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1、细菌培养标本的 采集、运送与处理（需氧）,内容简介,细菌培养基本原则常见临床标本的采集、运送与处理,细菌检验从正确取材开始,正确的采集、运送与处理细菌培养标本是临床细菌检验成功的关键。没有好质量的标本，实验室采取任何先进的分离、鉴定和药敏技术都是无济于事的,并有可能误导临床医生。微生物学检验的标准化首先应从标本采取,运送和处理的规范化开始。细菌室工作人员、临床医生和护士必须明白保证标本质量的重要性。,标本采集的普遍原则,避免自身菌群的污染，只要可能的话，应该确定一个代表感染过程的标本。选择正确的解剖部位，采用适当的技术和设备采集标本。选择合适的部位采集用于厌氧菌培养的标本。收集标本量要足够，量
2、少可能导致假阴性结果。每份标本上注明姓名，标本来源，采集部位，时间和日期。将标本放在设计用于提高可能病原体的生存、无漏、无菌、无潜在安全性问题的容器内。,标本转运的原则,所有标本必须立即送交实验室，最好不要超过2小时，如标本处理不得不延迟，应在合适的条件下储存，但不超过24小时。对环境敏感的微生物包括志贺氏菌（应立即处理）、淋球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌（对低温敏感）。脑脊液、生殖器、眼或内耳标本不要冷冻。,哪些情况需要使用运送培养基?,在病人家里采集的标本外检标本标本从医院送实验室过程,运送培养基原则,运送所有细菌 需氧菌、厌氧菌、苛氧菌细菌不生长 非营养培养基保持细菌存活:标本采集后超
3、过24 h不应增加或减少活菌数量,标本的拒绝接收原则,未贴或错贴标签送检延迟不正确的转运温度和转运工具不合适或泄漏的容器有明显污染的标本干涸的拭子标本标本量不足同一天内同一个检测条件的重复标本（血培养除外）,问题标本的处理,与送检医生或护士联系。对非损伤方法取得的标本，再送新标本。对经损伤程序取得的标本，和临床联系后可以处理，但要在申请单上注明问题。特殊情况下，即使标本质量有损害，也必须处理。疑难病症罕见病例传染性疾病的会诊,血液细菌培养,临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血流感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效地抗菌治疗，从而有助于提高
4、治愈率和降低医疗费用。,采血时机,在出现临床症状后应尽快抽血作培养，最好在发热初期和高峰或寒战时。原则上应选择在抗菌药物应用之前，对已应用药物而病情不允许停药的患者也应在下一次用药前采血。,采血部位,通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。多次采血时,应在不同部位进行。不要从血管插管内采血。切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取 血标本。,采血次数与间隔,急性感染患者：从两臂分别采2份血样。感染性心内膜炎患者:24h内采血3次,每次间隔不少于30分钟。发热原因不明患者:24-48h后可再采血2次,间隔不少于60分钟。,采血方法,采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注
5、入血培养瓶前，应更换针头或过火消毒针头。血培养瓶口也要消毒，并待酒精挥发后（建议用酒精灯烧灼瓶口）再注入血样,。,采血量,每次采血量成人510ml，婴幼儿12ml，培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素。每增加1ml血量平均提高阳性率3.2%。,抗凝剂,0.025-0.05%聚茴香脑磺酸钠(sodium polyanethol sulfonate,SPS)。SPS具有抗凝抗吞噬抗补体及拮抗某些抗生素的作用。,培养条件,视患者的感染、用药情况选用不同的培养瓶。真菌培养可和普通培养共用一需氧瓶。不需要每个血培养都作厌氧培养。若同一次抽血既做需氧也做厌氧，应先厌氧再需氧。黄色小儿瓶蓝色
6、未用抗生素需氧绿色已用抗生素需氧（）紫色未用抗生素厌氧橙色已用抗生素厌氧（）,胸腹水及脑脊液标本,采集:以无菌操作穿刺抽取，直接注入培养瓶内。量少注入小儿瓶，量多的注入成人瓶。运送:若床边没有接种，用带盖的无菌容器送检。,血液和无菌体液的处理,血液或无菌体液抽取后应立即放入血培养瓶,立即送检或室温保存,不能放冰箱!实验室接到标本应立即放入血培养仪。中夜班收到标本放置室温,不用放置35温箱。对急诊室送来或室温久置的标本，应先检查瓶底有无变化，如变黄，应先涂片并盲传，以防漏检。,尿液标本,标本采集时间:应在用药前或停药5天后留取标本以晨起第一次尿为宜使尿液在膀胱内停留6-8h以上(给细菌足够的繁殖
