单细胞藻类的培养液概要.doc

《单细胞藻类的培养液概要.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《单细胞藻类的培养液概要.doc（58页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、第六节 单细胞藻类的培养液藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。 本节内容分培养液成分、培养液配

2、方和培养液的配制三部分。 一、培养液成分 单细胞藻类培养液的成分有下列七类。 (一)大量元素 1氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙Ca(NO)3)2、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵(NH4)2SO4、发酵人尿等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。 2磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液

3、应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。 3铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁Fe2(SO4)3、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵Fe(NH4)3(C6H5O7)等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。 (1)在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻

4、止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim，1963)。 (2)在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。 (3)应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。 由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。 因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。 4钾(K) 单胞

5、藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等。一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素。除此以外，可再加入氯化钾。5镁(Mg) 培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)两种。可以单独使用其中一种，也可两种同时使用。镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的。湛水101号培养液（湛江水产学院）：NaNO30.03g维生素B1200gCo(NH2)2 0.03g维生素B12 200mgKH2PO4 0.005g 人尿 1.5mlFeC6H5O7(1%溶液

6、) 0.2ml海水1 000ml培养绿藻类、金藻类、硅藻类使用。在培养硅藻时应加入0.02g/L硅酸钠。ASP2培养液Provasoli,L.;McLaughlin,J.J.A.;Droop,M.R.1957:NaCl1.8gNnCl20.12mgMgSO47H2O0.5gCoCl20.3gKCl0.06gCuCl20.12gCaC1210.0mgH3BO30.6mgNaNO35.0mg维生素B120.1gK2HPO40.5mg维生素溶液S3（参考第70页）1.0mlNa2SiO310H2O15mgNa2EDTA3.0mg三羟甲基氨基甲烷0.1mgFeCl30.08mg纯水100mlZnCl3

7、15gpH7.67.8培养绿藻类、金藻类、蓝藻类、隐藻类、涡鞭藻类使用。（2）绿藻培养液配方：海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：NaNO30.1g2Na3C6H5O711H2O0.02gKH2PO4 0.01g Fe(SO4)3(1%溶液)10滴海水1 000ml 亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.05g维生素B12200mgKH2PO4 0.005g 人尿 2mlFeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml维生素B1200g海水1 000ml培养成亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。亚心形扁藻培养液（厦门水产学院）：（

8、NH4）2SO4200mg海泥抽出液V（参考第60页）20ml过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2(CaSO4H2O)30mgFeC6H5O7(1%溶液) 0.5ml海水1 000ml 过磷酸钙溶液的配制：取含有效磷为16%的普通二级过磷酸钙配成3%的母液，过滤，使用时每1000ml海水加入1ml。培养过程中以追肥形式分2次加入0.2%人尿液效果更好。布彻（Butcher）培养液Butcher，（1959）：NaNO30.1g土壤抽出液50mlK2HPO40.05g海水1000ml培养扁藻使用。盐藻培养液：甲液：K2HPO40.05gNaCl510gFeC6H5O70.001g海水500ml

9、海泥抽出液V（参考第60页）2030ml乙液：海水500mlNaNO30.5g使用时，将甲、乙两液混合。如果再加入0.2%0.3%人尿，效果更好。赫特纳（Hutner）培养液Hutner,S.H.(1950)：NaCl0.254gK2HPO420mgMgSO47H2O0.25g醋酸钾0.2gCa(NO3)24H2O15mg甘氨酸0.25gEDTA0.05gZn3.0mgFe0.6mgCu0.5mgMn1.0mg纯水100mlMo1.0mgpH7.5 培养盐藻使用。赖瑟（Ryther）培养液Ryther，J.(1954):NaCl2.67gNa3HPO412H2O2.0mgMgCl26H2O0.

