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1、鲜精低温保存技术的研究与应用前景赵玉民鲍志鸿马惠海 杨德新巩俊明李峰摘要04条件下，经过技术处理的绵羊精子存活时间可达167小时，在77小时之内活率可达70%，应为可授配临界时间。建立以低温保存鲜精（0-4保存）人工授精技术为主体的肉羊繁殖改良技术体系，是提高优秀种羊利用率的有效方式。关键词 精液低温保存存活时间 随着牧业产业化的发展，生产优质肉羊是适应国际和国内市场的需要，而我国的肉羊业起步较晚，目前还没有形成肉羊的繁育体系，品种多为地方品种，产肉性能差，羊肉的品质也较低，市场的竞争力较弱。从20世纪80年代起，我国养羊业陆续引进了国外的优质肉羊品种，来改良我国地方绵羊，提高其产肉率和羊肉的
2、品质，为我国绵羊提质增肉做了巨大的贡献。目前我国已引入了德国肉用美利奴、南非肉用美利奴、杜泊、萨福克、特克赛尔、无角道塞特等优质肉羊品种，利用引入的肉羊品种改良当地绵羊品种，取得了较好的效果。为了提高引进肉用种公羊的利用率，迅速扩大肉用羊的繁育数量，采用鲜精低温保存的方法进行人工授精是直接有效的方法。鲜精低温保存技术大大延长了肉羊精子的存活时间，提高了优良种公羊精液的利用率，扩大了配种范围。1鲜精低温保存技术的研究1.1鲜精低温保存后精子活力的种间差异的研究实验地点：双辽市牧业科技园区、双辽市光明现代牧业发展有限公司时间：2003年810月内容与结论：在相同的饲养管理条件下，选择特克赛尔、德国
3、肉用美利奴羊、澳洲美利奴羊，分别采精并稀释后低温保存，每隔6小时镜检精子活率，进行10次重复实验。数据结果经方差分析差异不显著。其它品种间是否具有差异需进一步进行研究。1.2种公羊饲养管理对精液质量的影响的研究实验地点：双辽市牧业科技园区、双辽市光明现代牧业发展有限公司时间：2003年810月内容与结论：品种选用特克赛尔，选择4种饲养管理模式， 1，放牧补饲精料，日粮粗蛋白约10%，每隔1日补饲1只鲜鸡蛋，适量胡萝卜；2、全饲舍，补饲精料，日粮粗蛋白约10%，每隔1日补饲1只鲜鸡蛋，适量胡萝卜；3、放牧舍饲，不补饲精料，饲喂黄贮及干草，日粮粗蛋白约7%。4、全舍饲，不补饲精料，饲喂黄贮及干草，
4、日粮粗蛋白约3%。经10次重复实验，不同饲养管理模式下种公羊精液质量平均值如下表：采精量（ml）低温处理前活率低温处理后精液存活时间（h）模式11.599%167模式2280%130模式3195%167模式41.283%126因此，种公羊的饲养管理对鲜精低温保存效果的影响极大，种公羊在保证营养水平的前提下，运动很重要，相对而言，饲养管理模式1较为理想。运动量与营养水平的最佳值还需进一步研究。1.3稀释液配方的筛选在鲜精低温保存技术中，稀释液直接影响精子存活能力，起决定性作用，因此对稀释液配方进行了筛选实验。1.3.1材料与方法1.3.1.1鲜精来源双辽市牧业局引入的优质肉羊品种特克赛尔。1.3
5、.1.2 精液采集方法选取体质健康，性欲旺盛的种公羊，利用假阴道按常规方法采集精液，采出后的精液集精瓶盖严避光恒温，20分钟内送往实验室400倍镜检活率，镜检温度35。1.3.1.3 低温稀释液的制作：在常规稀释液的基础上，进行改进后分别制做A、B、C三种稀释液，其中B液为牛奶稀释液。A稀释液 溶液过滤后蒸煮20min灭菌。冷却到30，抽取鲜鸡蛋黄20ML注入上述溶液，充分混匀。B牛奶稀释液 鲜牛奶用脱脂纱布过滤后，煮沸10分钟，冷却至30吸取中间的奶液作稀释液用。C稀释液 灭菌后，抽取新鲜的鸡蛋黄20ml注入到上述溶液中。以上稀释液各加入青霉素10万IU、链霉素0.1克。1.3.1.4 精液
6、稀释 在30水浴内对精液按1：3倍稀释，将稀释液沿集精瓶壁缓慢注入，轻轻转动，使之混合均匀，不能过快，防止发生稀释性休克。1.3.1.5 降温保存 精液稀释分装后，用16层纱布或脱脂棉包裹容器，并以塑料袋包装密封防水，然后置于0-4的恒温冰箱中。1.3.2 实验结果1.3.2.1 实验一稀释液预先配制好，精液来自一只特克赛尔种公羊，原精量1.0毫升，镜检精子活率98%。原精分成3份，分别用A、B、C三种稀释液3倍稀释，0-4冰箱低温保存。精液存活时间、活率的变化如下表：A稀释液B牛奶稀释液C稀释液6h98%95%98%12h95%83%95%18h93%82%93%24h89%75%90%30
