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1、毕 业 论 文（设计）题 目 外源6-BA处理对采后绿芦笋 抗氧化能力的影响 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010年5月30 日摘要研究了不同浓度外源6-苄基腺嘌呤（6-BA）处理（200ppm、100ppm和50ppm）对采后绿芦笋在5贮藏期间维生素C、总酚含量和自由基清除能力的影响。结果表明，外源6-BA处理能有效抑制采后绿芦笋在贮藏期间维生素C和总酚含量的下降，促进对DPPH和超氧阴离子自由基的清除能力，并且100ppm 6-BA处理方法为最佳浓度。绿芦笋贮藏期间维生素C含量的变化分别与DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力呈显著正相关；总酚含量与超氧阴
2、离子自由基清除能力呈显著正相关，而与DPPH自由基清除能力相关性较低。以上结果表明，外源6-BA处理对采后绿芦笋抗氧化活性的影响主要与其抑制维生素C和酚类物质含量损失有关。关键词：绿芦笋；6-BA 维生素C；总酚；自由基清除能力；抗氧化能力目录引言.11 材料和方法.21.1 实验材料.21.1.1 实验原料.21.1.2 主要试剂.21.1.3 仪器和设备.21.2 实验方法.31.2.1 原料预处理.31.2.2 维生素C和总酚含量测定.31.2.3 DPPH自由基清除能力测定.31.2.4 超氧阴离子自由基清除能力测定.32 结果与分析.42.1 外源6-BA对绿芦笋维生素C和总酚含量的
3、影响.42.2 外源6-BA对绿芦笋DPPH和超氧阴离子自由基清除能力的影响.52.3 绿芦笋维生素C和总酚含量与自由基清除能力相关性分析.63 结论.7参考文献.8引言芦笋是指石刁柏嫩茎，因其嫩茎挺直，顶端鳞片紧包，形如石刁，枝叶展开酷似松柏针叶，故称石刁柏；又因其供食用的嫩茎，形似芦苇的嫩芽和竹笋，故中国已有很多人习惯将石刁柏称为芦笋。芦笋嫩茎是一种具有较高药用价值的营养蔬菜和保健食品，被誉为“十大名菜之一”。目前是销向欧美市场的高档蔬菜，被称为健康食品。神农本草经将芦笋列为“上品之上”1，仅次于人参，国际市场上享有“蔬菜之王”的美称。芦笋具有低糖、低脂肪、高蛋白和高纤维的营养特点，是世界
4、流行的大众蔬菜，其嫩茎食用，种子用作咖啡的替代品2。在中国和印度传统医药中，用其治疗肿瘤神经炎和关节炎、牙痛，还可利尿、缓泻，以及刺激毛发生长等3。现代研究表明，芦笋活性成分具有抗突变、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒、降血脂、抗疲劳等作用4。芦笋在食品、医药等领域具有广阔的应用前景，芦笋产品在国际市场需求量很大，研究和开发芦笋系列保健食品，市场前景十分广阔5。6-BA（6-苄基腺嘌呤）属于人工合成的细胞分裂素类化合物，对植物的生长发育与采后耐贮性有密切关系6。6-BA可作为植物组织体内自由基清除剂，具有降低植物组织内膜脂过氧化产物的积累，抑制叶绿素分解、有关蛋白质的降解，保持叶片鲜绿、延缓植物衰老的作
5、用7。张海娜等通过对小麦的试验研究发现，外源6-BA对叶片具有明显的延缓衰老的作用，主要通过延缓叶片衰老过程中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性下降，抑制丙二醛（MDA）的积累，保持膜完整性，从而减少超氧自由基和丙二醛的积累而造成对膜系统的伤害，维持细胞膜的完整性8。李华等采用不同浓度6-BA对鲜切绿芦笋贮藏期间品质变化及衰老的影响进行了研究9，但对外源6-BA对采后绿芦笋抗氧化能力的影响研究甚少。本实验通过不同浓度6-BA对采后绿芦笋抗氧化能力的影响进行研究，为6-BA在果蔬贮藏的应用上提供依据。1材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验原料芦笋购于浙江省新昌县境屏乡白湖畈
