《细菌性食源性疾病及其病原学检验规程ppt课件.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌性食源性疾病及其病原学检验规程ppt课件.pptx（95页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、细菌性食源性疾病,由细菌通过摄食而进入人体的，使人体患感染性或中毒性的一类疾病。属食源性疾病范畴，主要包括细菌性肠道传染病和细菌性食物中毒,细菌性肠道传染病,属我国法定传染病，主要包括霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒及新近参照传染病管理的由肠出血性大肠埃希菌O157引起的出血性肠炎,细菌性食物中毒,人体摄入了被细菌或其毒素污染的食品后所出现的非传染性急性、亚急性疾病,细菌性食源性疾病处置程序,细菌性食物中毒应急处理程序（附图1）首接单位可能是区县疾控中心或区县卫监所 卫生监督所负责调查处理，疾控检验机构配合检验 细菌性肠道传染病应急处置程序（附图1）联合应急处理小组中疾控中心负责流调和病人采样，卫生监
2、督所负责卫生调查和食品环节采样,现场调查,根据患者的临床症状，核实诊断，初步判断是否属食物中毒或食源性疾病 现场流行病学个案调查 卫生学调查 确定常见细菌性食源性疾病和食物中毒的样品采集种类与范围和相关检验项目,细菌性食源性疾病的主要临床特征（附表1）,细菌性食源性疾病有关症状与病原学检验项目、检验样品关系（附表2）,样品采集流程,样品采集与送检流程 无菌采样方法采集及时做好样品标记，完整填写采样送检申请单（见附表4）详细填明检样名称、来源、送检时间、中毒情况、患者主要临床症状、检验项目等,样品采集数量,学校等集体单位至少采集新发病人或具有典型的临床症状、未经过抗生素治疗的样品（粪便或肛拭）1
3、0份 可疑食品应采集5份（留样食品、原配料、半成品）食品容器、用具和加工设备等环节采样510份 食堂或盒饭公司从事食品从业人员进行肛拭采样,样品采集注意事项,采样用的试管、瓶子、盛器、剪刀、镊子、棉拭等均应无菌采样用的生理盐水、卡里运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜、无菌的要求，同时应符合采样所需要的试剂量，卡里运送培养基为5ml/管为宜肛拭、食品和环节等采样，其采样量须满足必须开展的检验项目的要求，如肛拭采样至少要用2根棉拭，食品采样应尽量多于25g（ml）以上采样的同时，应及时做好样品标记，完整填写采样单。立即将检样送检验室，并有交接手续,各类样品采集方法（1）,可疑食物、水样：将残余食
4、物或水样用灭菌镊子或匙采取后置于灭菌容器中。体积较大的鱼、肉应在表面消毒后取内部检样。罐头样品可直接送检 环节样品：炊事用具如锅、碗、刀、抹布、操作人员的手等用棉拭涂擦采样，菜墩用刀刮取表面后将刮取物放入灭菌容器中,各类样品采集方法（2）,粪便、肛拭：粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、粘液部分3-5克、水样便取含絮状物的2-5ml，盛于无菌容器中及时送检。若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少
5、采集2支肛拭,各类样品采集方法（3）,呕吐物：直接放入无菌容器中及时送检 咽拭样品：采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红肿处（特别是白膜处），然后将棉签插入4-5ml生理盐水中，尾部弃去 血液：采集患者急性发病期（3天内）和恢复期（2周左右）各3ml全血分离血清送检,色原（荧光）氨基酸结合物 氨基酸+色原（荧光）观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌、弯曲菌，为进一步的检验提供有用的信息由细菌通过摄食而进入人体的，使人体患感染性或中毒性的一类疾病。各类样品采集方法（3）纯培养大肠杆菌 0157:H7检测从业人员：据食物中毒的情况要求，可采取售货员或制作食品的工作人员及直接或间接接触食品的有关人员
6、肛拭检样，特别对那些在事件发生前或现正患有肠炎、发烧、化脓性及可疑带菌者进行采样健康从业人员体检致病微生物阳性检出率的提高靛基质大多+（宋内-）本菌为革兰氏阳性杆菌，菌体短小，直或稍弯产毒素埃希氏菌（ETEC）LT（热敏毒素）与ST（耐热毒素）在选择性平皿上，可形成两类菌落各类样品采集方法（3）由细菌通过摄食而进入人体的，使人体患感染性或中毒性的一类疾病。1880年：人工培养基发明初步检验活菌数、直接镜检(涂片染色镜检)按国标菌落总数测定方法进行，以了解可疑食品被污染情况健康从业人员体检致病微生物阳性检出率的提高葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.该菌的生长范围为2-42（故可用4冷增菌以抑制其它杂菌
