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1、引 言,甲 流,我国0.065%，全球平均1.24%,SARS,世界卫生组织统计非典的流行全球感染8422人，死亡919人，病死率近 11,SARS,无特效药隔离病人焚烧尸体,艾滋病AIDS,自1981年在美国发现以来迅速蔓延，死亡率接近100,艾滋病AIDS,艾滋病AIDS,2008年斯威士兰42.2%的孕妇都是艾滋病病毒携带者近40%的高艾滋病感染率目前斯威士兰的人均寿命仅为37.5岁,AIDS,全国累计报告艾滋病病毒感染者和病人分布图（截至2007年10月底）70万，0.05,AIDS,潜伏期七年,禽流感AIV,禽流感AIV,1997年香港一3岁男童死于禽流感，这是全球首宗人类感染H5N
2、1的个案 2003年11月到2006年7月，全球230多人感染，130多人死亡，病死率51.69,禽流感AIV,禽流感AIV,禽流感AIV,1918年西班牙流感死亡2200万,禽流感AIV,1000万,猪高热病,学习目的,了解当前流行的病毒，以及致病机理。给大家指出一条发家致富的明路。对已经发现的病毒，大多数我们还都束手无策，希望通过对这门课的学习使大家对病毒产生兴趣，从而在以后的深造中投身到病毒学的研究中。,病毒是什么,“我自己也是乙肝的带菌者”,2006年刘德华担任中国肝炎防治基金会乙肝防治宣传大使,病毒与其它微生物的区别,病毒致病过程,第一章 病毒学的发展史,一.经验时期,北宋（960年
3、到1127年）年间，吸入病人痂接种人痘来预防天花。,1796年英国医生Edward Jenner发明了“种牛痘”的方法预防天花。,1884年巴斯德从科学实践中知道有侵染性的物质经过反复传代和干燥，会减少其毒性。用减低毒性的侵染物接种狗，该狗即使再感染狂犬病毒也不会得狂犬病。,二.发现时期,1886年，法国人Adolf Mayer将感染TMV的烟草叶汁注入健康的烟草叶脉中，诱发了花叶病。,1892年，俄国科学家Dimitri Iwanowski用无釉陶瓷滤膜过滤TMV的病原体，滤过液可以将疾病传染到另外的植物上。他认为是细菌产生的毒素引起的。,Dmitri Iwanowski(1864-1920
4、),Chamberland过滤器,1898年，Martinus Beijerink发现稀释后的滤液可以在植物的活组织中复制并保持其力量 而且它不能像细菌一样在无细胞状态下培养，他称之为“传染性活汁液”,Martinus Beijerinick(1851-1931),他称这种“有感染性的、活的流质”为“病毒”他被誉为“病毒学之父”,第一个病毒引起的动物病例,Freidrich Loeffler(1852-1915),同年，Freidrich Loeffler证明牛口蹄疫病是可滤性病毒引起的。,1915年，Fredrick Twort首次发现了噬菌体。1917年，Felix dHerelle将“能
5、溶解琼脂平板上的细菌的物质”命名为“噬菌体”,细菌的病毒噬菌体,三.病毒本质的研究时期,早期的生化实验工作中得出的主要结论是，蛋白变性、强酸强碱、高温都对病毒有害，而温和的蛋白沉淀剂、低温和中性ph一般对病毒无害。,1935年，美国生化学家Wendell Meredith Stanley获得TMV的晶体，并于1946年因此获得诺贝尔奖。,1937年，英国的Bawden和Pirie证明TMV的结晶含磷和RNA，提示TMV是个核蛋白。,1939年，Kausche和Ruska用电镜照片，直观证实TMV是杆状颗粒。,四.病毒与宿主相互关系的探索时期,病毒核酸可以整合到宿主细胞基因组中DNA是噬菌体的遗
6、传物质 某些病毒感染引起细胞融合 某些病毒引起细胞生长习性和形态特征的转化,1915年，Fredrick Twort首次发表了关于噬菌体的文章。1917年，Felix dHerelle将“能溶解琼脂平板上的细菌”命名为“噬菌体”,（三）噬菌体的发现,1935年，美国生化学家Wendell Meredith Stanley获得TMV的晶体，并于1946年因此获得诺贝尔奖。,免疫兔子制备出TMV抗血清-说明病毒的蛋白质本性。1937年，英国的Bawden和Pirie证明TMV的结晶含5%RNA和0.5%的磷，其它都是蛋白质，提示TMV是个核蛋白。1938年，W.J.Elford测定了各种病毒颗粒大
