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1、药物分析 总结气体生成反应：含硫药物经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体（硫喷妥）；碘蒸气；氨气；乙酸乙酯香味.光谱鉴别法：紫外光谱、红外光谱、近红外光谱、原子吸收、核核磁共振（NMR）色谱鉴别法：薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（FC）、质谱（MS） 生物学法 X射线粉末衍射法第一章 杂质检查（Test for purity）药物的杂质（purity）是指药物中存在的无治疗作用或影响药物稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。药物纯度（purities of drugs)：指药物的纯净程度。主要从用药的安全、有效和稳定性方面考虑。化学试剂中的杂质是指能够引起对化学使用目的
2、有影响的物质。药政管理部门规定，不能以一般化学药品及化学试剂代替药用规格，更不能把化学试剂当作药品直接应用于临床治疗。检查项下包括有效性、均一性、纯度要求与安全性四个方面。杂质的来源：生产过程中引入；贮藏过程中产生杂质的种类:按来源分为一般杂质和特殊杂质：一般杂质：指在自然界中分布广泛，在多种药物的生成和储藏过程中容易引入的杂质。特殊杂质：指在特定药物的生成和储藏过程中引入的杂质，这类杂质随药物的不同而不同。按毒性分为信号杂质和有害杂质：毒性杂质：如重金属、砷盐。信号杂质：一般无毒，但其含量的多少反映出药物的纯度情况，如果药物中信号杂质含量过多，提示该药的生产工艺或生产控制有问题，如氯化物、硫
3、酸盐。按理化性质分为无机杂质、有机杂质及残留溶剂 杂质限量杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。限量检查（Limit test）：药物中的杂质在不影响疗效和不发生毒性的原则下允许有一定限量。 通常不测定其准确含量，只检查杂质的量是否超过限量，所以称为杂质的限量检查。 药物的杂质检查法：按操作方法分为对照法（限量检查法）、.灵敏度法、比较法。对照法：指取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过限量。（比色、比浊、比色斑）灵敏度法：指在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下，不得有正反应
4、出现，从而判断供试品中杂质是否符合限量规定。比较法：取供试品一定量依法检查，测得待检杂质的参数（如吸收度）与规定的限量比较，不得更大。一般杂质检查：酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、硫化物、硒、氟、氰化物、铁盐、重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、干燥失重、炽灼残渣、水分测定、溶液颜色与澄清度以及有机溶剂残留量等。 遵循平行操作原则氯化物检查法：原理：对照法。 利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银胶体微粒而显白色混浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊程度比较，浊度不得更大。 Cl-+Ag+AgCl(白)注意事项： 氯化物浓度以50ml溶液中含5080g的Cl为宜，因
5、为此时浊度梯度好。 加硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的干扰，加速AgCl的生成并产生较好的乳光浑浊 酸度要求：50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜 供试品溶液有颜色时的处理方法：内消色法： 供试品溶液显碱性的处理方法：先中和成中性后再检查（加硝酸） 供试品溶液不澄清的处理方法：过滤，之前要用硝酸冲洗滤纸。硫酸盐检查法原理：药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色混浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的混浊比较，浊度不得更大。 注意事项：盐酸可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成，酸度过大可使硫酸钡溶解，以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。铁盐检查法方