7、的干扰），最适培养温度为35-37快速检测细菌生化反应的色原或荧光底物,各类样品采集方法（4）,从业人员：据食物中毒的情况要求，可采取售货员或制作食品的工作人员及直接或间接接触食品的有关人员肛拭检样，特别对那些在事件发生前或现正患有肠炎、发烧、化脓性及可疑带菌者进行采样,样品送检,检样采取后立即由专人在2小时内送区县疾病预防控制中心或（和）市疾病预防控制中心实验室检验 送检检样时，应附送采样送检申请单，并按要求注意冷藏 样品送检人员应与实验室收样或检验人员履行样品交接手续,样品检验的能级分工,一般食源性细菌性突发事件由事件发生所在地区县疾控系统检验机构承担 重大食源性细菌性突发事件以事件发生所
8、在地区县疾控系统检验机构承担为主，市疾控检验机构应共同参与检验工作 特大食源性细菌性突发事件由市疾控检验机构和事件发生所在地区县疾控系统检验机构组成的现场检验小组共同承担,检验项目的分级,区县疾控系统检验机构应承担霍乱弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、志贺菌、溶血性链球菌及单核细胞增生李斯特菌引起的食源性突发事件的样品检验,检验项目的分级,市疾控检验机构除开展以上全部检验项目外，还需承担金黄色葡萄球菌肠毒素、各类致泻性大肠埃希菌毒素（或毒素基因）的测定以及区县疾控系统检验机构检出的霍乱弧菌、大肠埃希
9、菌O157和疑难菌株的最终鉴定工作 在一般食源性细菌性突发事件和重大食源性细菌性突发事件的样品检验工作中市疾控检验机构应承担技术指导和质量控制的职责,检验技术依据,GB 4789-2003食品卫生微生物检验 GB 17012-1997感染性腹泻的诊断标准和处理原则 WS/T8-1996病原性大肠艾希氏菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T9-1996变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T13-1996沙门氏菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T80-1996葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T81-1996副溶血性弧菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T82-1996蜡样芽胞杆菌
10、食物中毒诊断标准及处理原则,细菌性食源性疾病的检验宗旨,竭尽全力尽快找到病原体快速、准确可与传统方法不一定完全相同,细菌性食源性疾病样品检验的一般程序（附图2）,检验程序,1.样品采集 2.初步检验活菌数、直接镜检(涂片染色镜检)3.分离培养(包括增菌培养和直接平板培养)4.初筛试验 5.纯培养 6.全面鉴定,直接涂片染色镜检,观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌、弯曲菌，为进一步的检验提供有用的信息,一般活菌数的测定,按国标菌落总数测定方法进行，以了解可疑食品被污染情况,检样的处理,非病源检样包括可疑食物、水样及环节样品等最好按110的比例用胰大豆胨肉汤（TSB）37预增菌46h以保护和
11、放大目的病原菌 病源检样因含较多病原菌而一般无须做预增菌处理，但若病源检样为服过抗生素后采集的或是从业人员带菌查源的检样应按检验项目要求而进行预增菌处理（直接插入2ml TSB管37预增菌46h）,直接培养,将处理后的非病源检样及无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直接接种于各相应培养基,增菌培养及接种,将预增菌处理后的非病源检样、服过抗生素后采集的病源检样及从业人员带菌查源的检样按检验项目要求接种各相应增菌液培养 增菌培养后接种于各相应培养基,蔗糖-、动力-、H2S-、靛基质+葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.细菌性肠道传染病应急处置程序（附图1）健康从业人员体检致病微生物阳性检出率的提高套组鉴
12、定可以给细菌一个号码，代表生物型号码，以此作为追踪传染源的依据。健康从业人员体检致病微生物阳性检出率的提高细菌性食源性疾病的主要临床特征一般食源性细菌性突发事件由事件发生所在地区县疾控系统检验机构承担区县疾控系统检验机构应承担霍乱弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、志贺菌、溶血性链球菌及单核细胞增生李斯特菌引起的食源性突发事件的样品检验常规分离培基及其菌落特征检验结果的判定原则（5）将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，4倍增长可确诊若生化反应符合，而血清A-F多价-，考虑：coli，并证实该E