10、22gNa2SiO39H2O2.0mgMgSO47H2O0.32gNa2C6H5O72H2O0.02mgKCl73mgKBr5.8mgNaHCO320mgB1.0mgNH4Cl5.3mg纯水100mlCaCl2150mg培养微绿球藻和Stichococcus使用。屋岛改良培养液（平田八郎，1980）：过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2(CaSO4H2O)50g硫酸铵（NH4）2SO4300g海水1m3大量培养海产小球藻使用。（3）硅藻培养液配方：艾伦内尔森（Allen-Nelson）培养液Allen,E.J.et al(1910):A.KNO320.2g纯水100mlB.Na2HPO412

11、H2O4.0gCaCl26H2O4.0gHCl(浓)2.0ml纯水80mlFeCl32.0mlB 液的配制法：先把氯化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二纳4g溶解40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两溶液混合。使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消后静置24h，然后将上层清液倒出使用。卢因（Lewin）培养液Lewin,J.C.;Lewin,L.A.(1960):Ca(NO3)24H2O0.02gZn0.1mgK2HPO40.05gB0.1mgNa2S

12、iO39H2O0.5mgCo0.1mg胰蛋白1.0gCu0.1mg维生素B121.0gMo0.1mgFe0.3mg海水1000ml米奎尔（Miquel）培养液Miquel,P.(18901893):A.MgSO410gKI0.2g NaCl10g纯水100ml Na2SO45gB.Na2HPO412H2O4g NH4NO31gCaCl26H2O4g KNO32gFeCl3(溶融)2ml NaNO32gHCL(浓)2ml KBr0.2g 纯水80ml每1000ml海水加入A液2ml，B液1ml。须藤培养液须藤俊造（1959）：NaCl24gNaHCO30.168gMgSO47H2O8gNa2Si

13、O30.008gKCl0.7gP1（参考第70页）1mlCaCl22H2O0.37g维生素B120.02gNaNO30.1gNa2HPO412H2O0.125g纯水1000ml 培养中肋骨条藻使用。廖氏改良培养液（转引自张立言等，1989）：KNO360mgNaSiO310mgNa2HPO412H2O10mg海水1000ml培养中胁骨条藻用。中胁骨条藻培养液（厦门大学）：KNO30.4gNaSiO30.02gNa2HPO412H2O0.04gFeSO47H2O0.014g土壤抽出液15ml45国际单位“920”植物生长刺激素海水1000ml硅藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.08g维生素

14、B1200gK2HPO40.008g维生素B12200mgFeC6H5O7(1%溶液)0.2ml人尿1.5mlNa2SiO30.02g海水1000ml培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻使用。牟氏角毛藻培养液（黄海水产研究所）：NH4NO3520mgFeC6H5O73H2O0.52.0mgKH2PO40.51.0mg海水1000ml小新月菱形藻培养液（朱树屏等，1964）：NO3N4gFe(FeC6H5O73H2O)0.04gPO4P0.4g海水1m3赫特纳（Hutner）培养液Hutner,S.H.(1948):NaCl0.2gMn0.05gMgSO47H2O0.25gMo5

15、.0gNH4NO350mgZn5.0gCaCO314mgCu5.0gK2HPO440mgB005gNa2SiO39H2O5mg纯水100mlNa3C6H5O72H2O100mgFe0.5mgpH7.27.5培养三角褐指藻使用。（4）金藻培养液配方：ES培养液（Allen,M.B.）:NaNO30.12g土壤抽出液I（参考第60页）50mlK2HPO40.001g海水1000ml培养等鞭藻Isochrysis galbana使用。F/2培养液（Guillard et al.,1962）:NaNO374.8mgF/2微量元素溶液（参考第70页）1mlNaH2PO44.4mgF/2维生素溶液（参考第