6、法：硫氰酸盐法 Ch.P、USP；巯基醋酸法 BP原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵溶液作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。 Fe3+ +nSCN-Fe(SCN)n3-n (n=16)注意事项： 准铁贮备液的配制：用硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O配制成标准铁储备液，并加入硫酸防止铁盐水解，使易于保存。 铁盐的最适检测浓度范围：目视比色时以50ml溶液中含有10-50gFe3+为宜，所显色泽梯度明显。 应在盐酸酸性条件下进行：加入盐酸可防止Fe3+水解，并避免弱酸盐如醋酸盐、磷酸盐、砷酸盐等的干扰 入过硫酸胺的目的：为了氧化Fe2+为Fe3，同
7、时可防止由于光照使硫氰酸铁还原或分解褪色。 2 Fe2（NH4）2S2O8 2 Fe3（NH4）2SO4SO42 为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇或异戊醇提取后，分取醇层比色。例：枸橼酸钠中铁盐的检查 硫氰酸铵过量：增加配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除Cl-、PO43-、SO42-、枸橼酸跟离子等与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。重金属检查法：重金属：系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。如银、铅、汞、铜、铬、镉、铋、锑、砷、锌、钴、镍等。以铅的限量表示重金属限度。第一法：硫代乙酰胺法；第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法；第三法：硫化钠法；第四法：
8、微孔滤膜法 第一法 硫代乙酰胺法适用范围：溶于水、稀酸和乙醇的药物。此法最常用。原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件（醋酸盐缓冲液pH3.5）下水解产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液(PbNO3)经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深（比色）。CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S; Pb2+H2SPbS+2H+ (Ph3.5)注意事项： 本反应的pH对显色有很大影响。用醋酸盐缓冲溶液控制pH值在33.5，硫化铅的沉淀比较完全。酸度增大，呈色变浅甚至不呈色，强酸处理过的溶液必须先用NH3H2O调pH值至中性。 试品溶液有颜色的处理：内消色法、外消色
9、法外消色法：在对照管溶液中滴加少量稀焦糖溶液（取蔗糖用小火加热后，再混悬于水中做成。随加热温度与时间的不同，其水溶液呈黄至红棕色。根据供试液颜色，适当掌握蔗糖的加热程度），使之与供试品溶液管的颜色一致。 供试品中若有微量高铁盐存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色。可在两管中加入抗坏血酸0.51.0g，使Fe3+还原为Fe2，再依法检查。第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法适用范围：适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。注意事项： 温度对重金属检查影响较大，温度越高重金属损失越多，应控制炽灼温度 500-600（高温易挥发）. 残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸
10、可氧化硫化氢析出硫，影响比色。 含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿，因可腐蚀瓷坩埚带入重金属。第三法 硫化钠法适用范围：适用溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。原理：在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2+生成PbS微粒的混悬液，与一定量的标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，不得更深（比色）。第四法 微孔滤膜法 适用范围：适用于重金属限度低（含重金属杂质2-5g）的药物。原理：同第一法砷盐检查法 As 注意点：药物中的砷盐多由生产过程中使用的无机试剂引入 砷盐检查法的常用方法：古蔡氏法 Ch.P、BP、JP；二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag（DD
