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1、2023/4/30,1,标本的采集和送检,避免杂菌污染,运送注意保存,不同期不同标本,用抗菌素以前,采集病变明显部位,标本必须新鲜,2023/4/30,2,一、细菌学诊断，病原菌的检查程序,药物敏感试验,标本,直接涂片镜检,分离培养,生化试验,血清学试验,动物试验,明确诊断,初步诊断,检测核酸（杂交、PCR、DNA指纹）,其他检测技术（测抗原）,（检测病原菌）,2023/4/30,3,原理,二、血清学诊断,双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义,种类,标本,凝集试验：,沉淀试验：,补体结合试验：,中和试验：,肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等,梅毒VDRL
2、、RPR试验等,抗“O”试验等,Q热柯克斯体抗体检测等,2023/4/30,4,将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得免疫力的一种防治微生物感染的措施。,第二节 细菌感染的免疫防治一、人工主动免疫,主要生物制品,死疫苗,活疫苗,类毒素,亚单位疫苗,DNA重组疫苗,核酸疫苗,治疗性疫苗,2023/4/30,5,抗毒素,细胞免疫制剂,二、人工被动免疫,注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体获得特异性免疫力,主要生物制品,抗菌血清,胎盘球蛋白,丙种球蛋白,2023/4/30,6,人工主动免疫与人工被动免疫,比较,2023/4/30,7,比较,死疫苗与活疫苗,20
3、23/4/30,8,.,第三节 病毒感染的检查标本的采集与送检 用于分离培养的标本：a、采集急性期标本 b、采集感染部位标本 c、冷藏 血清学诊断的标本：急性期和恢复期双份血清，-20保存,2023/4/30,9,.,一、检测活病毒 病毒的分离培养与鉴定 1.最常用细胞培养 2.鸡胚接种：主要用于流感病毒的分离 3.动物接种少用：主要用于狂犬病病毒 乙型脑炎病毒的分离,2023/4/30,10,动物接种,鸡胚接种,组织培养,器官培养,移植培养,细胞培养,原代细胞培养,二倍体细胞培养,传代细胞培养,一、检测活病毒（一）三大培养方法,2023/4/30,11,常用的细胞培养,2023/4/30,1
4、2,2023/4/30,13,（二）病毒在细胞内增殖的指标,1、CPE,2、红细胞吸附,正常细胞,病变细胞,2023/4/30,14,狂犬病毒包涵体（Negri body）,3.包涵体,2023/4/30,15,巨细胞病毒包涵体,4.免疫技术,2023/4/30,16,（三）病毒数量和感染性测定,1、蚀斑试验,2、ID50 或 TCID50,病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起 50%发生死亡或病变的最小量。,病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位PFU来表示。,2023/4/30,17,病毒
5、的快速诊断,光镜-包涵体,电镜,免疫荧光,ELISA,分子生物学技术,杂交,Southern blot,PCR,Northern blot,2023/4/30,18,.,二、检测病毒抗原与抗体 已知抗体测病毒感染脱落细胞或分泌物细胞中的抗原 已知抗原测血清中抗体测IgM，或动态测IgG（双份血清）三、检测病毒核酸 PCR试验 引物 核酸杂交试验 探针 基因芯片技术,2023/4/30,19,第四节病毒感染的防治一、病毒感染的治疗（一）药物治疗 1.核苷类药物 2.蛋白酶抑制剂 3.天然药物（二）基因治疗 1.反义寡核脱氧核酸 2.核酶（三）免疫治疗,2023/4/30,20,1.核苷类药物（1
6、）抑制病毒基因复制 碘尿苷(疱疹净)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼疱疹病毒感染。也可渗入细胞DNA,故有毒性。无环鸟苷(啊昔洛韦)，竞争病毒复制酶。（2）抑制病毒基因转录 病毒唑 2.蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”治疗HIV，3TC加蛋白酶抑制物 3.天然药物 中草药治疗：黄芪、板蓝根、大青叶,2023/4/30,21,（二）基因治疗 1.反义寡核脱氧核酸(反义DNA)与病毒DNA关键基因互补 反义寡核苷酸(反义RNA)与病毒RNA关键基因互补 2.核酶 与病毒RNA结合,切割降解靶RNA（三）免疫治疗 细胞因子：干扰素、TNF、IL-12等,2023/4/30,22,.,策略：阻断病毒复制周期中吸附穿入
7、、脱壳、核酸复制、或装配释放 任一环节，从而抑制病毒复制 要求：抗病毒药物能穿入细胞选择性地 抑制病毒复制又不损伤宿主细胞 1、阻断吸附 特异免疫球蛋白中和抗体 如：乙脑病毒包膜抗原的单抗,2023/4/30,23,.,可溶性的病毒受体 如：HIV 用可溶性CD4（不理想）2、抑制脱壳 如：金刚烷胺，用于流感病毒的防治（副作用大）3、抑制核酸复制 a.核苷类化合物(最早用于临床治疗)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶 如:碘尿苷(疱疹净),眼疱疹病毒感染,2023/4/30,24,.,也可渗入细胞DNA,故有毒性 无环鸟苷(啊昔洛韦)毒性作用小 b.抗病毒基因治疗 反义寡核脱氧核酸(反义DNA)与病毒DN
8、A关键基因互补 反义寡核苷酸(反义RNA)与病毒RNA关键基因互补 核酶 与病毒RNA结合,切割降解靶RNA,2023/4/30,25,.,c.病毒蛋白酶抑制物 病毒蛋白酶:病毒复制 转录后剪接、加工 如：“鸡尾酒”治疗HIV 3TC加蛋白酶抑制物 d.细胞因子：干扰素、TNF、IL-12等 4、疫苗治疗 如：乙肝、HIV、狂犬病疫苗 5、中草药治疗：黄芪、板蓝根、大青叶,2023/4/30,26,.,二、病毒感染的预防（一）人工主动免疫（artificial active immunity）定义：是将疫苗或类毒素接种于人体，使 机体产生获得性免疫力，抵抗微生 物感染，主要用于预防。,2023
9、/4/30,27,.,制剂：1）死疫苗：选用免疫原性强的病原，经人工大量培养后，用理化方法 杀死或灭活。2）活疫苗：用减毒的或无毒力的活 病原体制成 3）类毒素：细菌外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理获得,2023/4/30,28,.,4)基因工程疫苗:重组DNA表答的病原蛋白 5)核酸疫苗:DNA和RNA疫苗,由载体和编码 病原体某种抗原的cDNA或 mRNA组成 6)其它:合成肽疫苗、抗独特型疫苗等,2023/4/30,29,（二）人工被动免疫（artificial passive immunization）定义：注射含有特异性抗体的免疫血清 或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等细胞免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，主要用于治疗或紧急预防。,2023/4/30,30,.,如：血清免疫球蛋白 用于甲肝、麻疹、脊髓灰质炎预防 高效价含乙肝病毒表面抗体的免疫 球蛋白 用于预防母婴乙肝传播,