16、71页）1mlNa2SiO39H2O8.416.7mg海水1000ml小型培养金藻使用。F/2改良培养液（厦门水产学院）：NaNO374.8mg人尿1.5mlNaH2PO44.4mg海水1000ml海泥抽出液V（参考第60页）2060ml生产性培养金藻使用。等鞭藻OA3011培养液（陈椒芬等，1987）：NaNO360mg维生素B120.51.5gKN2PO44mg维生素B1100500gFeC6H5O70.5mgNaHCO31gNa2SiO35mg海水1000ml湛水10713培养液（湛江水产学院）：NaNO380mg维生素B120.51.5gK2HPO48mgNaHCO31gFeC6H5O

17、7（1%溶液）0.2mg维生素B1200g海水1000ml培养湛江等鞭藻、亚心形扁藻、钙质角毛藻使用。湛水10718培养液（湛江水产学院）：NaNO350mg维生素B120.51.5gK2HPO45mg人尿1.5mlFeC6H5O7（1%溶液）0.2mlNaHCO30.5g维生素B1200g海水1000ml培养湛江等鞭藻、亚心形扁藻、钙质角毛藻使用。等鞭藻9201培养液（周汝伦等，未发表）：Co(NH2)230mg/L维生素B10.2mg/LNaNO330mg/L维生素B120.0005mg/lKH2PO48mg/LFeC6H5O70.5mg/L海水培养等鞭藻9201品系使用。绿色巴夫藻培养液

18、（陈椒芬，未发表）：NaNO360g维生素B1100mgKH2PO44g维生素B120.5mgFeC6H5O70.5gNa2SiO39H2O5g海水1m3异胶藻培养液（陈世杰，1979）：（NH4）2SO41020mgFeC6H5O70.10.2mgKH2PO412mg海水1000ml异胶藻培养液（陈世杰，1979）人尿 35ml 海水 1000ml大量培养使用。2淡水单胞藻培养液配方（1）一般用培养液配方：朱氏10号培养液（朱树屏，1942）：Ca(NO3)20.04gNa2SiO30.025gK2HPO40.010.05gFeCl30.0008gMgSO47H2O0.025gNa2CO30

19、.02g淡水1000ml培养浮游藻类使用，以海水代替淡水可用于培养海产藻类。诺普（Knop）改良培养液Pringsheim,E.G.(1949):KNO31.0gMgSO47H2O0.1gCa(NO3)20.1gFeCl30.001gK2HPO40.2g 淡水1000ml（2）绿藻培养液配方：水生4号培养液（黎尚豪等，1959）：（NH4）2SO40.2gKCl0.025g过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2(CaSO4H2O)0.03gFeSO4(1%溶液)0.15mlMgSO47H2O0.08g土壤抽出液（参考第60页）0.5mlNaHCO30.10g淡水1000ml 培养斜生栅藻（Sc

20、enodesmus obliquus）和蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）使用。水生6号培养液（黎尚豪等，1959）：NH2CONH20.133gFeSO4(1%溶液)0.200mlH2PO40.33mlCaCl20.030gMgSO47H2O0.100g土壤抽出液（参考第60页）0.500mlNaHCO30.100gKCl0.033g淡水1000ml培养种类同水生成号，使用水生6号培养液培养，藻细胞生长繁殖比使用水生成号迅速。布里斯托尔（Bristol）培养液Bristol,B.M.(1920):NaNO30.5gNaCl0.05gKH2PO40.5gFeCl36H2

21、O0.01gMgSO47H2O0.15gCaCl20.05g淡水1000ml培养绿藻类使用。（3）硅藻培养液配方：水生硅1号培养液（水生生物研究所藻类研究室藻类应用组76，1975）：NH4NO3120mgNa2SiO3100mgMgSO47H2O70mgCaCl220mgK2HPO440mgNaCl10mgKH2PO480mgFeC6H5O75mgMnSO42mg淡水1000ml培养泉生偏缝藻（Nitzschia fonticola Grun.），椿状偏缝藻（Nitzschia palea Smith）,双尖菱板藻（Hantzschia amphioxys Grun.），梅尼小环藻（Cycl