11、C）法）Ch.P、USP；白田道夫法 Ch.P古蔡氏法（Gutzeit）原理：利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液（临用新配，2ml）在同样条件下生成的砷斑比较，判定药物中砷盐的限量。Zn+HClH2+AsO32+(As3+)AsH3 As3+ +3Zn +3H+ 3Zn2+ + AsH3 AsO33 +3Zn +9H+3Zn2+ +3H2O + AsH3 AsO43 +4Zn+11H+4Zn2+ +4H2O+ AsH3 AsH3 + 3HgBr23HBr + As(HgBr)3 (黄色) 2As(
12、HgBr)3+ AsH33AsH(HgBr)2 (棕色) As(HgBr)3+ AsH33HBr + As2Hg3 (棕黑色)碘化钾和氯化亚锡的作用 碘化钾还原 As5+为 As3+及 Fe3+还原为 Fe2+，加快反应速度。 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子有利于生成砷化氢的反应不断进行。（交替还原作用）AsO43+2I-+H+AsO33-+I2+H2OAsO43+Sn2+H+ AsO33-+Sn4+H2OI2+ Sn2+2I-+ Sn4+4I-+Zn2+ZnI4 氯化亚锡及碘化钾可抑制锑化氢生成，防止锑斑形成干扰。在实验条件下，
13、100gSb存在不干扰测定。 氯化亚锡与锌作用生成锌锡齐，在锌表面形成形成局部电池，使氢气均匀而连续地发生。 SnCl2 + Zn Zn-Sn醋酸铅棉花作用：吸收硫化氢气体，也可控制砷化氢以是以速度通过。锌粒及供试品可能含有少量硫化物中国药典（2005 年版）附录规定用醋酸铅棉花60mg，装管高度约60mm80mm。HgBr2试纸：与砷化氢作用较氯化汞试纸灵敏，但其砷斑不稳定，在反应中应保持干燥及避光，且立即与标准品比较。其他：供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等，加硝酸处理，过量的硝酸及产生的氮的氧化物应蒸干除尽。枸橼酸铁铵中砷盐的检查供试品若为铁盐，需加酸性氯化亚锡，将高铁离子还原为低
14、铁离子后再检查。共价键结合的砷化物：先要有机破坏，破坏方法有碱破坏法或酸破坏法，ChP 常采用前者。药物为锑盐时，产生灰色锑斑，干扰比色，应改用白田道夫法。原理：氯化亚锡在盐酸中能将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色进行比较，即可判断供试品的含砷量。 2As3+ + 2SnCl + 6HCl2As + 2SnCl4 + 6H+用于有锑（灰色锑斑）干扰时的补充法。优点：不受锑干扰. 缺点：灵敏度低，若加入少量HgC12,灵敏度提高 炽灼残留检查法（700oC800oC）恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在 0.3mg 以下。炽灼残渣：系指有机药物经炭化或挥发性
15、无机药物加热分解后，高温炽灼，所残生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。 此法用于控制有机药物经炭化或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质。炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30分钟后进行。干燥失重测定法干燥失重：系指药物在规定的条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示。干燥失重主要检查药物中的水分及其他挥发性物质。干燥至恒重的第二次及以后各次称重应在规定的条件下继续干燥1小时后进行1. 常压干燥法：适用于受热较稳定的药物。与干燥至恒重的称量瓶中，105oC下干燥平铺于称量瓶，符合厚度要求，放冷再称重；含较多结晶水的药物，105oC不易除去结晶水，可提高温度（硫酸吗啡）；某些药物中含有较大量的水分，熔点又
16、低，可先低温加热，在慢慢加热至105oC干燥至恒重（硫代硫酸钠）；某些易吸潮或受热发生相变而达不到恒重的药物，可采用一定温度下、干燥一定时间所减失的重量代表干燥失重。2. 减压干燥法与恒温减压干燥法：适用于熔点低或受热分解的供试品。木糖醇3. 干燥剂干燥法：适用于受热易分解或易生华的供试品。常用干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷.4. 热分析法：残留溶剂测定法:ICH 按有机溶剂毒性的程度分为三类：一类:应尽量避免使用；二类:应限制使用；三类:推荐使用氯仿（二类）、甲醇（二类）、吡啶（二类）、苯（一类）、乙酸乙酯（三类）气相色谱法检查有机溶剂：第一法：溶液直接进样法（填充柱）； 第二法：顶空进样法