7、时间)。,尿液标本采集方法,中段尿：女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口。男性须翻转包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干。弃前段尿，无菌杯收集中段尿。导尿管导尿无菌操作进行导尿可减少尿道污染。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液；或拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。长期留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本。,尿液标本采集方法,膀胱穿刺法:是收集尿液的最好方法,尤其对厌氧菌检查,但由于是侵入损伤性操作,临床常少用,收集的标本可直接注入血
8、培养瓶中。肾盂尿采集法:应请泌尿科医生采取,左右侧的标本要标明,收集的标本可直接注入血培养瓶中。,尿液标本运送和保存,无菌杯立即送检室温下尿标本担搁稍久可导致尿内细菌数量明显增加而影响病原菌与污染菌的区分和细菌定量。不能立即送检者，可暂存4冰箱。,尿液标本处理,2小时内处理完毕培养基：血琼脂和麦康凯琼脂。接种方法：10ul接种环垂直插入充分混匀的样品中取一环尿液，划线方法为从上到下划一条直线，再画一条垂直线，反复划线呈棋盘状。35培养18-24h，观察结果。,呼吸道标本,标本留取质量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断。标本留取不当会导致抗菌治疗失败,以及造成耐药菌的出现。,标本采集时间,痰
9、液：以晨痰为好。多数患者晨痰较多，即使对痰量少的患者，也以清晨采集最为容易。对支气管扩张症或与支气管相通的肺空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。最好在应用抗菌药物之前或停药1天后采集标本。鼻咽拭子：应于抗菌药物治疗前采集为好。咽部又是呼吸和食物的通路，因此亦以晨起后采集为宜。,痰标本采集方法,自然咳痰：清水反复漱口后用力咳痰，从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。痰量极少者可用4510%氯化钠溶液雾化吸入导痰。气管穿刺法:适用于昏迷和咳嗽乏力患者。纤维支气管镜抽取法:适用于纤维支气管镜检查或治疗的患者。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正
10、常菌群感染。小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿因压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上，从而获得标本。双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管经人工气道估插至叶支气管水平吸引痰液。,痰标本运送和保存,从病人留痰后应在1h内送至实验室不能及时送检者，可暂存4冰箱。室温下担搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率明显降低未用运送培养基的标本送到实验室后应在30分钟内接种到相应培养基,痰标本的处理,培养前的处理：痰液的洗净：痰液含有许多正常菌群而影响病原菌检出。可用10-20ml无菌生理盐水洗两三次，最后将剩余
11、的脓痰继续处理。痰液的均质化：向痰液内加等量约pH7.6的10g/L胰酶溶液，放置3590min，即能使痰液均质化，而对细菌培养无明显影响。,痰标本的处理,判断标本是否合格洗过的痰液革兰染色后用低倍镜检鳞状上皮细胞数量鳞状上皮细胞数10/lp，则要求重新留取标本，不宜做培养；证实标本来自下呼吸道后，用油镜观察细菌的着色、形态及排列，做出初步病原学诊断。发现任何白细胞内的细菌，均须报告。,痰标本的处理,培养基：血琼脂、麦康凯琼脂、嗜血杆菌巧克力琼脂和沙保弱琼脂。划线方法：分四区划线，每次划下一区前都要烧灼接种环，待冷却后再划。下一区与上一区要相交4-6次。355%-10%二氧化碳中培养24-48