22、otellameneghiniana Kutz.）使用。水生硅2号培养液（水生生物研究所藻类研究室藻类应用组76，1975）：NH2CONH2150mgNaHCO3100mg过磷酸钙Ca(H2PO4)2H2O+2（CaSO4H2O50mgMnSO43mgMgSO47H2O50mgEDTA-Fe1mlKCl30mg土壤抽出液（参考第60页）4mlNa2SiO3100mg淡水1000ml培养种类同水生硅1号，大量培养使用。福格（Fogg）培养液Fogg,M.B.,(1956):Ca(NO3)20.8gNa2SiO30.025gK2HPO40.01gFeC6H5O70.0008gMgSO47H2O0

23、.025g土壤抽出液（参考第60页）20mlNa2CO30.02g纯水1000ml培养舟形藻(Nauicula pelliculosa使用)。（4）蓝藻培养液配方：B.G.M.培养液（Allen,M.B.）:KNO32.02gK2HPO40.35gMgSO47H2O2.46gA8（参考第70页）3.0mlNaCl2.30gCaCl20.07g纯水1000ml培养一般蓝藻用。扎鲁克（Zarrouk）培养液（Pinnan Soong,1980）:NaHCO316.8gCaCl22H2O0.04gK2HPO40.5gFeSO47H2O0.01gNaNO30.2gEDTA0.08gK2SO41.0gA

24、51mlNaCl1.0gB61mlMgSO47H2O0.2g淡水1000ml培养螺旋藻最广泛使用的配方。CFTRI培养液（转引自何连金，1988）：NaHCO34.5gMgSO40.2gNaNO31.5gCaCl20.04gK2HPO40.5gFeSO40.01gK2SO41.0gNaCl1.0g淡水1000ml培养螺旋藻使用。MSsl培养液（转引自何连金，1988）：NaHCO34gFeCl3(0.1%溶液)0.2mlNH2CONH20.25gKH2PO40.05g海水1000ml室内小水体培养螺旋藻使用。NaHCO324gFeCl3(0.1%溶液)0.2mlNH2CONH20.214gKH

25、2PO40.042g海水1000ml室外大面积培养螺旋藻使用。3微量元素溶液配方（1）A5-B6微量元素溶液Holm-Hansen,O.,Gerloff,G.C.,Skoog,F.,(1954):A5B6H3BO32.86gNH4VO3229.6mgMnCl24H2O1.81gCr2k2(SO4)424H2O960.2mhgZnSO47H2O0.22gNiSO46H2O447.8mgCuSO45H2O0.08gCo(NO3)26H2O493.8mgNa2MoO40.021gNa2WO42H2O179.4mg纯水1000mlTi溶液20mlH2SO41滴1/20mol/L H2SO41000ml

26、A6-B6微量元素溶液使用很广泛，A5单独使用的例子很多。钛（Ti）溶液配法：把736.6g草酸钛，溶解于小量纯水中，加入氢氧化铵使成碱性，发生沉淀。用离心法将沉淀集中，用/20mol/L的硫酸20ml溶解。用量：第1000ml培养液加入A5、B6溶液各1ml。 （2）普罗瓦索利的P8微量元素溶液（Provasoli et al.,1957）:羟乙基替乙二胺三醋酸CO(Cl)1mg脂钠3gCu(Cl)2mgFe(Cl)200mgB(H3BO3)200mgZn(Cl)50mgMo(MoO3)50mgMn(Cl)100mg纯水1000ml每1000ml培养液加入10ml。（3）MF微量元素溶液Mi

27、ller,J.D.A.,Fogg,G.E.,(1957):B（H3BO3）0.2gCu(SO4)0.02gMn(Cl2)0.2gZn(SO4)0.02gMo(MoO3)0.2gCo(Cl2)0.02g纯水1000mlH2SO4（浓）1滴每1000ml培养液加入1ml。（4）P1微量元素溶液Pinter,I.J.,Provasoli,L.,(1958)：EDTA1.0gCo(Cl)0.001gZn(Cl)0.005gCu(Cl)0.00004gMn(Cl)0.04gFe(Cl)0.01g纯水1000ml每1000ml培养液加入30ml。（5）SM微量元素溶液Sorokin,C.;Myers,T.