17、（毛细管柱）水分测定法 药品中的水分包括结晶水和吸附水。 中国药典(2005年版)采用费休氏法和甲苯法测定药物中的水分，尤以费休法为主。 利用I2氧化SO2为SO3时，需要一定量的水分参加反应。第二章 药物定量分析与分析方法验证一、定量分析样品的前处理方法前处理对象：1.含卤素（F，Cl，Br，I） ；2.含金属（Ca，Fe，Hg，Zn） ；3.Se，P，S不惊又急破坏的分析方法：直接测定法；经水解后测定法；经氧化还原后测定法直接测定法：配位滴定法、氧化还原滴定法适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。配位滴定法：EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二
18、钠)滴定二价金属离子（如葡萄糖酸钙）氧化还原滴定法：如富马酸亚铁（用硫酸铈滴定）、葡萄糖酸锑纳（碘化钾还原，再用硫代硫酸钠滴定）经水解后测定法碱水解后测定法：如三氯叔丁醇；酸水解后测定法：如硬脂酸镁、十一烯酸西醇经还原分解后测定：如泛影酸（加氢氧化钠溶液 30ml与锌粉1.0g，加热回流30分钟. 用硝酸银滴定液滴定）经有机破坏的分析方法：湿法破坏；干法破坏湿法破坏：硝酸-高氯酸法、硫酸-硝酸法、硫酸-硫酸盐法（凯氏定氮法）、硝酸-高锰酸钾法凯氏定氮法：是最常用来测定氮含量的一种方法。 步骤：消解；蒸馏；吸收及滴定。 用凯氏烧瓶；需空白试验。 适用于测定有氨基或酰胺结构的药物。干法破坏：高温炽
19、灼法；氧瓶燃烧法适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。二、定量分析方法特点容量分析法（滴定法）特点：所用仪器廉价易得，操作简便、快捷，方法耐用性高，测定结果准确，通常RSD0.2%；专属性差，一般使用于含量较高的试样的分析。对化学反应的要求： 反应定量完成，无副反应；反应完全（反应完全程度应达 99.9以上 反应速度快；有比较简便的方法确定反应终点 滴定方式：直接滴定法、返滴定法（如：固体碳酸钙、阿司匹林）、置换滴定法、间接滴定法（手续较繁，引入误差的机会也较多）滴定度：每 1ml 规定浓度的滴定液所相当的被测药
20、物的重量。 注：T 单位为mg/ml (Ch.P) 原料药含量：以%表示，凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%光谱分析法：紫外-可见分光光度法（200nm760nm)特点： 1) 灵敏度高，可达 10-4g/ml10-7g/ml 2) 准确度高，RSD（%）为 2%5% 3) 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广 定量依据：根据 Lambert-Beer 定律 A=lg(l/T)=ECL百分吸收系数 ，其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），溶液厚度为1cm时的吸光度值。定量测定 ：对照品比较法、吸收系数法、计算分光光度法、比色法. 要求：A在0.3-0.7之
21、间误差较小。单组分的定量方法：吸光系数法；校正曲线法；对照法 多组分的定量方法：双波长法；导数光谱法；摺合光谱法仪器校正和检定：吸光度的准确度，可用重铬酸钾的硫酸溶液检定；杂散光的检查；对溶剂的要求：以空气为空白，220-240nm，A0.40；241-250nm，A0.20；251-300nm，A0.10；300nm以上，A0.05。荧光分光光度法特点： 1) 灵敏度高，可达 10-10g/ml 10-12g/ml 2) 在低浓度进行测定，防止 F与 C不成正比及自熄灭作用(浓度过高时) 3) 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减，灵敏度高，但干扰因素多。 4) 制备荧光衍生物，可
22、提高其灵敏度和选择性。 5) 用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。 干扰因素的排除：溶剂（做空白检查）；溶液（充惰性气体排氧、pH值、试剂纯度）；玻璃仪器（干净）；温度（保持一致）方法：对照品比较法计算： 线性较窄，（RX-RXb)/(Rr-Rrb)应在0.502.0色谱分析法： 分离分析混合物的最有力手段。方法分类：按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC，HPLC。 特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛HPLC 法：对仪器的一般要求：色谱柱填充剂：硅胶和化学键建和硅胶（十八烷基硅烷键合硅胶常用、还有辛基硅烷键合硅胶、氰基或氨
