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1、绞股蓝皂甙的提取研究摘 要本文主要研究绞股蓝皂甙的提取工艺，采用单因素法及正交设计法，以绞股蓝皂甙提取量为参考指标，对影响绞股蓝皂甙提取工艺的因素进行优选，结果表明，绞股蓝皂甙的最佳提取工艺为：浸提温度为100，浸提时间为1.5h2.0h，浸提溶剂量为50倍。关键词：绞股蓝皂甙；提取工艺；单因素法；正交设计目 录引言. 41材料与方法.41.1实验材料 .41.2实验试剂.51.3实验仪器.51.4绞股蓝皂甙的提取研究.51.5绞股蓝皂甙含量的测定 51.5.1预处理 51.5.2样品液的配制 51.5.3标准液的配制 61.5.4结果计算 61.6 实验分析方法 61.6.1. 单因素法61
2、.6.2. 正交设计法72结果72.1单因素法分析对绞股蓝皂甙得率的影响.72.1.1浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响. 72.1.2浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响 82.1.3浸提溶剂量对绞股蓝皂甙得率的影响. 82.2正交设计法分析绞股蓝皂甙的最适提取条件 .93 讨论 . 103.1绞股蓝干样与鲜样的选择103.2标准品的选择 . 103.3最大波长的选择 . 103.4净化方法的选择 . 103.5绞股蓝皂甙提取温度的选择 103.6 绞股蓝皂甙提取时间的选择 104结论.115参考文献. 12引 言绞股蓝 (Oynostemma pentaphyllum(Thunb)makino) 系
3、葫芦科绞股蓝属多年生草本植物，绞股蓝在长江以南的地区均有分布，野生资源丰富。它的医疗和保健价值已有研究报道。在临床上除普遍用作防癌药物外 ，对白细胞减少症 、高血脂症及胃溃疡、肝炎等均有确切疗效。系统药理学和临床试验也证明：绞股蓝中含有独特的生物活性物质，其主要有效成分为人参皂甙、黄酮类物质、多糖以及多种氨基酸和微量元素1。因此，已有以绞股蓝为原料研制各种保健品的报道。有些产品(如饮料、医药品和食品添加剂等)需要先浸提。绞股蓝总皂苷片作为药品已经上市多年，用于高脂血症，见有心悸气短、胸闷肢麻、眩晕头痛、健忘耳鸣、自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚、痰阻血瘀者。所以绞股蓝皂甙，可以有效的调节儿童生理机
4、能、增强肌体免疫力、清除激素类药物副作用、抗癌、抗疲劳、抗缺氧、抗热、抗衰老、促进细胞新陈代谢，强壮补矗等作用。对大脑中枢有良好的镇静、兴奋双向调节作用及白嫩肌肤等功能且无毒副作用，无三致作用，是目前医药及保健品行业大量需要的原料2-4。为了最大限度提取并保持绞股蓝的有效成分，保证绞股蓝药材资源的充分利用，提高经济效益，本文以绞股蓝为材料，设置浸提温度、浸提时间、浸提溶剂量3个因素，采用单因素法和正交实验设计，研究提取绞股蓝皂甙保健成分的最佳浸提条件，从而使绞股蓝的有效成分能得到充分利用。此工艺提取物质质量好，生产成本低，提取速度快，其中所含的保健因子适合应用于各类保健品中5,6。1 材料与方
5、法1.1实验材料 绞股蓝，浙江缙云1.2实验试剂香兰素冰醋酸溶液：称取5g香兰素，加冰已酸溶解并定溶至100ml高氯酸：分析纯 天津市鑫源化工厂 20060902人参皂甙Re粉：中国药品生物制品检定所PT大孔树脂：南开大学试剂厂人参皂甙Re标准溶液：精确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0 ml：即每毫升含人参皂甙Re2.0m g冰醋酸：分析纯 国药集团化学试剂有限公司 200709111.3实验仪器双联打浆机,型号 MDJ真空浸提灌,型号SLG-500电热鼓风干燥箱, 型号DGF-5AB20目细度的滤布, 夹层锅, 型号100L恒温水浴锅，浙江海宁新华医疗器械厂，型