28、,(1957)：EDTA50gMoO30.7gB3BO311.4gCuSO45H2O1.6gZnSO47H2O8.8gCo(NO3)26H2O0.5gMnCl24H2O1.0g纯水1000ml(6)“f/2”微量元素溶液：ZnSO44H2O23mgNa2MoO42H2O7.3mgMnCl24H2O178mgCoCl26H2O12mgCuSO45H2O10mgNa2EDTA4.35gFeC6H5O75H2O3.9g纯水1000ml每1000ml培养液加入1ml。（7）艾伦（Allen）的A8微量元素溶液（Allen,M.B.）：Fe0.4gMo（MoO3）0.001gMn(Cl2)0.05gV0

29、.001gZn(SO4)0.005gCo(NO3)0.001gCu(SO4)0.002gN/10H2SO4300mlB(H3BO3)0.05g每1000ml培养液加入3ml。4维生素溶液配方（1）维生素溶液S3Provasoli,L.,McLaughlin,J.J.A.,Droop,M.R.,(1957)：硫胺素盐酸盐0.05g肌醇0.5g尼古丁酸（烟酸）0.01g叶酸0.2g泛酸钙0.01g胸（腺）间氮苯0.3g对氨安息香酸1.0g维生素H0.1g纯水1000ml每1000ml培养液加入1ml。（2）埃弗索尔（Eversole）的维生素溶液Eversole,R.A.,(1956)：硫胺素盐酸

30、盐100mg盐酸胆碱200mg维生素B6醇75mg叶酸1mg泛酸钙200mg维生素H0.05mg双氨安息香酸5mg肌醇1000mg烟酸胺75mg纯水1000ml每1000ml培养液加入1ml。（3）“f/2”维生素溶液：维生素B120.5mg维生素H0.5mg维生素B1100mg纯水1000ml每1000ml培养液加入1ml。 6硫(S) 培养液中硫的来源一般是加入其他营养元素的硫酸盐类(如硫酸铵、硫酸镁、硫酸铁、硫酸高铁、硫酸锰、硫酸铜等)在获得其他营养元素的同时，也获得了硫元素。 7钙(Ca) 培养液中钙的来源，常加入氯化钙(CaCl2)或硝酸钙Ca(N03)2。 8硅(Si) 在硅藻培养

31、液中一般都加入硅元素，硅元素的来源，常用的是硅酸钠(Na2SO3)和硅酸钾(K2SiO3)。 (二)微量元素微量元素的种类很多，但单胞藻培养液配方中常用的约10余种。现将其名称及一般使用的化合物列举如下： 1硼(B) 硼酸(H3BO3)，焦性硼酸钠(Na2B4O7)。 2锰(Mn) 硫酸锰(MnSO4)，氯化锰(MnCl2)。 3锌(Zn) 硫酸锌(ZnSO4)，氯化锌(ZnCl2)。 4铜(Cu) 硫酸铜(ZuSO4)，氯化铜(CuCl2)。 5钼(Mo) 钼华(MoO3)，钼酸铵(NH4)2O.7MoO3。 6钴(Co)氯化钻(CoCl2)。 7钛(Ti) 氯化钛(TiCl2)。 8钨(W

32、) 钨酸钠(Na2wO4)。9铬(Cr) 硫酸铬钾CrK(SO4)2，铬酸钾(K2CrO4)。 10镍(Ni) 硫酸镍(NiSO4)。 11钒(V) 钒酸钠(NaVO3)，钒酸铵(NH4VO3)。 12镉(CA) 氯化镉(CdCl2)。 13锶(Sr) 硫酸锶(SrSO4)。 这些微量元素可以分开单项列于培养液配方中，也可以把微量元素集中配成微量元素溶液，然后按一定量加入培养液中。这些微量元素溶液有各种配方，一些常用配方将在第6970页介绍。 藻类对微量元素的需要量和中毒量(致毒量)的差距一般很狭小，略微超过需要量即会引起中毒。微量元素也容易形成胶体复合物和发生沉淀，使藻类细胞不能利用。由于以