23、基硅烷键合硅胶）系统适用性试验：理论板数（n）、分离度（R）、重复性（RSD）和拖尾因子（T）a) 理论板数（n）：色谱柱的分离效率（简称柱效）。如测得n低于规定，应改变柱长或载体性能、重填色谱柱等以求达到。 b) 分离度（R）：相邻两峰的分离程度。 除另有规定外，R1.5 c) 重复性（RSD）：15或33：RSD2.0% d) 拖尾因子（T）：除另有规定外，T 应 0.95 1.05测定方法内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 ：优点：准确外标法测定供试品中主成分含量（外标一点法）：要求：进样量准确、操作条件稳定； 缺点：不易控制进样量，宜用定量环。GC 法色谱图：30分钟内记录完毕测定
24、法：除HPLC项下的两种方法，亦可用标准溶液加入法进样：手工方式进样，用内标法；自动进样，也可用外标法；顶空进样，用标准溶液加入法（以此法结果为准）三、药品质量标准分析方法验证八大验证内容：精密度、准确度、检测限、定量限、选择性、线性、范围、耐用性分析方法效能指标的具体应用效能指标鉴别杂质测定含量测定及溶出量测定定量限度准确度精密度专属性检测限定量限线性与范围耐用性四、生物样品分析方法及基本要求的分析样品的种类、采集和贮藏常用样品有血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液血液分类：血浆(plasma)(加抗凝剂，离心，取上清液) +血细胞=全血；血清(serum)(采血后 0.5-1h,离心,取上
25、清液) +纤维蛋白=全血；全血(whole blood)(加抗凝剂)保存：血样采集后应及时分离血浆或血清，最好马上分析； 短期保存时应置于冰箱冷藏室（4）中； 长期保存时应置于冰箱冷冻室（-20）中。 尿液（urine）采集：为自然尿：随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿和时间尿（测尿药浓度时）。保存：采集后应立即测定 ；不能立即测定时，应加入防腐剂(如甲苯、三氯甲烷、浓盐酸等)置冰箱中保存； ；保存时间为 2436h，可置冰箱冷藏室（4）中；长时间保存应冷冻（-20）。唾液（saliva ）采集：在安静状态下进行，一般在漱口后 15min收集，采集后立即测量其除去泡沫部分的体积。放置后分为泡沫部分、
26、透明部分及灰乳白色沉淀部分三层，离心后取上清液供药物浓度测定。保存：采集后应在4以下保存；分析无影响则可用碱处理唾液；解冻后充分搅匀后再使用。生物样品分析前处理技术血样、组织（去蛋白）、唾液（去除黏蛋白）、尿液（缀合物水解）去除蛋白质：(1) 加入与水相混溶的有机溶剂（甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、丙醇、四氢呋喃）。 原理：可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。可除去90%蛋白(2) 加入中性盐，如（NH4)2SO4，Na2SO4等。原理：离子强度发生变化，脱水。可除去90%蛋白(3) 加入强酸（10%三氯乙酸、6%高氯酸等）pH值低于蛋白质等电点pH
27、 时，与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。可除去90%蛋白(4) 加入Zn2+、Cu2+，pH值高于蛋白质等电点 pH时，与蛋白质阴离子形成不溶性盐而沉淀。 (5) 酶解法（蛋白水解酶枯草菌溶素）使组织酶解，释放出药物，不会发生乳化，对与蛋白结合牢固的药物可显著改善回收率。碱不稳定药物不宜用缀合物的水解：酸水解、酶水解有机破坏分离、纯化与浓集：（1）液-液萃取（LLE）（2）液-固萃取（LSE）：即一种柱色谱分离方法（3）浓集：末次萃取时加入萃取量尽量减少；挥去萃取溶剂法（氮气吹干或减压法）；柱切换HPLC 法化学衍生化第五章 巴比妥类药物的分析基本结构通式：巴比妥（Barbital）苯巴比妥（
28、Phenobarbital）硫喷妥钠（Thiopental sodium）甲苯巴比妥（Methylphenobarbital）R1： -C2H5R2： -C6H51位：-CH31. 环状母核部分：环状丙二酰脲结构决定巴比妥类药物的共性，区别其它类药物。 2. 取代基部分：区别各种巴比妥类药物。性质物理性质1、白色结晶或结晶性粉末，具有一定熔点。 2、在空气中较稳定，加热多升华。 3、含硫巴比妥类药物有特臭 4、游离巴比妥类药物难溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水而难溶于有机溶剂。化学性质1、弱酸性与强碱成盐 有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生电