12、h。,咽拭子及口腔拭子,采集前患者应用冷开水反复漱口，拭子的选择：要求无菌、不含抑制剂；预先沾湿拭子（非常重要）；由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次以取得标本。对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病，直取病灶部位，拭子要避免接触口腔及舌粘膜。减少污染。立即送检。室温保存。接种同痰,保护性毛刷标本的处理,取完后加入1ml无菌生理盐水立即送检。震荡、离心、涂片染色。接种培养基同痰接种划线方法同尿培养,粪便培养,社区感染标本：社区感染性腹泻，多由志贺菌、沙门菌、弧菌、耶尔森菌等肠道致病菌感染所引起。将标本接种在相应的选择性分离培养基上即可，弧菌、耶尔森菌
13、应先增菌后培养以提高检出率。住院患者腹泻标本：多为大量使用广谱抗生素后导致菌群失调引起。住院超过3天或入院诊断不是肠胃炎的不做常规粪便培养。应考虑梭状芽胞杆菌培养或毒素测定。常见病原菌有艰难梭菌、弯曲菌、葡萄球菌、肠球菌、念珠菌等。选择培养基应根据涂片结果而定。,粪便标本采集,应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集。排便后，挑取有脓血、黏液部分的粪便（液状粪便则取絮状物），稀便不少于1ml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子。对不易获取粪便者或婴幼儿，可用肛拭采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润。然后插入肛门约45cm（幼儿约23cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后退出，置运送培养基内送检。
14、除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病源检查。,粪便标本运送,卡波氏管：普通培养碱性蛋白胨水：霍乱弧菌培养难辨梭菌培养：及时送检，用厌氧输送培养基。,粪便标本处理,普通培养MAC、SS、10%绵羊血的弯曲杆菌培养基（暂无)四区划线（同痰标本）MAC、SS 35培养10%绵羊血的弯曲杆菌培养基42 5%-10%二氧化碳培养霍乱弧菌培养：记录收到标本时间和病人电话碱性蛋白胨水35培养6-8小时后转种4号平板（四区划线）继续35 培养,生殖道、尿道标本采集,男性患者:尿道标本:2h不排尿清洗龟头后,用碘伏等消毒后,挤出分泌物或以专用细拭子插入尿道口1-2cm旋转采取分泌物立即送检。前列
15、腺液标本:应由医师按摩前列腺,以无菌操做自尿道口采取前列腺液放在无菌杯内送检。,生殖道、尿道标本采集,女性患者:成年患者:应在扩阴器的支持下,以无菌棉拭子擦去分泌物，再用新的无菌拭子紧贴宫颈内道采样送检。未成年患者:不应使用扩阴器,应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。尿道：2h不排尿，拭去尿道口渗出物，再插入尿道口1-2cm旋转采取分泌物立即送检。,生殖道、尿道标本处理,立即送检普通培养和淋球菌培养：室温支原体、衣原体：4保存,生殖道标本处理,普通培养：血琼脂三区划线35培养淋球菌培养淋球菌巧克力平板预温后立即接种三区划线35 5-10%CO2培养杜克雷嗜血杆菌培养嗜血杆菌巧克力平板立即接种
16、三区划线35 5-10%CO2培养,手术创口、烧伤创面与脓液处理,无菌生理盐水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的脓液和分泌物，置运送培养基内送检。采2个拭子，一个培养，一个涂片。开放性脓肿：尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样。从脓肿底部或脓肿壁取样最好。封闭性脓肿：宜用碘酒、酒精消毒皮肤后，无菌注射器抽取脓液送检，最好做厌氧培养。采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。,标本运送处理,2h内送检，不能及时送检可放室温。血平板三区划线35培养,静脉导管末端培养,标本采集酒精清洗导管周围皮肤导管末端及夹子5cm无菌移入无菌管立即送检15min，防干燥4保存标本处理血琼脂无菌镊子夹住导管头在血琼脂上滚动4次，导管头留在平板上。35培养,组织标本处理,无菌操作将组织块置于无菌管内，立即送检，防标本干燥无菌剪刀剪碎，接肉汤管内，另直接接种血平板，三区划线，355-10%CO2培养,注意,除已接培养瓶的血和无菌体液外，凡有真菌培养的，均须接种沙氏平板，划线方法同其他平板。30培养。,谢谢,