33、上两种原因，致使在培养液中保持适量的微量元素是很困难的。络合剂的应用是解决以上困难的办法之一。 良好的田园土壤抽出液一般含有藻类生长繁殖所需要的各种微量元素和溶解有机物质，且具有类似络合剂的作用。所以在培养液中加入土壤抽出液是解决微量元素供应的有效办法。 (三)辅助生长有机物质藻类除了必须吸收无机营养之外，也吸收水中的溶解有机物质，如维生素Bl、维生素B12、生物素等，这些物质对藻类的生长有辅助作用，称为辅助生长有机物质。辅助生长有机物质能促进藻类细胞的生长繁殖，还能增强藻类细胞对环境的适应能力，因此受到重视，加入培养液中的辅助生长有机物质种类也愈来愈多。常用的有维生素B12、维生素B1(硫铵

34、素)、维生素B2、维生素B6、维生素H、生物素、柠檬酸、乳精酸、烟酸，对氨安息香酸、叶酸、泛酸钙、肌醇、腐肉碱、胸(腺)间氮苯、葡萄糖、肝抽出物、酵母抽出物、贝肉汤、鱼粉、咸鱼汁等。 辅助生长有机物质可以分别加入培养液中，也可以把多种辅助生长有机物质配成混合液，称维生素溶液，在配制培养液时按一定比例加入。 土壤抽出液除含有无机微量元素外，还含有某些辅助生长有机物质。在培养液中加入土壤抽出液实际上加入了某些辅助生长有机物质。 (四)土壤抽出液 土壤抽出液含有单细胞藻类需要的微量元素和辅助生长有机物质，培养液中加入适量的土壤抽出液，一般能获得良好效果。 土壤抽出液的制作虽然简单，但处理方法各有不同

35、。现将常用的方法介绍如下。 1土壤抽出液I 取土壤1kg，加纯水1 000ml，煮沸60min，在暗处放置2d，过滤，以滤液600ml加纯水400ml使用。 2土壤抽出液 取土壤1kg，加纯水1 000ml，再加入氢氧化钠23g，煮沸120min，冷却后过滤，滤液直接使用。 3土壤抽出液 取土壤1kg，加自来水2 000ml，煮沸煎浓，把上部泥浆倾入烧杯中澄清，静置一昼夜后，次日吸取上层清液，再煮沸煎浓。第3天再如法煎煮，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，煎浓，直至得到l 000ml的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，煮沸灭菌保存(朱树屏，1964)。 4土壤抽出液取田园土壤1kg，加水2 000m

36、l，搅拌均匀，浸泡，用前吸取上清液，煮沸消毒后使用(黎尚豪等，1959)。 5海泥(或土壤)抽出液V 取海滩上砂质较少，有机质较多而又不是过分淤黑的上层软泥(或田园土壤)，清除其中的小树枝和小石块等杂物，以容量计算1份泥加2份水，充分搅拌均匀，静置l2min，待粗砂、小石下沉，把上层泥浆倾人铝锅中，弃去底部粗砂、小石等杂物，按每1 000ml泥浆加入NaOH 1g的量加入NaOH，煮沸2030min，煮时需不断搅拌。煮后静置24h，吸取上清液使用。海泥抽出液吸出后，除当天使用外，可以装入大烧瓶中再经煮沸12次(每天1次)，可作较长时间的保存，使用时再经煮沸。 不同地点取的土壤或海泥制成的土壤抽