6、芦笋基地1.1.2 主要试剂表1.1 实验主要试剂一览表试剂名称规格出产厂家6-BAAR国药集团上海化学试剂有限公司2，6-二氯酚靛酚AR上海化学试剂有限公司草酸AR天津市永大化学试剂开发中心丙酮AR浙江中星化工试剂有限公司乙酸AR浙江中星化工试剂有限公司盐酸AR浙江中星化工试剂有限公司无水乙醇AR上海三鹰化学试剂有限公司邻苯三酚AR国药集团化学试剂有限公司DPPH（1，1-二苯基苦基苯肼）标准品美国sigma公司Follin(菲林试剂)进口美国sigma公司1.1.3 仪器与设备表1.2 实验主要仪器与设备一览表实验仪器或设备型号出产厂家分光光度计721上海棱光技术有限公司数显恒温水浴锅HH
7、-4常州国华电器有限公司电热鼓风干燥箱CS101恒达仪器厂台式高速离心机LG10-2.4A长沙英泰仪器有限公司高速冷冻离心机GL-20G-II杭州汇尔仪器设备有限公司电子精密天平PL203上海天平仪器厂1.2 实验方法1.2.1 原料预处理供试用的新鲜绿芦笋（Asparagus offwendis L），采自浙江省新昌县境屏乡白湖畈芦笋基地。新鲜绿芦笋采后立即运至实验室，低温5预冷24h。预冷后，挑选头部完整、无损伤、长短基本一致的新鲜绿芦笋进行外源6-BA处理。6-BA处理浓度分别为：200ppm、100ppm和50ppm，以0ppm为对照（CK），处理完毕的绿芦笋用塑料保鲜袋分装，每袋25
8、0g左右，置于51下贮藏，贮藏期间每隔2天测定以下指标。1.2.2 维生素C的测定采用2，6-二氯酚靛酚滴定法。称取样品4.0g，加5mL2%草酸研磨成浆，移入50mL容量瓶中。残渣再用2%草酸洗涤2-3次，一并转入容量瓶中，最后用1%草酸定容。吸取滤液5mL放入50mL锥形瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚溶液滴至粉红色，在15秒内不消失为止。1.2.3 总酚含量的测定称取样品1g，加入5mL 85%丙酮及少量石英砂研磨成浆，12000r离心20min。总酚含量测定采用Follin-酚法，取上清液0.2mg于含有1.8mg蒸馏水试管中，加入10mL Follin试剂和75g/L 碳酸钠8 mL
9、迅速摇匀，30水浴1h，在765nm下比色。1.2.4 DPPH自由基清除率测定称取样品2g，加入10mL 50%乙醇及少量石英砂研磨，12000r离心20min。取上清液0.1mL和120mol/L DPPH 1.9mL于试管中混匀，避光保温20min，在525nm下比色，计算清除率。清除率P可用下式计算:P= 1-（Ai- Aj）/ A0100%式中Ai=样品与DPPH反应后吸光植；Aj=样品的空白（样品0.1mL+1.9mL50%乙醇）；A0=加样的DPPH（0.1mL 50%乙醇+1.9mLDPPH）。1.2.5 超氧阴离子自由基清除率测定称取样品1g，加入5mL 80%丙酮及少量石英
10、砂研磨，12000r离心20min。取上清液1mL，0.1mol/L，pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL于试管中，加入1 mL EDTA溶液，2.4 mL 80%丙酮，摇匀， 25水浴10min，再加入100uL,9mmol/L邻苯三酚溶液，计时摇匀，准备反应3min后，加入50mg/ mL的抗坏血酸溶液50 uL终止反应。以Tris-HCl缓冲液作参比，在325nm处测定吸光值(Ai)，计算清除率，空白对照组以1mL试样溶剂代替样品（A0），样对用100uL0.01mol/L盐酸溶液代替邻苯三酚溶液（Aj），计算式同上。2 结果与分析2.1 外源6-BA对绿芦笋维生素C和总酚含量的
11、影响外源6-BA处理对绿芦笋维生素C和总酚含量的影响如图2.1所示。随贮藏时间延长，绿芦笋中维生素C含量都呈逐渐下降趋势。外源6-BA处理抑制采后绿芦笋维生素C下降，并且100 ppm处理组的绿芦笋维生素C含量与对照差异较明显。（图1A）。对照绿芦笋采后贮藏前2d，总酚含量增加，然后随着贮藏时间的延长而逐渐下降。外源6-BA处理绿芦笋总酚含量在整个贮藏期间有促进作用，且总酚含量要显著高于对照组。结果表明，外源6-BA处理抑制了绿芦笋中维生素C和酚类物质的损失。图2.1 外源6-BA处理对绿芦笋维生素C（A）和总酚（B）含量的影响图2.2 外源6-BA处理对绿芦笋DPPH（A）和超氧阴离子（B）