13、.产酸不产气（除F6产极少量气泡）疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做肥达氏反应，用作辅助诊断由细菌通过摄食而进入人体的，使人体患感染性或中毒性的一类疾病。1982年美国发现有种E.培养最适宜温度为42幼龄培养物为革兰氏阳性，衰老培养物可转为革兰阴性，呈两极着色，易误认为双球菌。葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.,可疑菌落的选取,常规分离培基及其菌落特征（附表3）,初筛试验,克氏双糖/三糖铁/肠道综合发酵管1、管2PCRVIDAS,可疑菌的鉴定,全面生化试验（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鉴定等）噬菌体试验 血清分型 毒素或毒素基因测试,毒素或毒素基因测试,霍乱弧菌肠毒素、葡
14、萄球菌肠毒素、EIEC侵袭毒素、ETEC肠毒素按国标方法进行动物试验或酶联免疫试验（VIDAS等）毒素基因测试：霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可用PCR检测，特别是对致泻性大肠埃希菌的定论应以毒素或毒素基因为准,患者血清的试验,疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做肥达氏反应，用作辅助诊断 将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，4倍增长可确诊,细菌性食源性疾病食品、水样、环节样品检验常规程序（附图3）,细菌性食源性疾病食品、水样、环节样品检验推荐程序（附图4）,细菌性食源性疾病人粪便、肛拭、呕吐物、咽拭样品检验推荐程序（附图5）,1880年：人工培养
15、基发明非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时本次细菌性食源性疾病事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体鼠伤寒沙门氏菌 1,4,5,12:i:1,2属我国法定传染病，主要包括霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒及新近参照传染病管理的由肠出血性大肠埃希菌O157引起的出血性肠炎判断为肠出血性大肠杆菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，还须证实SLT（VT）阳性注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛拭1970年以前：
16、忙于分离各种细菌，采用生化及血清学鉴定原有筛选培养基的不足：SS、Mac、WS、XLD本菌为革兰氏阳性杆菌，菌体短小，直或稍弯该菌的生长范围为2-42（故可用4冷增菌以抑制其它杂菌的干扰），最适培养温度为35-37将处理后的非病源检样及无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直接接种于各相应培养基可疑食品应采集5份（留样食品、原配料、半成品）靛基质大多+（宋内-）1945年Bary自病儿腹泻便中大量检出E.细菌性食源性疾病有关症状与病原学检验项目、检验样品关系1982年美国发现有种E.快速检测细菌生化反应的色原或荧光底物培养最适宜温度为42coli），人类认识该菌为正常细菌细菌性食源性疾病处置程
17、序,检验结果的判定,应以找到病原体或其毒素为最终结论，在此之前所有的快速检验方法如PCR、VIDAS等得到的结果仅供参考 应注意非病源检样与病源检样检出的病原体的统一性,检验结果的判定原则（1）,非病源检样与病源检样检出的致病意义明确的细菌在种类、生化和/或血清型、毒素型均一致时，可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体,检验结果的判定原则（2）,非病源检样与病源检样只有一种检出病原菌时，此检验结果仅供临床与流行病学诊断参考，其中非病源检样的检验结果参考价值较大，病源检样只有在同次细菌性食源性疾病事件中的多数患者样品中检出种类、生化和/或血清型、毒素型均一致的病原体时才有参考价值,检验结果的判定原