37、出液或海泥抽出液的营养成分和数量是不相同的，这是由于不同地点的土壤或海泥所含物质的成分和数量存在着差别的缘故。因此在取用土壤或海泥时，必须固定地方，不要经常变换，对其培养效果及合适的使用量，均应通过培养试验，了解掌握。 (五)络合剂无机态铁和微量金属元素容易形成胶体复合物和发生沉淀，不能为藻类利用。为了防止这些元素溶胶化和沉淀的发生，保持其对藻类的可利用态，以维持在培养液中的适量存在，哈特纳(Hutnei，1950)首先应用了称为络合剂的化合物。迈尔(Myers，1951)在培养小球藻中成功地使用了EDTA。其后，在许多培养液配方中，都有络合物的使用。最常用的络合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)，

38、此外还有亚硝基R盐、三价氮基三醋酸(NTA)、羟基乙基乙烯二胺三醋酸(HOEDTA)等。络合剂，本质上相当于环状有机化合物这一类，非常稳定，应用一定数量的络合剂，可以防止铁和微量元素的沉淀和溶胶化，并能根据质量作用定律释放出足量的离子供藻类细胞利用，能够大大地减少对藻类供应适量铁和微量元素的困难，并能使元素的量达到比藻类所能忍受的较高的浓度。 但也有关于应用络合剂后，引起某些金属元素缺乏的报道(MRDroop，1969)。(六)植物生长调节剂 植物生长调节剂又称植物生长激素，有促进藻类细胞生长繁殖的作用。在培养液中加入某些植物生长调节剂，增产效果明显。向曙光等(1986；1989)在亚心形扁藻

39、的培养液中加入3050mg/L增产灵，净增产率为6070。又加入40rngL乙烯利，净增产率为5687。徐淑凤等(1987)培养底栖硅藻，在培养液中添加0.5mgL的a-夸乙酸钠，对底栖硅藻的生长繁殖具有明显的促进作用85。 (七)缓冲剂 在培养液中加入缓冲剂，可加强缓冲作用。常用的缓冲剂有三羟甲基氨基甲烷和二甘氨酸。 以上介绍了培养液的成分，共七类。但不是说单胞藻培养液都必须具备这七类成分。其中最重要而且是必不可少的是大量元素，其次是微量元素和辅助生长有机物质，其他成分只在某些培养液配方中使用其中的一类或两类。二、培养液配方 (一)用纯水配制的培养液 在实验室进行藻类植物的培养研究或其他生理

40、、生化研究时，必须使用纯水配制培养液，并使用纯度较高的AR级或CP级化学试剂。这样，培养液中营养元素的种类和数量才能比较准确地在人为控制之下。 较理想的纯水，是使用离子交换树脂处理的无离子水，用这种无离子水做微量元素的研究，证明是有效的。通过蒸馏取得的蒸馏水，无论蒸馏器是金属或玻璃的，在蒸馏水流过蒸馏器时，可能带有少量的微量元素。因此，在许多微量元素研究中不宜采用。 用纯水配制培养液，营养元素的种类必须全面，使用的化合物也较多。一些科学工作者还根据天然海水的化学成分，在纯水中加入无机化合物配成人工海水，应用于海洋生物的研究。 (二)用天然淡、海水配制的培养液 一般单胞藻饵料培养和以生产有机物质为目的的生产性培养都使用天然淡、海水配制培养液。天然淡、海水是水生生物长期适应于其中生活的优良环境，已存在着植物必须吸收的各种营养物质，所以在配制培养液时只需要增加某些在培养中可能引起缺乏的营养元素就成了。尤其是大量生产中，往往只加入最主要的几种营养元素，也不必要求采用纯度较高的化学试剂，可使用工业纯和农肥。 (三)常用单胞藻培养液配方 国外使用的单胞藻培养液配方，数量众多。田宫博和渡边笃(1965)编著的藻类实验法和金尼Kinne O(1976)编著的海洋生态学(MARINE ECOLOGY)第三卷，第一部分等专著已有较系统的介绍。在此，只重点