12、自由基清除能力影响2.2 外源6-BA对绿芦笋DPPH和超氧阴离子自由基清除能力的影响外源6-BA对芦笋自由基清除能力的影响如图2.2所示。随贮藏时间延长，绿芦笋对DPPH和超氧阴离子自由基的清除能力都呈逐渐下降趋势。外源6-BA处理抑制采后绿芦笋中自由基清除能力的丧失，并且100 ppm处理组的绿芦笋自由基清除能力与对照组差异较明显。图2.3 绿芦笋贮藏期间维生素C（A）和总酚（B）含量与DPPH和超氧阴离子自由基清除能力之间的相关性2.3 绿芦笋维生素C和总酚含量与自由基清除能力相关性分析绿芦笋维生素C和总酚含量与自由基清除能力相关性分析如图2.3所示。分析结果表明，绿芦笋维生素C含量的变
13、化分别与DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力呈显著正相关（R2=0.91和R2=0.80）；总酚含量与超氧阴离子自由基清除能力呈显著正相关（R2=0.17），而与DPPH自由基清除能力相关性较低（R2=0.02）。因此，我们认为外源6-BA处理对采后绿芦笋抗氧化活性的影响主要与其抑制维生素C和酚类物质含量损失有关。3 结论果蔬中具有抗氧化性的营养物质如维生素C、谷胱苷肽、酚类物质、花色苷等的抗氧化性来自于他们的氧化还原作用。富含酚类物质的果蔬表现出很强的抗氧化能力。本实验中，绿芦笋采后贮藏期间，维生素C和总酚含量呈下降趋势，外源6-BA处理抑制了维生素C和总酚含量的下降。维生素C含量与DP
14、PH自由基清除能力的相关性高于总酚含量与DPPH自由基清除能力，可能与6-BA处理显著抑制维生素C含量的下降有关。表明绿芦笋中的维生素C含量与其抗氧化活性密切相关。总酚含量与超氧阴离子自由基清除能力呈正相关，而与DPPH超氧阴离子自由基相关性不显著，这可能与对照绿芦笋贮藏前期总酚含量增加有关。果蔬中常见的一种抗氧化物质维生素C的抗氧化能力已有较多报道，但许多结果表明，维生素C对果实抗氧化能力的贡献较小。我们的试验表明，绿芦笋中维生素C的含量与DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力之间显著正相关，这说明绿芦笋中维生素C含量对绿芦笋总抗氧化能力的贡献较大。绿芦笋在5贮藏8天期间，外源6-BA处理
15、能够显著增加维生素C和酚类物质含量，增加了绿芦笋的抗氧化能力，且6-BA浓度为100ppm时作用能力最强。这些结果表明，外源6-BA对绿芦笋中维生素C、酚类物质和抗氧化能力的影响与绿芦笋的品种、处理浓度和贮藏条件有关。本研究发现，外源6-BA处理能够显著增加维生素C和酚类物质含量，同时对照绿芦笋贮藏前期总酚含量的显著增加。这表明，外源6-BA可能是通过促进绿芦笋中维生素C和酚类物质的代谢来增加绿芦笋的抗氧化水平和营养价值。6-BA作为一种保绿剂，具有高效、安全和环境友好的优越性。其属于人工合成的细胞分裂素类化合物，对人体无毒害、对环境无污染的果蔬贮前处理手段。其用量极少，对果蔬的成本几乎不影响
16、。由于6-BA可直接清除植物体内自由基，减轻细胞原生质膜受到伤害的程度，延缓植物衰老，被广泛应用在果蔬的保鲜贮藏中。因此，6-BA处理在果蔬采后贮藏保鲜中有着广泛的应用前景。参考文献1 叶春勇, 林媚. 芦笋营养成分分析研究J. 中国果菜, 2005, (2): 37-38.2 周利亘, 王春辉, 王君虹. 芦笋的活性成分及其生物学功能J. 安徽农学通报, 2006, 12 (2): 23-25.3 席屿芳, 余挺, 潘旭芳等. 芦笋保鲜技术研究J. 浙江农业学报, 1988, 10 (5): 259-263.4 陈泉生, 马飞, 杨峰等. 出口保鲜绿芦笋加工工艺J. 上海蔬菜, 2002,
17、(3): 10-11.5 赵丛枝, 张子德, 梁磊. 芦笋采后生理及贮藏技术研究进展J. 保鲜与加工, 2004, (2): 4-6.6 何生根, 张伟锋, 张丽娟. 6-BA对月季切花保鲜作用的研究J. 仲恺农业技术学院学报, 1997, 10 (1): 56-61.7 汪峰, 郑永华. 6-BA和热处理对食荚豌豆贮藏品质的影响J. 食品科学, 2004, 25 (11): 314-317.8 张海娜, 李存东, 肖凯. 外源细胞分裂素调控小麦生长及衰老特性的生理机制J. 华北农学报, 2007, 22 (5): 1-4. 9 李华, 张子德, 刘孟纯等. 不同浓度6-BA处理对鲜切绿芦笋保鲜效果的影响J. 保鲜与加工, 2008, 8 (1): 16-20.