18、则（3）,非病源检样与病源检样只有一种检出病原菌时，在与同一次细菌性食源性疾病事件中采集的多数患者的急性发病期和恢复期血清发生有凝集效价显著升高的，可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体，但此结果仅用作回顾性诊断,检验结果的判定原则（4）,非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时本次细菌性食源性疾病事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体,检验结果的判定原则（5）,样品中检出的生化、血清符合致泻性大肠艾希菌、金黄色葡萄球菌，一定要以毒
19、素、毒素基因测试阳性为最终结论报告蜡样芽胞杆菌在非病源检样中须达到105cfu/g(ml)以上者才有报告价值,检验结果报告,检验技术人员应在收到食源性细菌性突发事件采样送检申请单后立即进行样品检验，并在5日内出具检验结果报告。特殊情况需延长出具检验报告时限的，应报相应卫生行政部门批准一旦检验结果确定后，在检验报告还未完成前可先向有关部门电话报告检验结果检验报告送达单位：市、区、县疾控中心实验室完成样品检验结果，将检验报告送达样品送检单位,检验样品的处置,市、区、县疾控中心在未完成细菌性食源性疾病和食物中毒的样品检验工作前，所有采集的样品应在合适的条件下保存，其中对经检验确属阴性的或已经检测出病
20、原菌并鉴定的样品完成检验报告后即可消毒销毁；对经检验为可疑的、暂时无法确认和需要复测的标本应予保留,检出病原菌的保存,区县疾控中心完成对细菌性食源性疾病和食物中毒样品检验后，对检到的细菌性食源性疾病和食物中毒病原菌菌株应在3日内由专人送市疾控中心，由市疾控中心菌毒种保藏中心统一保存；市疾控中心对细菌性食源性疾病和食物中毒标本中检到的病原菌，移交市疾控中心菌毒种保藏中心统一保存,细菌检验重要筛检试验,接触酶试验氧化酶试验,大肠杆菌 0157:H7检测初步检验活菌数、直接镜检(涂片染色镜检)检验技术人员应在收到食源性细菌性突发事件采样送检申请单后立即进行样品检验，并在5日内出具检验结果报告。沙门氏
21、菌具有辛酸酯酶，以-萘酚辛酯为底物，经沙门氏菌酶解，释出-萘酚与固兰作用出现紫红色培养基的进步 利用细菌的专有酶进行快速筛选此菌可以通过水源、食品原料、厨房食物制作中任何一个环节的污染传播给人类。判断为肠出血性大肠杆菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，还须证实SLT（VT）阳性细菌性食源性疾病有关症状与病原学检验项目、检验样品关系非病源检样与病源检样只有一种检出病原菌时，在与同一次细菌性食源性疾病事件中采集的多数患者的急性发病期和恢复期血清发生有凝集效价显著升高的，可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体，但此结果仅用作回顾性诊断若生化反应符合，而血清A-F多价-，考虑：产毒素埃希
22、氏菌（ETEC）LT（热敏毒素）与ST（耐热毒素）细菌微量快速鉴定系统（自动）VITEK，ATB本菌为革兰阴性菌，呈S形、螺旋状或纺锤葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.B 福氏志贺菌6个血清型+X、Y变种；沙门菌 ID 显色培养基典型菌落葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.色原（荧光）糖苷结合物 糖苷+色原（荧光）各类样品采集方法（1）将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，4倍增长可确诊,氧化酶试验,用于分辨G-杆菌中肠杆菌科及弧菌科两类细菌 革兰阴性杆菌,阳性反应 弧菌科,阴性反应肠杆菌科,接触酶试验,用于分辨G+球菌中葡萄球菌及链球菌,阳性反应葡萄球菌,革兰阳性球菌,阴性反应链球菌,接触酶,沙门菌
23、检测,概况,1880年发现，至今已有2600种有动力（除鸡-雏沙门菌）大多产H2S（除副甲伤寒沙门菌等）产酸大多产气（除伤寒、鸡-雏沙门菌）靛基质-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合肠杆菌科特征（葡萄糖+、硝酸盐还原+、氧化酶-）,沙门菌的初筛,肠道综合发酵管1：甘露醇（上斜面）+葡萄糖（下直面）+产气肠道综合发酵管2：蔗糖-、动力+、H2S+、靛基质-,血清凝集（1）,A-F多价+OH1H2,血清凝集（2）,若生化反应符合，而血清A-F多价-，考虑：Vi抗原（伤寒、副丙伤寒沙门菌）遮蔽，煮沸后再凝亚利桑那菌：迟缓发酵乳糖，延长Mac平板培养时间至4天可能是A-F以外的沙门菌：如O 39：H b，2