6、号HHS-2大孔树脂预柱，江苏省江阴第二医疗器械厂，型号DT 微量进样管，宁波市镇海玻璃仪器厂电子天平，余姚市金诺天平仪器有限公司，型号JT721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司，型号16C141.4绞股蓝皂甙的提取 称取1g绞股蓝样品放入高型烧杯加入50ml水盖上表面皿温度控制在100提取过程中每 5 min搅拌1次水提1.5h左右浸提后用滤纸过滤定容至100 ml。1.5绞股蓝皂甙含量的测定步骤1.5.1预处理用25ml纯化水洗柱，洗液弃去（水洗） 用25ml70的酒精洗柱，洗液弃去（酒精洗）再用25ml纯化水洗柱，洗液弃去（再水洗）1.5.2样品液的配制用1ml移液管移取1ml样品入
7、柱用25ml纯化水洗柱，洗液弃去用25ml70的酒精洗柱，接收洗液（可用25ml容量瓶，也可用蒸发皿直接接收）60水浴挥干（注：水温不高于70）加入0.2ml5的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）60水浴10min迅速冷却加5ml冰醋酸，混匀，倒进10ml的比色皿中，比色，波长560nm，与标准管一起比色测定1.5.3标准液的配制精密称取人参皂苷 Re标准溶液（2.0mg/ml）50ul放入具塞试管中加入新配置的0.2ml5的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）60水浴，10min迅速冷却加5ml冰醋酸，摇匀，作
8、为供试品溶液另取15 ml具塞试管中加入新配置的0.2ml5的香兰素冰醋酸溶液（用1ml吸管吸）加0.8ml高氯酸（分两次加，洗涤蒸发皿）60水浴，10min迅速冷却加5ml冰醋酸，摇匀，作为空白溶液取供试品溶液和空白溶液，在 560 nm的波长处分别测定吸收度。 1.5.4结果计算X=A1CV1001A2m10001000X-试样中总皂甙量,g/100gA1-测液的吸光度值A2-标准液的吸光度值C-标准管人参皂甙Re的量,ug待添加的隐藏文字内容2V-试样稀释体积mlm-试样质量1.6 实验分析方法1.6.1. 单因素法根据初步试验结果，选用三个单因素，分别为浸提温度，浸提时间，浸提溶剂量，
9、并且每因素选择3个水平进行试验，以绞股蓝皂甙得率为考察指标进行优选。1.6.2. 正交设计法根据初步试验结果，选用三因素三水平正交试验表，以温度(A)、料液比(B)、提取时间(C)为试验因素，每个因素取 3个水平(见表 1)。取样品，并按照正交设计进行实验，以绞股蓝总皂苷的提取量为考察指标，进行提取工艺的优选。表1 正交设计水平、因素编码表水 平因 素ABC（温度/）（料:液）（时间/h）1601:401.02801:501.531001:602.02 结果2.1单因素法分析对绞股蓝皂甙得率的影响2.1.1浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响绞股蓝原料的总质量约为1g，在温度为100,在料液比为1:
10、50的条件下，在不同的时间下浸提,结果见表2。表2 浸提时间对绞股蓝皂甙得率的影响浸提时间（h）绞股蓝原料的总质量（g）绞股蓝皂甙含量（mg）得率（%）11.00613.0781.301.51.00314.8441.4821.00614.8891.48从表2可以看出，浸提时间对绞股蓝皂甙的浸出率影响较大，有增加的趋势， 1.5h2.0 h的浸出率达到最高值。2.1.2浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响绞股蓝原料的总质量约为1g，料液比为1:50，浸提时间为1.5h2.0 h的前提下, 在不同的温度下浸提,结果见表3。表3 浸提温度对绞股蓝皂甙得率的影响温度()绞股蓝原料的总质量（g）绞股蓝皂甙含量
11、（mg）得率（%）601.0089.2740.92801.0099.3830.931001.00314.8441.48从表3可以看出，随浸提温度的升高，绞股蓝皂甙的浸出率呈逐渐增加的趋势，100时的浸出率达到最高。2.1.3浸提溶剂对绞股蓝皂甙得率的影响绞股蓝原料的总质量为1g，浸提时间为1.5h2.0 h，温度为100，在浸提溶剂不同的条件下浸提，结果见表4。表4浸提溶剂对绞股蓝皂甙得率的影响溶剂量绞股蓝原料的总质量（g）绞股蓝皂甙含量（mg）得率（%）40倍1.00714.6021.4550倍1.00314.8441.4860倍1.00814.3141.42从表4可以看出，随着浸提溶剂量的
