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1、,学习目标,1.说出血液的组成和血浆与血清的主要区别。2.叙述皮肤采血法的器材和消毒液、采血部位、操作和注意事项。3.记住静脉采血法的器材和消毒液、采血部位、操作和注意事项。4.背诵常用抗凝剂的抗凝原理、制备方法、使用剂量、应用范围。,本章目录,血液的生理概述血液标本的采集血液标本的抗凝血涂片制备血细胞染色目标形成性测试1目标形成性测试2,一、血液的组成二、血液的理化性质三、血液的功能,一、血液的组成,血液是由血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。离体后的血液自然凝固后，分离出来的淡黄色透明液体称为血清，血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。血液
2、的组成见下图。,一、血液的组成,二、血液的理化性质,(一)血量 7010ml/kg体重(二)颜色 红色,二、血液的理化性质,(三)红细胞在血浆中的悬浮稳定性 均匀混悬状态(四)粘稠度 全血粘度为生理盐水的45倍，血浆粘度为生理盐水的1.6倍左右。,二、血液的理化性质,(五)比密和渗透浓度 全血比密为1.0501.060，血浆比密为1.0251.030，红细胞比密为1.090。(六)pH 一般为7.357.45。(七)凝固性 血液从血管中流出可自行凝固。,三、血液的功能,（一）运输功能（二）协调功能（三）维持机体内环境的稳定（四）防御功能,一、皮肤采血法二、静脉采血法,一、皮肤采血法,【采血部位
3、】手指或耳垂、或足跟或拇趾【采血针】一次性专用采血针,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,操作,一、皮肤采血法,一、皮肤采血法,【注意事项】1.所选择采血部位的皮肤应完好。2.严格消毒皮肤,并待消毒液干后再穿刺。3.如血流不畅,切忌用力挤压强迫采血，应重新刺针。,二、静脉采血法,【采血部位】肘前静脉,婴幼儿可采用颈外静脉。【试剂与器材】1消毒液：0.5%碘伏。2一次性无菌注射器或真空定量采血器。3.压脉带、垫枕、无菌棉签等。,二、静脉采血法,【采血方法】准备选择静脉消毒扎压脉带穿刺、
4、松压脉带抽血拔针止血注入试管。如以下视频所示,静脉采血法,二、静脉采血法,【注意事项】1.正确消毒,严格无菌操作。2.进针时深度、角度不要过深、过大。3.避免溶血。4.抽血时，针栓只能外抽，不能内推，以免将空气注入静脉形成气栓。,一、枸橼酸钠二、乙二胺四乙酸盐三、肝素,下一页,返 回,血液标本的抗凝,抗 凝-应用化学或物理学的方法，抑制 或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。抗凝剂-能阻止血液凝固的化学试剂。,抗凝剂,一、枸橼酸钠【原理】枸橼酸钠（柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐。它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca 2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。,抗凝剂,一、枸橼酸钠【
5、应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液。,抗凝剂,一、枸橼酸钠【用量】凝血象:109mmol/L水溶液,与血液之比为1:9；血 沉:106mmol/L水溶液,与血液之比为1:4。,抗凝剂,二、乙二胺四乙酸盐【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。,抗凝剂,二、乙二胺四乙酸盐【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。不适于凝血象及血小板功能检查。,抗凝剂,二、乙二胺四乙酸盐【用量】其有效抗凝浓度为12mg/ml血液。血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA-K22H2O 1.52.2mg/ml血液。,抗凝剂,三、肝素【原理】通
