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1、,SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定,主要内容：,一、SELDI蛋白质芯片技术二、差异蛋白质电泳方法三、差异蛋白质的二级质谱鉴定 四、SELDI蛋白质芯片技术发展现状 五、SELDI蛋白质芯片技术发展趋势探讨,一、SELDI蛋白质芯片技术,二、差异蛋白质电泳方法,二、差异蛋白质电泳方法,三、差异蛋白质的二级质谱鉴定,1,4,三、差异蛋白质的二级质谱鉴定,四、SELDI蛋白质芯片技术发展现状,五、SELDI蛋白质芯片技术发展趋势探讨,近年来随着质谱技术的不断进步，质谱分辨率越来越高，蛋白鉴定的电喷雾傅立叶变换离子回旋共振高分辨质谱也采用的是一种具有超高质量分辨能力的新型质谱仪，它将电
2、喷雾离子化(ESI)技术结合于傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(FTICR-MS)。在离子源的电离技术上和质量分析器上有着各自的优缺点。,2,ESI技术与传统的电子轰击(EI)电离、化学电离(CI)、场解析(FD)离子化技术及快原子轰击(FAB)离子化技术相比，具有更适于离子性极性化合物、质荷比小于4000、化学噪音低、容易获得碎片离子信息、所鉴定蛋白质分子量可达1，000，000Da等优点，但其离子源结构复杂，易受Na+、K+等金属离子干扰，且不能用于分析非极性化合物的缺点仍难以避免。,五、SELDI蛋白质芯片技术发展趋势探讨,3,与磁质谱仪、四极质量过滤器质谱仪、离子肼质谱仪相比，FTICR-
3、MS具有较扫描型质谱(磁质谱、四极杆等)高得多的灵敏度；且其感应电流检测离子的方式是非破坏性的，离子可继续被储存、分析，从而实现多级质谱分析；具有超高分辨能力和质量精确度(很容易实现几十甚至上百万的分辨率，无需内标就能达到小于2ppm的质量准确度，是现有分辨率最高且质量稳定性较好的目前蛋白质和肽段测序中的顶端质谱仪。,五、SELDI蛋白质芯片技术发展趋势探讨,1,仉红刚研究中所选两种目标蛋白均为分子量均大于50kDa的极性分子，因而仅从各电离技术适用的质量范围上即可首先对排除EI(小于1000Da)、CI(小于1000Da)、FD(小于2000Da)、FAB(200-6000Da)等的选择，而选用所鉴定蛋白质分子量可达1,000，000Da且尤其适于离子性极性化合物的ESI技术。,五、SELDI蛋白质芯片技术发展趋势探讨,在质量分析器的选择上，磁质谱仪虽堪称经典，但不能较好地与离子化技术连用、且体积大造价高；四极质量过滤器质谱仪虽体积小造价低且重复性好，但分辨率较低；离子肼质谱仪动态范围窄、不便确定是否适用于目标蛋白，且易受检测器条件等多个仪器参数的影响因而重复性略差。,故以SELDI蛋白质芯片技术进行了蛋自质差异表达筛选，并进行差异蛋自的后续分离鉴定，采用双向凝胶电泳方法能更有效地从蛋自质混合液中分离出目标蛋白，进一步经FTICR-MS可以获得较理想的鉴定结果。,谢谢！,