12、增大，绞股蓝皂甙的浸出率呈上升趋势，但达到60倍剂量时，反而显著下降，因此，浸提溶剂量为50倍时较理想。2.2正交设计法分析绞股蓝皂甙的最适提取条件按照表1的因素水平设计进行绞股蓝总皂甙的提取，并依法测定绞股蓝总皂甙的含量，从而进行提取工艺优选，结果见表5。表5正交试验结果试验号ABC绞股蓝总量（g）绞股蓝总皂甙得率（%）11111.0080.8621221.0080.9231331.0060.9742121.0011.0252231.0031.1662311.0050.9473131.0081.4283211.0061.3093321.0081.42k12.753.303.10k23.123
13、.383.36k34.143.333.55K10.921.101.03K21.041.131.12K31.381.111.18优水平A3B2C3R0.460.030.15从表5可以看出，浸提温度、浸提溶剂量、浸提时间均不同程度影响绞股蓝皂甙的提取效果，由直观分析法R值可以看出，因素A的极差0.46为最大，说明它是A、B、C三因素中对绞股蓝皂甙提取影响最大的因素，其次是C，它的极差为0.15，这三因素对绞股蓝皂甙提取的影响由大到小的顺序为ACB。即浸提温度，浸提时间对绞股蓝皂甙提取有显著性影响，浸提溶剂量的影响不显著。3 讨论3.1绞股蓝鲜样与干样的选择 绞股蓝干样需经过杀青、揉捻、干燥等高温处
14、理，从而降低了绞股蓝保健成分的含量，因此，直接采用鲜样为原料开发绞股蓝饮料、各种保健品、医药用品和食品添加剂等，不仅可以充分利用绞股蓝的有效成分，而且还可以降低成本。3.2标准品的选择 绞股蓝皂甙与人参皂甙同为四环三萜的达玛烧型结构，文献报道，绞股蓝中含有与人参皂甙Re相同的成分，以人参皂甙为标准品，测定绞股蓝总皂甙是可以的。3.3最大波长的选择 用紫外可见分光光度计绘制吸光谱，结果洛合物在560nm和580nm处有两个吸光峰，最大吸收在560nm为本法测定波长。3.4净化方法的选择 大孔树脂是一种不含交换基团的具有大孔结构的高分子吸附剂，有吸附速度快，选择性好，易解吸附的优点。人参皂甙系为三
15、萜类化合物，选择大孔树脂作固相分离净化能达到良好的效果。本方法选择PT大孔树脂预柱。3.5 绞股蓝皂甙提取温度的选择 温度升高，分子运动速度加快，溶剂黏度降低，其渗透、溶解、扩散速度加快，提取效果较好，但温度过高，会使一些不耐热的成分被破坏，同时杂质容出量增多，给以后精制带来困难，提取时杂质含量少，但效果低。3.6 绞股蓝皂甙提取时间的选择 延长提取时间，有利于组织内有效成分的充分浸出，但时间过长，无用的杂质溶出量也随之增多，还可能造成一些不稳定成分的氧化。因此，要根据提取物质或不同原料的具体情况来选择提取时间，提取时间过长会导致生产周期延长。4结论本文主要探究绞股蓝皂甙的提取工艺，并对绞股蓝
16、皂甙进行优选，采用先进的物理提取原理设计的提取分离设备，使用水提法提取绞股蓝皂甙可有效的提高生产利润，降低生产成本，并使生产过程中无毒副作用和不导致环境污染。水提法受外界条件的影响较大，外界条件不同，从定量的绞股蓝中得到的绞股蓝皂甙的量也不同，主要受浸提时间、浸提温度、浸提溶剂量的影响比较大我们采用不同提取条件对多组实验进行对比，浸提时间1.5h2.0h，浸提温度为100，浸提溶剂量为50倍，本研究发现绞股蓝提取液中的总皂甙降解速度与放置时间成正相关。总皂甙降解主要因素可能与提取液中的大量氨基酸有关，即发生酸解。常规提取绞股蓝设备和工艺总皂甙的得率只有1%左右，其原因与提取液未及时除去氨基酸导
17、致绞股蓝酸解破坏有关；还可能与常规提取分离绞股蓝设备工艺在提取过程中时间过长有关。因此，绞股蓝皂甙的提取技术还有待进一步研究。5 参考文献1张阿慧,安彩贤,杨云.正交实验优选绞股蓝总皂甙的提取方法J.西北药学杂志,2001,16(6): 252-253.2 董玉睿.绞股蓝总皂甙提取工艺研究J.中国医药信息杂志,2007,14(6) :48-49.3 郑小江,刘金龙.甜味绞股蓝人参总皂甙、总氨基酸、总多糖综合提取工艺J.农业工程学报,2002,18(6) :144-145. 4 郭素枝,张国军,张育松.绞股蓝保健成分浸提条件研究J. 中国食品学报，2005,5(4) :96-100.5 寸永莉.绞股蓝总甙的含量测定J.中国新医药,2003,2(5):100-101.6 俞莎,于村,严中光.保健食品中西洋参总皂甙含量测定的研究J.中国卫生检验杂志,2000,10(6):683-684.