24、旺次渥沙门菌在上海地区多见极可能是柠檬酸杆菌,报告方式,A群 甲型副伤寒沙门菌 1,2,12:aB群 乙型副伤寒沙门菌 1,4,5,12:b:1,2 鼠伤寒沙门氏菌 1,4,5,12:i:1,2 C群 丙型副伤寒沙门菌 6,7,vi:c:1,5 猪霍乱沙门菌 6,7,:c:1,5D群 肠炎沙门菌 1,9,12:g,m 伤寒沙门菌 1,9,vi:d 鸡雏沙门菌 1,9,12:-,志贺菌检测,概况,至今已有4群（A、B、C、D）、32种（A-痢疾志贺菌10个血清型；B 福氏志贺菌6个血清型+X、Y变种；C-鲍氏志贺菌15个血清型、D-宋内 1个血清型，S，R两相）无动力乳糖-（除宋内迟缓发酵+）不
25、产H2S产酸不产气（除F6产极少量气泡）靛基质大多+（宋内-）蔗糖-甘露醇+（痢疾志贺菌为-）符合肠杆菌科特征（葡萄糖+、硝酸盐还原+、氧化酶-）,志贺菌的初筛,肠道综合发酵管1：甘露醇（上斜面）+/-葡萄糖（下直面）+不产气肠道综合发酵管2：蔗糖-、动力-、H2S-、靛基质+,大多产H2S（除副甲伤寒沙门菌等）coli引起出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS）微生物诊断的演化(B)大肠杆菌 0157:H7检测1970年以后：电脑化+细菌数值分类鉴定的应用样品送检人员应与实验室收样或检验人员履行样品交接手续属食源性疾病范畴，主要包括细菌性肠道传染病和细菌性食物中毒健康从业人员体检致病微
26、生物阳性检出率的提高应注意非病源检样与病源检样检出的病原体的统一性此菌可以通过水源、食品原料、厨房食物制作中任何一个环节的污染传播给人类。甘露醇+（痢疾志贺菌为-）非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时本次细菌性食源性疾病事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.ABCD4组O抗原多价凝集血清群沙门菌 ID 显色培养基典型菌落食堂或盒饭公司从事食品从业人员进行肛拭采样检验技术人员应在收到食源性细菌性突发事
27、件采样送检申请单后立即进行样品检验，并在5日内出具检验结果报告。1970年以后：电脑化+细菌数值分类鉴定的应用蔗糖-、动力+、H2S+、靛基质-Tracking Contamination in Production检验结果的判定原则（2）,血清凝集（1）,ABCD4组O抗原多价凝集血清群O单价型特异抗原种特异抗原（3，4，6，7）,血清凝集（2）,若生化反应符合，而血清A-F多价-，考虑：A、C群志贺菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鉴别（产气、ONPG）宋内的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窝哈夫尼亚菌，做大生化以鉴别可能是类志贺邻单胞菌，观察动力、氧化酶,报
28、告方式,痢疾志贺菌1型 福氏志贺菌2a型福氏志贺菌X变种 鲍氏志贺菌13型宋内志贺菌S相,大肠杆菌O157：H7检测,氨基肽酶属食源性疾病范畴，主要包括细菌性肠道传染病和细菌性食物中毒各类样品采集方法（3）细菌性食源性疾病食品、水样、环节样品检验推荐程序此菌可以通过水源、食品原料、厨房食物制作中任何一个环节的污染传播给人类。种特异抗原（3，4，6，7）有动力（除鸡-雏沙门菌）产毒素埃希氏菌（ETEC）LT（热敏毒素）与ST（耐热毒素）宋内的R相菌，用R相血清凝集区县疾控系统检验机构应承担霍乱弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、空肠
29、弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、志贺菌、溶血性链球菌及单核细胞增生李斯特菌引起的食源性突发事件的样品检验革兰阴性杆菌常规分离培基及其菌落特征葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.coli有两类：正常E.常用呈色的色原有：、萘酚，邻位或对位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯各类样品采集方法（1）食堂或盒饭公司从事食品从业人员进行肛拭采样注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛拭DNA RNA 蛋白质样品中检出的生化、血清符合致泻性大肠艾希菌、金黄色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因测试阳性为最终结论报告疫 浓 缩 增 菌技术,概况,1885年德国人艾希自人畜肠腔分离出（E.coli），人类认