7、小。1939年，Kausche和Ruska用电镜照片，直观证实TMV是杆状颗粒。,至此，TMV是核蛋白而不是纯蛋白质，病毒是颗粒状而不是毒液的争论到此结束。,1952年，美国冷泉港卡内基遗传学实验室的Alfed Hershey和Martha Chase用35S和32P分别标记T2噬菌体的蛋白质和核酸试图追踪噬菌体吸附进入大肠杆菌细胞的机制，结果证明只有DNA进入就足以提供复制出100多个子代病毒所需的遗传信息。,同年，Wyatt和Cohen在T偶噬菌体和动物病毒中发现有寄主DNA所没有的新碱基羟甲基胞嘧啶，最终证明是病毒DNA编码羟甲基酶被合成的原因，可见病毒的遗传信息在寄主细胞内被表达成蛋白
8、质。1956年 根据病毒负染的电镜照片第一次提出病毒颗粒的外壳蛋白是由组分相同的蛋白质亚基做对称的二十面体或螺旋式的排列而成。,1955-1957年,美国的F.Raenkel Conrat和Singer与德国的Gierer和Schramm分别独立地证明纯化TMV-RNA有侵染性并决定TMV的遗传特性，证明DNA和RNA都是携带遗传信息的遗传物质。,近代病毒学（1960年至今）,病毒学与分子生物学病毒学与基因工程,利用噬菌体突变体的重组，以及基因缺失和置换突变的杂交，鉴定和定位噬菌体的基因，获得基因组的物理图谱。,噬菌体溶原性和裂解性生活史的发现和相互转换机制的研究，如阻抑蛋白cI的负调控和转录
9、因子N蛋白和Q蛋白的正调控、以及多基因间表达调控的相互协调、相互制约的复杂关系的研究,奠定了分子生物学操纵子学说的基础。,T4噬菌体是另一个利用突变体获得基因组物理图谱的实例。对其基因结构和功能的研究，尤其是对rA和rB两个顺反子的遗传分析导致移码突变，首次支持遗传密码是三联体密码的学说。,利用T4噬菌体溶菌酶基因所进行的移码突变结果直接证实了这一学说。,利用噬菌体为材料研究基因组DNA的复制机制及所需各种酶活性，促进了对原核生物遗传物质复制地了解。以病毒为材料，如SV40研究DNA与寄主组蛋白的作用，给E.coli基因组结构和哺乳动物染色体结构的了解以重要的启示。独特类型的病毒基因组，如ss
10、DNA,（+）RNA、（-）RNA先后在体外翻译体系中被转录，充分显示了生物遗传信息储存方式的多样性。,转录增强子元件、转录因子与启动子结合-SV40的研究RNA聚合酶与启动子识别并进行转录-腺病毒VA基因的研究基因在DNA基因组上的位置是不连续的，有内含子存在，转录体需要剪裁，拼接成mRNA-T4噬菌体和腺病毒的研究,mRNA3-端的聚腺苷酸化-痘病毒首次发现聚腺苷酸化信号-SV40mRNA5-端的帽子结构和碱基的甲基化作用-呼肠病毒翻译后的前体经蛋白酶加工裂解成为功能蛋白质，经高尔基体的糖基化以及被蛋白激酶磷酸化的研究-病毒,意义：1.揭示了病毒正链RNA基因组复制和基因表达的一种新类型。
11、2.对20世纪60年代所形成的中心法则理论的重要修饰和补充。3.反转录酶广泛应用于cDNA克隆的技术。,（一）反转录酶的发现,20世纪70年代 反转录酶的发现-RNA肿瘤病毒,20世纪70年代另一个病毒学研究中最有深远影响的发现。在对噬菌体与其寄主相互关系的研究中发现的。,(二）限制性内切酶的发现,1972年 P.Berg在斯坦福大学第一次体外构建重组DNA分子，即将噬菌体基因和E.Coli半乳糖基因插入SV40的环状DNA中。1973年 H.Boyer和S.Cohen用E.coli质粒pSCIOI(Tetr)上仅有一个EcoR切点的特点与另一个质粒R6-3(Neor)组合成嵌合质粒，转化E.coli后在含四环素和新霉素培养基上选出有Tetr和Neor的新转化子。,Paul Berg(1926-),(三）基因工程的诞生,CMV 立刻早期基因IE的启动子含有增强子、TATAbox、和转录起始位点,载体的一些必要元件如复制原点、启动子、转录增强子、翻译增强子等等大多来自病毒 多种病毒载体的广泛应用。,SV40的poly A,
