕的水洗蛋白与粗蛋白含量相差为67%。真蛋白测定作业指导书本方法适用于饲料级鱼粉中真蛋白质与粗蛋白质的检测。1.原理 蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断鱼粉是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。鱼粉真蛋白质比率与指标，鱼粉蛋白质的比率以测得真蛋白质

30、含量与粗蛋白质含量之比来表示，粗蛋白质含量应符合产品规定，真蛋白质比率应符合于：进口鱼粉中真蛋白质比率不得小于80%，国产鱼粉中真蛋白质比率不得小于75%。鱼粉中真蛋白质比率小于上述值时，则判定为该鱼粉中掺有水溶性非蛋白含氮物质。2试剂10%硫酸铜溶液：称取10g硫酸铜溶于100ml容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，备用。2.5%氢氧化钠溶液：称取2.5g氢氧化钠溶于100ml容量瓶中，用水稀释到刻度，备用。3. 真蛋白的测试步骤（1）试样的处理： 准确称取试样12g于200ml烧瓶中，加蒸馏水50ml煮沸，加入10%的硫酸铜溶液20ml和2.5%的氢氧化钠溶液20ml，边加边搅拌，加完后继续搅

31、拌1min，放置1h以上或静置过夜，沉淀物以中速定性滤纸过滤，用70以上热水反复冲洗残渣，直至滤液无硫酸根离子为止（取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2mol/l盐酸一滴，在黑色背景处观察应无白色沉淀），将滤纸于残渣包好，放入烘箱，在 65-75干燥2h。（2）试样的消化 将烘干的试样连同滤纸一起放入消化管中，其他操作步骤同粗蛋白一样。（3） 空白测定 除不加试样外，其余操作步骤同真蛋白的测定。4. 计算公式 真蛋白质含量 真蛋白质比率=-*100 粗蛋白质含量 5.允许差 蛋白质含量在40%以上时允许偏差2%； 蛋白质含量在40%以下时允许偏差2.5%；消化炉回收率测定作业指导书 1. 方法

32、步骤（1）分别准确称取色氨酸0.18g，蔗糖0.67g放入同一个消化管中。（2）消化，蒸馏滴定步骤同粗蛋白。（3）同时做空白。2.结果计算：色氨酸中氮的实际含量(V1V0) *M N1=-*1.4007*100 m其中：V1-滴定消化蒸馏后色氨酸所消耗盐酸的体积ml V0-滴定空白所耗盐酸的体积 mlM-盐酸的摩尔浓度mol/Lm-色氨酸的质量g N12.2色氨酸中氮的回收率=-*100N2N2=色氨酸中氮的理论含量（13，72）备注：色氨酸回收率应在97.5%以上，如达不到，可采用升高消化炉温度和增加消化时间两种方法。大豆制品中尿素酶活性测定方法1 适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产

33、品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。 2 定义本标准所指尿素酶活性定义如下:在300.5和pH7的条件下,每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。3 原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30保持30min,尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨,再用氢氧化钠标准溶液回滴。4 仪器设备（1）样品筛:孔径200m;（2）酸度计:精度0.02pH,附有磁力搅拌器和滴定装置; (3)恒温水浴:可控温300.5; (4)试管:直径18mm,长150mm,有磨口塞子; (5)精密计时器; (6)粉碎机:粉碎时应不生强热(例如球磨机);（7）分析天平

34、:感量0.1mg;（8）移液管:10mL。5试剂和溶液（1）尿素:分析纯;（2）磷酸氢二钠:分析纯;(3) 磷酸二氢钾:分析纯;(4)尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0): 4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL,再将30g尿素溶在此缓冲溶液中,可保存1个月。(5)盐酸 :分析纯,0.1mol/L溶液;移取8.3ml盐酸，用水稀释至1000ml；(6) 氢氧化钠（分析纯）0.1mol/L标准溶液 :称取4g氢氧化钠溶于水并稀释至1000ml。6 试样的制备用粉碎机将10g试样粉碎,使之全部通过样品筛。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度

35、下进行预干燥,再进行粉碎,当计算结果时应将干燥失重计算在内。7测定步骤称取约0.2g已粉碎的试样,称准至0.1mg,转入试管中(如活性很高只称0.05g试样),移入10mL尿素缓冲溶液,立即盖好试管并剧烈摇动,马上置于300.5恒温水浴中,准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液,迅速冷却到20。将试管内容物全部转入烧杯,用5mL水冲洗试管两次,立即用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液， 10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于300.5恒温水浴,同样准确保持30m

36、in，冷却至20，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标 准溶液滴定至pH4.70。 8测定结果的计算(1)计算方法：以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U,按下式： 14C（V0V） U- 30m 式中:C-氢氧化钠标准溶液摩尔浓度,mol/L;V0-空白试验消耗氢氧化钠溶液体积,mL;V-测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积,mL;m-试样质量,g。注:若试样经粉碎前的预干燥处理时,则 14C（V0V）U-（1S） 30m式中:S-预干燥时试样失重的百分率。重复性:同一分析人员用相同方法,同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10，以其算术平均值报告结果

37、。油脂过氧化值检测方法1.原理 油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算过氧化值。 2.试剂和溶液（1）饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热使其溶解， 冷却后贮于棕色瓶中；(2)、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀； (3)、0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液； (4)、1%淀粉试剂：将淀粉0.5g用少许冷水调成糊状，倒入50ml沸水中调匀，煮沸， 临时用现配；3.测定方法 称取23g油样（称准至0.0002g）于碘量瓶中（对于固态样品应先用索氏提取器将样品中油脂提取出来），加30ml三氯甲烷冰

38、乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1ml饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min，取出加100ml水，摇匀，立即以淀粉试液为指示剂，用0.01mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色消失为终点。同时做空白试验。4.结果计算 过氧化值（%）=0.1269*C*(V-V0)*100/m式中： 硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L； 试样消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积，ml； 0空白消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积，ml； m 样品质量，g； 0.1269换算系数；硫代硫酸钠标准溶液的配制和标定： C（Na2S2O3）=0.01 mol/L1.配制：称取2.6g 硫代硫酸钠（Na2S2O35H2O）或16 g无水硫代硫酸钠，及0.2 g无水碳酸钠，加入适量新煮沸过的冷水使之溶解，并稀释至1000ml，混匀，放置一个月后过滤备用。 2.标定：准确称取0.015g在120。C干燥至恒量的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，加入50）ml水使之溶解。加入