6、过与抗凝血酶结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。,抗凝剂,三、肝素【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。,抗凝剂,三、肝素【用量】通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。取0.5ml置小瓶中，3750烘干后，能抗凝5ml血液。,小结,血液是由血细胞和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。凡需血液量较少的检验项目，常用皮肤采血法，通常采手指血。采血时要注意采血部位要无病变，要擦去第一滴血，不能用力挤压。凡需血液量较多的检验项目，要用静脉采血法，其采血部位常用肘前静脉。如需要抗凝抗凝血标本时，则需要根
7、据检验项目的要求，采用枸橼酸钠、乙二胺四乙酸盐和肝素等抗凝剂来阻止血液凝固。,请您练习,答案:,皮肤采血法用注意什么问题?,所选择采血部位的皮肤应完好。严格消毒皮肤，防止采血部位感染。皮肤消毒后，待乙醇挥发干后再刺针。如血流不畅，切不可用力挤压勉强采血，而应重新针刺。出血不止时，可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时应在报告单上注明，提醒临床医生注意。进行多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血小板计数、红细胞计数、白细胞计数。,请您练习,请说出静脉采血的步骤？,答案:,准备,选择静脉,消毒,扎压脉带,穿刺、松压脉带,抽血,拔针止血,注入试管。,请您练习,答案:,请说出枸橼酸钠的抗凝原理
8、、用途及其用量？,枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象检查常用0.109mol/L的水溶液，与血液之比通常为1：9。魏氏法血沉测定用浓度为0.105mol/L，与血液比例为1:4（V：V）。,请您练习,请将下列抗凝方法和适宜的项目用线连接起来。枸橼酸钠 血细胞比容测定乙二胺四乙酸盐 红斑狼疮细胞的检验 肝素 凝血象 脱纤维法 一般血液学检查,学习目标,1.叙述载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合格血片的标准。2.阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事项和染色结果的判断。3.知道吉姆萨染色法
9、和混合染色法。,一、载玻片的清洁二、血涂片的制作,一、载玻片的清洁,1.新玻片 1mol/L HCl泡24小时水洗干燥。2.旧载玻片 肥皂水或其他合成洗涤剂水中煮沸20分钟热水洗自来水洗干燥。(95%乙醇泡1小时蒸馏水洗干后备用)。,二、血涂片的制作,方法,1.取血滴。2.散开血滴。3.推片。4.干燥。,二、血涂片的制作,取血液一滴，置于载玻片一端以边缘平滑的推片（推片两端应平整光滑，比载玻片稍窄或磨去两角）的一端，放在血滴前方，逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开。,二、血涂片的制作,将推片与载片保持30-45夹角，平稳向前推进至载玻片的另一端，残片上即留下一薄层血膜。,二、血涂片的制作,血
10、膜的影响因素 1.血滴大小、2.推片与载玻片之间的角度、3.推片时的速度有关。血滴愈大、角度愈大、推片时速度愈快，则血膜愈厚；反之血膜愈薄。,二、血涂片的制作,良好的血涂片要求:厚薄适宜，头体尾分明，细胞分布均匀，边缘整齐，血膜与载玻片的两边和两端各留有0.3cm和0.5cm的空隙，血膜长度占载玻片的2/3左右。,二、血涂片的制作,血细胞染色,瑞特染色法吉姆萨染色法混合染色法,一、瑞特染色法,【原理】瑞特染液是有酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料溶于甲醇而成。,一、瑞特染色法,【原理】,伊红系不易解离的弱酸性染料，通常用伊红钠盐（+），其有色部分是伊红，为阴离子，所以伊红是酸性染料。,一
11、、瑞特染色法,【原理】美蓝又名亚甲蓝，为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝（+-）。其有色部分是美蓝，为阳离子，所以是一种碱性染料。,一、瑞特染色法,美蓝在空气中很容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青），因此，在制备瑞特染料时，一部分美蓝被氧化为各种天青，称为多色性美蓝。美蓝和伊红的水溶液混合后，生成一种疏水性伊红化美蓝的中性沉淀物，即瑞特染料，其反应式为：水中 ll,一、瑞特染色法,【原理】细胞的受色既有化学亲和作用，也有物理吸附作用。细胞中的嗜酸性物质（如血红蛋白、嗜酸性颗粒）易与酸性染料伊红结合，染成粉红色；细胞中的嗜碱性物质（如核染色质、嗜碱性颗