30、识该菌为正常细菌1945年Bary自病儿腹泻便中大量检出E.coli，并证实该E.coli是病源逐渐认识E.coli有两类：正常E.coli和致泻E.coliEIEC、EPEC、ETEC1982年美国发现有种E.coli引起出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS）1987年levine提出EHEC概念，指出SLT毒素是病因1996年日本9000名儿童暴发，11人死亡，E.coli O157：H71999年我国暴发？,大肠杆菌 0157:H7检测,大肠杆菌O、H抗原不同分成200多血清型山梨醇不发酵（95%E.coli 发酵）葡萄糖醛酸酶阴性（96%E.coli 阳性）判断为肠出血性大肠杆
31、菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，还须证实SLT（VT）阳性,李斯特菌检测,该菌1926年被确认为是人兽共患病菌，但很快受到重视：分布广泛，在全世界的土壤、水中都有存在，温带比热带更多见易感动物多，除人类外，迄今已从42种哺乳动物，22种禽类、鱼类、甲壳动物中分离出来，其中易感性最高的是牛、兔、犬、猫低温下可生长，虽然此菌属于中温型，但其生长温度宽，为145在46的低温下也可繁殖。因此，放在冰箱中的食品，或经冷藏运输的食品，如有此菌存在，它们都可生长繁殖并使人致病1988年世界卫生组织证实为食物中毒病原菌：此菌可以通过水源、食品原料、厨房食物制作中任何一个环节的污染传播给人类
32、。主要的食品有4种：牛乳和乳制品：肉类，特别是牛肉及其制品；蔬菜、沙拉等食品；海产品,概况,本菌为革兰氏阳性杆菌，菌体短小，直或稍弯在2225环境可形成4根鞭毛，故在25肉汤培养物中运动活泼，37基本无动力。幼龄培养物为革兰氏阳性，衰老培养物可转为革兰阴性，呈两极着色，易误认为双球菌。,形态、动力与染色,本菌营养要求不高，在20-25培养有动力，穿刺培养，2-5天可见倒立伞状生长该菌的生长范围为2-42（故可用4冷增菌以抑制其它杂菌的干扰），最适培养温度为35-37初期在5%羊血琼脂平板上菌落细小、露滴状、光滑、透明，后变灰暗。单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌在血平板上的菌落有
33、狭窄的-溶血环,培养特性,弯曲菌检测,本菌为革兰阴性菌，呈S形、螺旋状或纺锤生长要求为微量的有氧条件培养最适宜温度为42在选择性平皿上，可形成两类菌落1.第一型菌落不溶血、灰白色、扁平、湿润、有光泽、有扩散趋势，看上去象水滴，有从接种划线向外扩散的倾向2.第二型菌落不溶血、菌落是分散单个的(直径12mm)凸起，完整发亮的菌落,形态、培养特性,1945年Bary自病儿腹泻便中大量检出E.D群 肠炎沙门菌 1,9,12:g,m霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、EIEC侵袭毒素、ETEC肠毒素按国标方法进行动物试验或酶联免疫试验（VIDAS等）氨基肽酶靛基质-、蔗糖-、乳糖-epidermidis(R
34、aw Material)根据患者的临床症状，核实诊断，初步判断是否属食物中毒或食源性疾病培养基的进步 利用细菌的专有酶进行快速筛选非病源检样与病源检样只有一种检出病原菌时，此检验结果仅供临床与流行病学诊断参考，其中非病源检样的检验结果参考价值较大，病源检样只有在同次细菌性食源性疾病事件中的多数患者样品中检出种类、生化和/或血清型、毒素型均一致的病原体时才有参考价值各类样品采集方法（3）靛基质大多+（宋内-）产酸大多产气（除伤寒、鸡-雏沙门菌）蜡样芽胞杆菌在非病源检样中须达到105cfu/g(ml)以上者才有报告价值各类样品采集方法（1）肛拭、食品和环节等采样，其采样量须满足必须开展的检验项目的
35、要求，如肛拭采样至少要用2根棉拭，食品采样应尽量多于25g（ml）以上微生物诊断的演化(A)epidermidis(Personnel Hands)人体摄入了被细菌或其毒素污染的食品后所出现的非传染性急性、亚急性疾病,快速检测技术在疾病控制系统微生物检验中的应用,上海市疾病预防控制中心陈悦,微生物诊断的演化(A),1673年：显微镜发明1880年：人工培养基发明1914年：干燥培养基发明1970年以前：忙于分离各种细菌，采用生化及血清学鉴定,微生物诊断的演化(B),1970年以后：电脑化+细菌数值分类鉴定的应用1980年：微量快速生化的应用及全自动鉴定系统的产生1985年以后：各种免疫及核酸技