29、离（pKa：7.38.4）。2、水解反应具有酰亚胺结构与碱液共沸NH3 可用于异戊巴比妥和巴比妥的鉴别试验；在室温和pH10以下水解较慢，pH11以上随着碱度的增加水解速度加快（宜做成粉针剂）。3、与重金属离子反应（专属性不强）含有丙二酰脲或酰亚胺（如磺胺类），在合适PH值，可与某些金属离子如Ag+、Cu2+、Co2+、Hg+等反应呈色或产生有色沉淀。（1）与银盐的反应：在碳酸钠溶液中，加硝酸银，先生成的一银盐可溶，过量生成二银盐白色沉淀。（2）与铜盐的反应：巴比妥类显紫堇色或生成紫色；含硫巴比妥类呈绿色。（3）与钴盐的反应：显紫堇色。条件：无水甲醇、乙醇；钴盐为醋酸盐、硝酸钴或氧化钴；异丙胺
30、（4）与汞盐的反应：硝酸汞或氯化汞试液，白色汞盐沉淀能溶于氨试液中。 4、与香草醛的反应：，加乙醇，先变为紫色然后变为兰色。5、紫外吸收光谱特征：与电离程度有关。在不同pH溶液的巴比妥类药物，可用UV特征鉴别该类药物。5,5-取代的巴比妥类药物：在酸性溶液中，因不电离，几乎无紫外吸收。 在 pH10 的碱性溶液中，发生一级电离，于240nm 波长处有最大吸收。 在 pH13 的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至255nm 波长处1,5,5-取代的巴比妥类药物：在酸性溶液中，因不电离，几乎无紫外吸收。 在 pH10 的碱性溶液中，发生一级电离，于240nm 波长处有最大吸收。 在 pH1
31、3 的强碱性溶液中，最大吸收仍在 240nm 波长处。 硫代巴比妥类药物：在酸性或碱性结构中，均有明显的紫外吸收。 6、色谱行为特征：用于鉴别7、显微结晶：巴比妥：长方形；苯巴比妥：球形花瓣状。 ！其他巴比妥类不能形成结晶，可区别巴比妥铜吡啶试液十字形紫色结晶； 苯巴比妥铜吡啶试液细小不规则或似菱形的浅紫色结晶鉴别试验丙二酰脲类的鉴别试验：银盐反应、铜盐反应。熔点测定：方法：直接测定熔点；利用巴比妥类药物的钠盐易溶于水，而其游离酸难溶于水的性质。在钠盐中加酸使巴比妥类游离析出，过滤、干燥后测定熔点； 制备衍生物后测熔点。应用：鉴别苯巴比妥及其钠盐，异戊巴比妥及其钠盐，司可巴比妥钠，注射用硫喷妥
32、钠.特殊取代基或元素的鉴别反应（呈色或沉淀反应）1、不饱和取代基的反应 具有还原性，如：司可巴比妥钠。（1）与碘或溴试液反应：亲电加成反应，使碘试液的棕黄色消失。 （2）与高锰酸钾的反应：氧化反应，使紫色的高锰酸钾转变为棕色的二氧化锰。 2、芳环取代基反应 如苯巴比妥及其钠盐（1）硝化反应：生成黄色硝基化合物。（2）与硫酸-亚硝酸钠反应：生成橙黄色产物，并随即变成橙红色。 （3）与甲醛-硫酸反应：生成玫瑰红色产物，可用于区别苯巴比妥与其他巴比妥类药物3、硫元素的反应 ：红外反光光度法特殊杂质检查苯巴比妥的特殊杂质：1.酸度(苯丙基二酰脲）；2.溶液的澄清度(酸性杂质）；3.中性或碱性物质司可巴
33、比妥钠的特殊杂质： 1.溶液的澄清度；2.中性或碱性物质（提取重量法）含量测定银量法应用：苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及制剂原理：在碳酸钠溶液中巴比妥类与硝酸银首先生成可溶性一银盐，继续滴定，稍过量的银离子就和巴比妥类的一银盐形成难溶性二银盐沉淀，使溶液变浑浊而指示终点。方法的改进： 以甲醇及 3%无水碳酸钠替代丙酮为溶剂。 电位法替代目视法指示终点克服温度变化影响和目视法的主观性倾向。 注意事项：（1）反应摩尔比（11）；（2）AgNO3滴定液应新鲜配制；（3）银电极使用前应进行处理；（4）无水碳酸钠应新配，因碳酸钠要吸收二氧化碳，导致测定时溶液碱度不足。特点：操作简便、专属性强，
34、杂质不与硝酸银反应，但受温度影响大，近终点时反应较慢，难以观察沉淀出现，二银盐也有一定溶解性溴量法应用：5位含不饱和双键的巴比妥类药物，如司可巴比妥钠及其胶囊的鉴别及含量测定原理：针对结构中的双键特征，与溴定量的发生加成反应。酸碱滴定法应用：巴比妥类原料药及其制剂的分析。原理：巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标准碱直接滴定。 方法：1）在水-醇混合溶剂中的滴定法：本类药物在水中的溶解度较小，生成的弱酸盐易于水解可影响滴定终点。麝草酚酞为指示剂，显淡蓝色时为终点。可采用电位法指示终点。需空白对照。2）在胶束水溶液中的滴定方法：在有机表面活性剂的胶束水溶液中进行滴定,用指示剂或电位法指示终点.
