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1、一、实验目的,1.了解氨基移换作用的原理。2.熟悉纸层析法的基本原理。3.掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。,氨基移换作用（转氨基作用）,在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉-氨基生成相应的-酮酸，而另一种-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。,二、实验原理,人体内最重要的两种转氨酶：,谷丙转氨酶（GPT）/丙氨酸转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（GOT）/天冬氨酸转氨酶（AST）,正常人各组织中GPT及GOT 活性(单位/克湿组织),血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预后的指标之一。,谷氨酸 丙酮酸,-酮戊二酸 丙氨酸,2.层析,层析系统通常都有两个相组成：固定相和流动相。混合物在层析系统中的
2、分离决定于该混合物的组分在这两相中的分配情况，一般用分配系数来描述。,常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。,纸层析法,固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分,流动相：层析液水饱和酚,分离原理：,利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数差异而分离,谷氨酸：亲水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸,3.显色反应,茚三酮与-氨基酸反应生成紫红色化合物,相对迁移率Rf,三、实验步骤,1、酶液的制备2、氨基移换反应,3、层析,圆滤纸上标记,点样,制作滤纸芯,滤纸芯插入圆滤纸,组装层析装置,4、显色,把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器均匀喷洒0.5茚三酮溶液，再用吹风机吹干。,四、实验结果,计算各个色斑的Rf值,分析色斑的成分以及是否发生氨基移换反应,五、结果分析,