36、术的广泛应用,培养基的进步 利用细菌的专有酶进行快速筛选,原有筛选培养基的不足：SS、Mac、WS、XLD沙门氏菌具有辛酸酯酶，以-萘酚辛酯为底物，经沙门氏菌酶解，释出-萘酚与固兰作用出现紫红色大肠埃希氏菌具-葡萄糖醛酸酶，但以O157：H7为代表的肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）却不具此酶，故-葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征,E.coli O157:H7 ID 显色培养基典型菌落,O157：H7墨绿色菌落,沙门菌粉色菌落,沙门菌 ID 显色培养基典型菌落,细菌微量快速鉴定系统（手工）API MicroScan Rap-ID Enterotube,细菌鉴定的微量多项试验套组可
37、使微生物有一标准的鉴定材料，不会因为所使用的培养基不同而鉴定出不同菌名。可缩短鉴定的时间。传统试管鉴定法需配制各种不同培养基，非常麻烦，而鉴定套组一次可配上好几百个，可存放。套组鉴定可以给细菌一个号码，代表生物型号码，以此作为追踪传染源的依据。,细菌微量快速鉴定系统（自动）VITEK，ATB,VITEK,直接从标本中检查微生物抗原,应用单克隆抗体结合各种形式的放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）、时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）、化学发光免疫分析（CIA）、生物发光免疫分析（BIA）等，足以检出临床标本中痕量的微生物抗原，免去细菌或病毒培养过程，直接完成微生物
38、感染的快速诊断,VIDAS筛检致病菌,ELFA检测技术,全自动,疫 浓 缩 增 菌技术,成品培养基,手工/自动鉴定系统,全自动检测系统,生物梅里埃提供符合需要的完整解决方案,快速检测细菌生化反应的色原或荧光底物,糖苷酶 色原（荧光）糖苷结合物 糖苷+色原（荧光）氨基肽酶色原（荧光）氨基酸结合物 氨基酸+色原（荧光）,快速检测细菌生化反应的色原或荧光底物,常用呈色的色原有：、萘酚，邻位或对位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯常用的荧光物有：4-甲基伞形酮（4MU），7氨基4甲基伞形酮香豆素,快速检出细菌的毒素,直接检出细菌的毒素，常比细菌培养更可靠 产毒素埃希氏菌（ETEC）LT（热敏毒
39、素）与ST（耐热毒素）肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）VT/SLT 金黄色葡萄球菌多种肠毒素 霍乱弧菌肠毒素 副溶血弧菌TDH,DNA RNA 蛋白质,抗体反应代谢反应脂肪酸特征,为什么要以基因技术为检测基础?,PCR技术的具体应用,健康从业人员体检致病微生物阳性检出率的提高食物中毒应急事件的快速应对食源性细菌污染物的监测霍乱弧菌的环境监测疑难细菌的检验菌种的鉴定疾控系统微生物室间质控考核,S.epidermidis(Personnel Hands)S.epidermidis(Raw Material)S.epidermidis(Finished Product),Tracking Conta
40、mination in Production,细菌性食源性疾病的主要临床特征（附表1）,检验结果的判定原则（4）,非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时本次细菌性食源性疾病事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体,检验结果报告,检验技术人员应在收到食源性细菌性突发事件采样送检申请单后立即进行样品检验，并在5日内出具检验结果报告。特殊情况需延长出具检验报告时限的，应报相应卫生行政部门批准一旦检验结果确定后，在检验报告还未完成前可先向
41、有关部门电话报告检验结果检验报告送达单位：市、区、县疾控中心实验室完成样品检验结果，将检验报告送达样品送检单位,概况,1880年发现，至今已有2600种有动力（除鸡-雏沙门菌）大多产H2S（除副甲伤寒沙门菌等）产酸大多产气（除伤寒、鸡-雏沙门菌）靛基质-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合肠杆菌科特征（葡萄糖+、硝酸盐还原+、氧化酶-）,志贺菌检测,概况,至今已有4群（A、B、C、D）、32种（A-痢疾志贺菌10个血清型；B 福氏志贺菌6个血清型+X、Y变种；C-鲍氏志贺菌15个血清型、D-宋内 1个血清型，S，R两相）无动力乳糖-（除宋内迟缓发酵+）不产H2S产酸不产气（除F6产极少量气泡）靛基质大多+（宋内-）蔗糖-甘露醇+（痢疾志贺菌为-）符合肠杆菌科特征（葡萄糖+、硝酸盐还原+、氧化酶-）,大肠杆菌O157：H7检测,快速检测细菌生化反应的色原或荧光底物,糖苷酶 色原（荧光）糖苷结合物 糖苷+色原（荧光）氨基肽酶色原（荧光）氨基酸结合物 氨基酸+色原（荧光）,