35、 此法简便，优于1）法。3）非水溶液滴定法：巴比妥类药物在非水溶液中酸性增强，用碱性标准液滴定时终点较为明显。 常用麝香草酚蓝为指示剂或电位法指示终点紫外分光光度法1）直接紫外分光光度法：硫喷妥钠注射液2）差示分光光度法（A法）3）经提取分离后的紫外分光光度法：酸化提取碱化测定其他：HPLC法、电泳法、气相色谱-质谱法（GC-MC法）第六章 芳酸类药物的分析主要药物： 苯甲酸类；水杨酸类；其他芳酸及其酯类药物。 分子结构的共性： 既有苯环，又有羧基。 苯甲酸类苯甲酸及其钠盐 羟苯乙酯丙磺舒甲芬那酸水杨酸类水扬酸（SA）阿司匹林二氟尼柳对氨基水杨酸钠双水杨酯贝诺酯其他芳酸类布洛芬氯贝丁酯性质苯甲
36、酸类酸性：酸性比水杨酸类弱（苯甲酸钠采用双向滴定法测定含量）光谱特征：具有苯环和特征官能团，均具有紫外和红外特征吸收光谱与三氯化铁反应，生成赭色沉淀水杨酸类基本结构：邻羟基苯甲酸酸性：水杨酸类药物的酸性受苯环、羧基和取代基的影响（水杨酸可形成分子内氢键，加强酸性），一般属于中等强度的酸或弱酸，酸性比苯甲酸强。取代基特征反应：游离或潜在芳伯胺基发生重氮化反应；酚羟基与三价铁显色反应光谱特征：分子结构中具有苯环和特征官能团，均具有紫外和红外特征吸收光谱 。水解：芳酸酯类药物易水解而分解。其他芳酸类酸性：相对较弱氯贝丁酯：油状液体，遇光不稳定；易水解（两步滴定法测含量，羟肟酸铁反应鉴别）具有特征紫外
37、和红外吸收光谱：布洛芬和氯贝丁酯鉴别与铁盐的反应水杨酸及其盐：中性或弱酸性条件，紫色。阿司匹林(ASA)：水解后，紫堇色；二氟尼柳：乙醇溶解，深紫色；对氨基水杨酸钠：加稀盐酸，紫红色；双水杨酯：紫色；贝诺酯：加NaOH水解，加酸，紫堇色。苯甲酸盐：中性或碱性溶液，赭色丙磺舒：加碱水解，调pH5,06.0，黄色羟肟酸铁反应：氯贝丁酯：乙醚数滴，加盐酸羟胺和氢氧化钾，加热，加三氯化铁，紫色布洛芬：无水乙醇溶液，加高氯酸羟胺及N,N-双己基羧二亚胺（DCC），加热，加高氯酸铁，紫色。重氮化-偶合反应： 贝诺酯、对氨基水杨酸钠芳伯氨基：酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性-萘酚
38、偶合产生橙红色。 氧化反应甲芬那酸：硫酸溶液，加热显黄色，并有绿色荧光；加重铬酸钾试液显深蓝色，随即变成棕绿色。水解反应阿司匹林：与NaCO3加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则析出白色水杨酸，并产生醋酸的臭气。双水杨酯：加碱煮沸，水解生成水杨酸盐。分解产物的反应：苯甲酸盐分解成苯甲酸升华物；含硫药物（丙磺舒），发生SO2特臭，碱吸收，氧化，显硫酸盐反应其他：紫外吸收光谱、红外吸收光谱（水杨酸、对氨基水杨酸钠、贝诺酯）、TLC（制剂）、HPLC法检查阿司匹林：炽灼残渣、重金属、溶液的澄清度（未反应的酚类、副反应生成的苯酚及醋酸苯酚、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯）、水杨酸（乙酰化不
39、完全或贮藏中水解，高铁盐反应或HPLC法，限量0.1%）、易炭化物、其他检查（杂质乙酰水杨酸酐、乙酰水杨酸水杨酸等）对氨基水杨酸钠：间氨基酚（生产不完全或贮藏时分解，易溶于乙醚，对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，用双向滴定法或HPLC法检查），甲芬那酸：铜（生产催化剂，原子吸收分光光度法测定）、有关物质（HPLC法） 氯贝丁酯：氯酚、挥发性杂质含量测定酸碱滴定法直接滴定法ASA：乙醇（对酚酞显酸性，用前中和至对酚酞显中性）作溶剂，强碱滴定，酚酞作指示剂；本法缺乏专属性。苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、布洛芬的测定可同ASA。水解后剩余滴定法（反滴法）ASA: 定量加入过量的氢氧化钠滴定液，
40、加热使酯水解，剩余的碱用酸溶液回滴。碱液受热易吸收CO2，生成碳酸盐，酸消耗减少，结果会偏高，需作空白试验两步滴定法ASA：片剂中含有酒石酸或枸橼酸作稳定剂，且制备工艺中可产生水杨酸与醋酸。中性乙醇溶解中和（中和了各游离酸，ASA转为了钠盐）水解（加热）硫酸回滴测定氯贝丁酯：中和水解（加热）盐酸回滴测定亚硝酸钠法：对氨基水杨酸钠及其制剂（还可用溴量法），含芳伯胺基，在盐酸条件下与亚硝酸钠定量地发生重氮化反应。永停法指示终点双相滴定法：苯甲酸钠，滴定过程中析出的游离酸不溶于水，使滴定终点的 pH 值突跃不明显，不利于终点的正确判断。 精密称定1.5g分液漏斗水20ml乙醚50ml甲基橙2dHCl