7、h88%69%88%36h85%60%87%42h83%55%86%48h81%50%85%54h77%46%81%60h70%38%76%66h65%30%70%72h58%20%64%78h50%10%55%84h40%040%1.3.2.2 实验二精液来自一只特克赛尔种公羊，原精量1.1ml，镜检精子活率98%。采用A稀释液稀释。其活率时间表如下：时间0.5h29h48h77h101h119h128h143h167h活率98%89%80%70%50%45%30%10%01.3.2.3 实验三精液来自一只特克赛尔种公羊，原精量1.0ml，镜检精子活率98%。采用A稀释液3倍稀释。其活率时间
8、表如下：时间0.5h24h29h48h60h77h99h120167活率98%90%89%80%85%70%60%51%0实验一中所用的三种稀释液，其中牛奶稀释液对精子的生存不理想，而A、C稀释液相对有利于精子生存。综合成本等因素，实验二、三仅采用了A稀释液。实验二及实验三证明特克赛尔肉羊精液低温保存可达167h，而在77h之内精子活率可达70%，因此适宜授精时间应在77h之内。常温下绵羊精子存活时间约为72h，而鲜精低温保存精子存活时间为167h，比常温保存延长了95h。1.4操作规程的制定总结以上实验，结合生产实践，制定了鲜精低温保存操作规程。1.4.1种公羊饲养管理：半舍饲模式管理，放牧
9、补饲精料，日粮粗蛋白约10%，每隔1日补饲1只鲜鸡蛋，适量胡萝卜。1.4.2采精方法：选取体质健康，性欲旺盛的种公羊，利用假阴道按常规方法采集精液，采出后的精液集精瓶盖严避光恒温，20分钟内送往实验室400倍镜检活率，镜检温度35。1.4.3稀释液制做：配制溶液，过滤后蒸煮20min灭菌。冷却到30，抽取鲜鸡蛋黄20ML注入上述溶液，充分混匀。1.4.4低温保存：精液稀释分装后，用16层纱布或脱脂棉包裹容器，并以塑料袋包装密封防水，然后置于0-4的恒温冰箱中。1.4.5人工输精：取出低温箱后室温保存1h，打开纱布以体温促使升温达接近37，然后以常规输精方法输精。2鲜精低温保存技术的应用在国家十
10、五重大科技攻关计划肉羊舍饲、半舍饲关键技术的研究与示范项目的支持下，我们对鲜精低温保存技术进行了研究与大面积应用。按操作规程处理的低温鲜精可保存77小时内受胎率达65%以上，辐射半径达300公里，农民购买鲜精的费用为35元/剂，用小保温箱（35cm35cm30cm）内置冰块利用通往各村的小客车捎带，总成本仅46元，这种低价而便捷的方式在实践中为大多数农户认可。2002年4月2004年4月，项目区内肉羊科技服务体系建设进展顺利，以鲜精低温保存为主的肉羊繁育技术服务体系初见雏形，在吉林省双辽市、长岭县、大安市等地建立人工受精站98个，输精点343个；累计培训人工受精技术员近1500人次。利用鲜精低
11、温保存技术，人工授精生产杂交肉羊270万只，每只育肥羊纯利润60元以上，累计创直接经济效益16200万元。3鲜精低温保存技术的前景与冻精技术相比，鲜精低温保存技术操作简单、经济实用、受胎率高，平均受胎率达65%以上。而冻精制作复杂，成本高，在农村应用常受到限制，且受胎率较低，情期受胎率平均为30%。另外鲜精低温保存技术输精技术与常规输精方法相同，农户可易于掌握，而冻精需在42度下用VB12等稀释液解冻，要求严格，农民很难操作。当前我国种羊市场价格偏高，大多数小规模饲养的农户无力购买优质种羊，少量优质种羊集中在少数地方，偏僻的农村因交通等原因无法进行绵羊的配种改良，这已成为限制我国肉羊产业发展的
12、一个瓶颈因素。而低温鲜精技术可保存精液77小时内受胎率达65%以上，辐射半径达300公里，通过遍布各乡形成网络的鲜精低温链，农民用低温保存的鲜精进行绵羊改良，总成本仅46元，这种低价而便捷的方式在实践中解决了农户绵羊改良难的问题，为大多数农户认可。鉴于绵羊冷冻精液人工授精的受胎率偏低，鲜精人工授精的辐射半径小，影响优秀种羊的利用率，利用现有繁改体系，建立以低温（0-4）保存鲜精的方法形成低温链，进行人工授精技术为主体的肉羊繁殖改良体系，可使农户避开购买价格昂贵的种羊，提高优秀种羊利用率与辐射范围，因此，推广适合我国国情的鲜精低温保存技术将极大地加速我国肉羊改良步伐，提高我国羊肉品质，提升我国肉羊产业化水平。