12、粒）易与碱性染料美蓝或天青结合，染成蓝色；中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色。,一、瑞特染色法,pH对细胞染色的影响 1.在酸性环境中，染色偏红；2.在碱性环境中,染色偏蓝。,一、瑞特染色法,pH对细胞染色的影响 染色时应用pH6.46.8的缓冲液维持恒定的酸碱环境。,一、瑞特染色法,【试剂配制】1.瑞特染液 2.磷酸盐缓冲液（pH6.46.8）,一、瑞特染色法,【染色方法】1.加瑞特染液,固定细胞0.51min。2.加缓冲液，并与染液吹匀，室温下染色10min左右。3.冲洗待干。,一、瑞特染色法,【染色结果】1染色适宜的血膜 血膜外观呈淡琥珀色，在显微镜下红细胞染成粉红色，
13、在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中的颗粒能显示各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。,一、瑞特染色法,2染色结果偏酸 血膜偏红，红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈浅蓝色或不着色。3染色结果偏碱 血膜偏绿，所有细胞呈灰蓝色，微偏碱者红细胞暗红、白细胞颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色，中性颗粒也偏粗偏碱（紫黑色）。,一、瑞特染色法,【注意事项】1.血膜干透后方可固定染色。2.染色时间的长短与染液浓度、室温高低及有核细胞的多少有关。3.所加染液不能过少，冲洗时不可先倒掉染液。4.染色过深时，可加甲醇退色，但应立即冲去。染色过浅必须复染时，应先用缓冲液将瑞特染液稀释后
14、再染。5.染色偏酸或偏碱时，应更换缓冲液再染。,二、吉姆萨染色法,【原理】吉姆萨染料由天青、伊红组成，其染色原理与瑞特染色法基本相同，但吉姆萨染色法对细胞核着色较好。【试剂配制】1.吉姆萨染液 2.磷酸盐缓冲液,二、吉姆萨染色法,【染色方法】1.固定细胞 2.在已固定好的血片上滴10滴缓冲液，再加吉姆萨染液1滴混合，染色1030min，用水冲洗，待干后镜检。,三、混合染色法,【原理】将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特染色法。,三、混合染色法,试剂配制 1.瑞特-吉姆萨染液 2.pH6.46.8磷酸盐缓冲液 染色方法 同瑞特染色法。,染色成败的关键是：,（1）
15、染液质量（2）染色条件的恒定（3）染色时间的长短以上一个环节不佳，均会造成血涂片的不良而影响实验结果。,自动化制片,小结,血细胞染色常用瑞特染色法，它是利用各种细胞成分的化学性质不同，对酸性染料伊红和碱性染料美蓝的亲和力也不一样，因而经染色后，在同一张血片上可以看到不同的着色。,请您练习,瑞特染液中甲醇有何作用？,答案：,（1）有机溶剂,（2）细胞固定剂,（3）增强细胞对染料的吸附,请您练习,一张良好血片的标准是什么？,答案:,厚薄适宜，头体尾分明，细胞分布均匀，边缘整齐，血膜与载玻片的两边和两端各留有0.3cm和0.5cm的空隙，血膜长度占载玻片的2/3左右。,请您练习,将不合格血涂片与其形
16、成原因连线 血膜过厚 推片边缘不光滑 血膜有空泡 推片时用力不均 血膜呈搓板状 血量过大 血膜呈毛刷状 载玻片上有油腻,请您练习,点击退出,瑞特染色细胞受色原理是怎样的?,答案:,在染色时，细胞的受色既有化学亲和作用，又有物理吸附作用。细胞中的嗜酸性物质（如血红蛋白、嗜酸性颗粒）易与酸性染料伊红结合，染成粉红色；细胞中的嗜碱性物质（如核染色质、嗜碱性颗粒）易与碱性染料美蓝或天青结合，染成蓝色；中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色。,请您练习,染色适宜的血膜是怎样的?,答案:,染色适宜的血膜外观呈淡琥珀色，在显微镜下红细胞染成粉红色，在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中的颗粒能显示各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。,再见,胡建新,