41、滴定至水层显橙红色分取水层（乙醚层5ml水洗）锥形瓶乙醚20mlHCl滴定至水层持续显橙红色。 乙醚（防止反应产物的干扰）UC法、HPLC法第七章 芳香胺类药物的分析分类：芳胺（酰胺类；对氨基苯甲酸酯类）、芳烃胺（苯乙胺类；苯丙胺类）对氨基苯甲酸酯类基本结构苯佐卡因盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因胺盐酸丁卡因酰胺类基本结构对乙酰基酚醋氨苯砜盐酸利多卡因盐酸布比卡因苯乙胺类拟肾上腺素类肾上腺素去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素盐酸去氧肾上腺素盐酸异丙肾上腺素硫酸沙丁胺醇盐酸氨溴索盐酸克仑特罗盐酸麻黄碱盐酸伪麻黄碱苯丙胺类基本结构马来酸依那普利性质对氨基苯甲酸酯类1）芳伯氨基特性：，可产生重氮化-偶合反应；
42、可与芳醛缩合成Schiff碱反应；易氧化变色等。2）水解特性：含酯键或酰胺键，快慢受光、热、碱的影响3）弱碱性：能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，只能在非水溶剂中滴定4）其他特性：光谱特征（UV、IR）；游离碱多为碱性油状液体或是低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂；其盐均为白色结晶性粉末，具一定熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。酰胺类1）水解后显芳伯胺基特性：（空间位阻）影响：对乙酰氨基酚(扑热息痛)利多卡因、布比卡因、罗哌卡因、妥卡尼2）水解产物易酯化：乙酰氨基酚和醋氨苯砜，水解醋酸醋酸乙酯的香味3）酚羟基特性：对乙酰氨基酚可与 FeCl3反应4）弱碱性：具脂烃胺侧链且为叔胺氮原子，显弱碱
43、性，可成盐；盐酸利多卡因、盐酸布比卡因、盐酸罗哌卡因及盐酸妥卡尼可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，其中三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具一定熔点。对乙酰氨基酚和醋氨苯砜不具此侧链，无此类反应。5）与重金属离子反应：盐酸利多卡因、盐酸布比卡因、盐酸罗哌卡因及盐酸妥卡尼上的氮可可在水溶液中与Cu2+或Co2+络合，生成有色的配位化合物沉淀，可溶于氯仿显色苯乙胺类1）弱碱性：有烃氨基侧链，其氮为仲胺氮，故显弱碱性。游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。2）光学活性：药物分子结构中多数具有手性碳原子，具有旋光性。分析时应予以注意。3）酚羟基特性：多具有邻苯二酚（或苯酚）结构，可与重金属离子络合呈色，露
44、置空气中或遇光、热易氧化，色渐变深，在碱性溶液中更易变色。4）其他：盐酸克仑特罗和盐酸氨溴索有芳伯胺基；均有有紫外、红外吸收。苯丙胺类1）酸碱性：结构中含一个或两个羧基显中等酸性（用于水溶液或水-醇混合溶液酸碱滴定）具烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性（非水滴定）2）脯氨酸衍生物； 3）光学活性； 4）水解特性：酯键。鉴别芳胺类1重氮化-偶合反应 具有(潜在)芳伯氨基的药物，可在酸性（盐酸、硫酸）试液中与亚硝酸钠试液作用，发生重氮化反应，生成的重氮盐再与碱性-萘酚偶合生成橙红色偶氮化合物。直接反应 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺 水解后反应 对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯（水杨酸类） 盐酸丁卡因有芳香仲胺可发生亚硝酸钠反应生成N-亚硝基化合物的白色。 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因（橙黄到猩红色）；对乙酰氨基酚（红色）2三氯化铁反应; 对乙酰氨基酚，显蓝紫色3与重金属离子反应盐酸利多卡因：碳酸钠试液+硫酸铜蓝紫色配位化合物，转入氯仿中显黄色。盐酸利多卡因：酸性溶液+氯化钴试液亮绿色钴盐。 盐酸利多卡因：水溶液+硝酸酸+硝酸汞试液煮沸黄色；对氨基苯甲酸酯类：显红色或橙黄
