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1、串联质谱技术,在新生儿筛查方面的应用,新生儿筛查的必要性,?遗传代谢病多是罕见病，种类繁多，约,4000,种，,常见的,500,种以上，单一病种发病率低,总体发病,率,1/3000-5000,?新生儿筛查：,及早治疗可预防疾病的发作，减,轻症状,提高患儿生存质量，减少伤残,?产前诊断：,预防残疾儿童的出生,，提高出生人,口素质,?临床筛查及诊断：明确诊断，减轻症状，挽救生,命，,减少医疗纠纷,串联质谱技术的优势,特异性,：检测分子量，内标定量显著降低假阳,性率,敏感性,：明显降低假阴性率,高通量,：一次可以检测几十种小分子物质（,30-50,多种疾病），一台仪器每天检测,500,600,个,样
2、品，每个标本,2-3,分钟,采血简单，可以寄送,串联质谱能筛查哪些疾病,?,氨基酸,氨基酸障碍疾病,?,酰基肉碱,有机酸及脂肪酸代谢障碍疾病,?,溶酶体病及脑白质营养不良,?SCID,（重症联合免疫缺陷）比较成熟,?,临床应用范围不断扩大,?,半乳糖血症、糖原累积症、,Wilson,病及,线粒体脑肌病等等不能筛查,测定方法,?,目前使用,LCMSMS,技术主要检测的,氨基酸,及,酰基,肉碱,，可分别作为,氨基酸代谢异常,、,脂肪酸代谢,异常,和,有机酸代谢异常,等疾病的判断指征,检测目标,氨基酸,酰基肉碱,对应代谢疾病类型,氨基酸代谢异常,脂肪酸代谢异常,有机酸代谢异常,?,前处理方法,?,一
3、般,LCMSMS,新生儿筛查血片的前处理方法可根,据是否进行衍生化反应分为衍生化法和非衍生化,法两大类，两种前处理方法在各实验室或检测机,构均有使用，具体操作细节可能有所不同，其大,致流程如下,衍生化法,原材料采购与初加工部门,2,3,非衍生化法,生产产品的车间,衍生化法比较精确，但步骤繁琐，且目标化合物易,分解；非衍生化法步骤简单，成本低，适合检测大,量样本，但不够精确。,4,动力供应部门,液相色谱串联质谱的检测原理,?,新生儿串联质谱筛查使用,四极杆质谱,，该,类串联质谱由,四极杆质量分析器,、,碰撞室,、,四极杆质量分析器,组成。待测化合物离,子化后产生相应前体离子，前体离子经碰,撞室发
4、生诱导碰撞解离产生产物离子碎片,，导入检测器产生强度信号。,LC-MS/MS,检测到的离子流图,岛津液相串联质谱,?,针对新生儿筛查工作专门开发了,Neonatal Solution,新生儿筛,查软件，配合强大的,LabSolutions,工作站，为新生儿筛查工,作提供完整的方法建立、数据采集、数据分析及自动准确,度管理工具，可便捷、高效处理、分析、管理大批量新生,儿筛查数据。,?,经过,Neonatal Solution,的处理，自动得到各组分,的计算结果，根据预设的限值，自动使用各种颜,色标注超出限值的结果。,利用,MALDI-TOF-MS,检测婴儿遗传疾病,?,利用飞行时间质谱检测基因是
5、近年来的新技术，,它对某些基因突变型遗传疾病检出率较高，与传,统,常用基因检测方法相比,，具有检测位点多,、,覆盖率高,、高通量等特点,，能够满,足临床要求,，为患儿未来的婚育,、用药及提早干预提供了积,极有效的遗传指导意义。,什么是,MALDI-TOF-MS,MALDI-TOF-MS,Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of,Flight Mass Spectrometry,基质辅助,激光,解吸电离,飞行时间,质谱,这项技术是由是由岛,津制作所的,田中耕一,先生,和美国科学家,约,翰芬恩,一起发明的，,二人也因此项发明赢,得了,2
6、002,年的诺贝尔,化学奖,原,理,sample,plate,+,+,sample,plate,sample,plate,MALDI,与其他的电离方式不同，样本在基质的保护下几,乎不受伤害。,基质在激光的照射下吸收了激光的能量，电离气化，样,本接受了基质电离放出的质子从而带电，这样样本分子,在基质气相的包裹下，进入下一步骤。,使用,MALDI,电离出的生物大分子是真正“活”着的生物,大分子。,应,用,因,MALTI-TOF-MS,具有的检测位点多,、覆盖率高,、高通量等特点,，无锡市妇幼保健医院已经为新,生儿筛查应用此技术做出了试验。医院选择了,2796,例新生儿为研究对象,，,采集足跟血并,
7、提取,基,因组,D N A,，针对,中国人群特,点,，进行,4,个,基,因,(GJB2,，,C JB3,，,SLC26A 4,和,12s rR N A),20,个,突变位点,的基,因突变检测,，先通过,PCR,扩,增出目的基因片段，然后通过飞行时间质谱检测,，检,出耳聋基,因突变新生儿,158,例,，,携带率为,5,65,。由此可证明,M A LDI,TO F,M S,对非,综合征型耳聋患者的突变,检,出率,较高,。,虽然该技术具有高效,、快速、判读简易和,准确性高的检测特点，有望成为一种极具,潜力,的耳聋基因诊断和筛查工具,，但成本,相对较高,，且不能检测到其他未知突变,，,所以有所局限，但在其他领域有广泛应用,，如质量检测方向的蛋白、肽链的检测，,还有,DNA,探针、引物的鉴定，检测。,引用文章,?,无锡地,区新生儿耳聋基,因的,M A LD I,TO F,M S,筛查分,析,-,中华检验医学杂,志,2015,年,2,月,?,基于质谱的,D NA,序列测定进展,-,化学,通报,2000,年,2,期,?,串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛,查中的应用,-,山东省济南市妇幼保健院,新生儿疾病筛查中心,250001,?,岛津串联质谱技术在新生儿筛查中的应用,-0407,应用文章医学检验应用文集,
