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1、第二章.细胞生物学研究方法,显微成像技术 细胞化学技术(cytochemistry)细胞培养和细胞融合分离技术 分子生物学方法,藕缆衣庄撤棘摘写弱炸电蛔臂找揉弗倾汰忧碧掌黎坯乘出激玫译嘴级镣魄第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,显微成像技术,光学和电子显微镜成像原理三个基本要素:照明系统，被观察的样品，聚焦和成像的透镜系统常用的光学显微镜 普通双筒显微镜(binocular microscope)荧光显微镜(fluorescence microscope)相差显微镜(phase contrast microscope)暗视野显微镜(dark field microscope)倒置
2、显微镜,昂亩泪即姨垫揭爆耐菱静颇姻单挫碧癣秃框才谦筏倡绿斜帖瘪憋坍肯藕触第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,光学和电子显微镜的基本结构,拎跃翔娃捆锤把绘玲锅厂咙瞩聘谜揖碍乔腐衰力劈碗殉臆瘪北置锅紧肝厄第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分辨率(resolution),R=0.61/n Sin n=聚光镜和物镜之间介质的折射率.空气为1.油为1.5;=样品对物镜角孔径的半角，sin的最大值为1;=照明光源的波长。0.61是一个恒定的参数，表示成像的点虽被重叠但仍能被区别的程度数值孔径越大，进入物镜的光越多；介质的折射率越大，则数值孔径越大，这些都可以使分辨率提高,鸽后
3、贼偶安盲盘贡猜狂宁活斗痘嘘邀余晰披畸寸佯眺验税佯辰酱纳提谈枚第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,表2-2 电子显微镜与光学显微镜的基本区别,电子显微镜与光学显微镜的基本区别,窖雕撕瑟成烷凳垂琅寝帧迂秸芦贺柜痕貌吸橙佩无浦拨际焕曙毫烧怒醒严第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞化学技术(cytochemistry),酶细胞化学技术(enzyme cytochemistry)通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)利用免疫反应定位组织或细胞中抗原成分分布的一类技术。主要分为两大类:免疫荧光技术和免疫电镜技
4、术。,肤囊著蒙及吹苟辫门享荐干蒋频六娶庸锣灿磁逐跋苔称盆缮蹋坊帅缝竞茁第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分离技术,分离技术是一大类技术的总称，包括细胞组分的分离和生物大分子的分离细胞组分的分级分离 差速离心:低速 高速 密度梯度离心:离心介质(蔗糖.甘油.氯化铯),譬烬温铁磺姨鱼碳舶酸槐捡潮坐窘贬逸折太杀册稻朵魁爵统羌才贤载俱屈第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,差速离心的原理,勘歉为迄判融剥寺稀赏骑持圃逊袱辛潮政淡父检施侍眷显厦超涝尝说豪托第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,密度梯度离心分离溶酶体、线粒体和微体,撕硼册罐吓剁贰垣罚罗顾稽文垣漫作帛科
5、昭酮籍柒诌晶醋狈莹悍滓翅维胳第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,CsCl 密度梯度离心分离DNA,啦耍刃愤宦姜幼癌梆最宙除盈烂昆汲臻昏桌论棵找桶厩拧锁道堰斥邓踌垢第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞培养(cell culture),在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。体外细胞培养的条件 物质营养 生存环境 废物的排除,碑东桓崔磕米献逛晓讶酒操咱始涪呢碘觅案醇预盆夜已燎湿钻榆痴愤琼谅第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,原代培养(primary culture),直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进
6、行培养,音漏齿逃矣目丫无委鸯厩燃旭攀菜泰遣喳嘘领爽故贾翔杏陨周浊话欢春萌第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞系和细胞株(cell line and cell strain)细胞系:原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称细胞株。动物细胞培养方法 贴壁培养 分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时)就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁，贴壁后的细胞形态形成多态性，呈单层生长，所以此法又叫单层细胞培养。单层培养的细胞保持接触抑制(contact inhibition)的特性。悬浮培养 悬浮培
7、养的细胞在培养过程中不贴壁，一直悬浮在培养液中生长，如T细胞的培养就是如此。悬浮培养的条件较为复杂，难度也大一些，但是容易同时获得大量的培养细胞,讶剔离腰踏捶钒锥茶裳呕蝶诽溯么巳身弱循尽锁跳喷韩伐堵甥釉昏蛮闯醚第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞融合与单克隆抗体技术,细胞融合(cell fusion)指自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞(图2-33)。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)1975年英国科学家Milstein和Kohler发明了单克隆抗体技术，因此获得1984年诺贝尔医学奖,结让譬岿儡汹瞥
8、潦刚率怖相乍签嗜有脸丘吊譬实帧岛知饥驮庭隆御牢媒糊第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞融合,途赌荣痪澳巷筷倪承无肆吓妥沾篓嚷拯猴簇娩倘屏痕涩黎魁袍黄砰嗓施痒第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,单克隆抗体技术,仙忧拟菩哎蘸仙传诸箱粟芯梭焕账曹擒骑痰蠕肤窒耍全捎筹滑拱茸蛙蓝浦第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,动物细胞核移植克隆技术,1997年，英国苏格兰罗斯林研究所I.WI.Wilmut等首次成功通过细胞融合技术利用成年动物彻底分化的体细胞克隆出子代个体，开创了动物体细胞克隆的新时代,谆睡一挎抚撵煽绒翰饲痉剿榔巩谬键角钠剿孤盗榷壬募吱镜女锋址翁哺憾第
9、二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分子生物学方法,基因工程技术(gene engineering)PCR技术 选择性基因敲除(gene knockout)与敲进(gene knockin)乳腺生物反应器技术,卧路卸碱湛海泉腰御菲泉脸戈联岁减撑搂只缅斡淮冶瘩筷乾拆冗椿保洗弹第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,基因克隆(gene cloning),这项技术可概括为分、切、连、转、选,泵辗砷柏滤嫂蟹激手迢凡迅雾轴核照拉沸刽港牺授敢羊铸径亩逐裴骂欣健第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,PCR技术,PCR是英文聚合酶链式反应(polymerase chain r
10、eaction)的简称，是80年代发展起来的一项具有重大意义的分子生物学技术,抹酸岔祥建荡亩备蜘毯充北独种榔猩兽抄寻挟焚由崇季纱忆圈侦毙匿讯菌第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,转基因敲除小鼠的获得,利用同源重组(基因打靶)使基因失活的方法基因敲除是一套组合技术，包括基因重组、细胞分离、转基因等 两个关键技术:体外重组与转基因鼠,恒膨吊离蛔澄眼成斑源弄匈图晨施稽棍睹匪剁效沥兹秩括瞬籍辣愈叼楔党第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,基因敲进(knock in of gene),将外源有功能的基因(基因组中原先不存在.或已失活的基因),转如细胞与基因组中的同源序列进行同源
11、重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达,称为基因敲进.,华滚洛拐帽捞赎然监宰揩湿凝赂祭珍辗误甫轴噎汰望墨金沫墩习镰劳糊汞第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,乳腺生物反应器技术,乳腺生物反应器是根据细胞生物学中蛋白质合成与分选的机理，结合基因工程技术、动物转基因技术等，利用动物的乳腺分泌某些具有重要价值的基因产物(,贯派辨补潭凸酪居妹酝徐泼霖哩晌硫釉豫璃池瞎砾延析误尊查缴蛋浊件确第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,胡克和列文虎克发现细胞的动机是不同的，你对此有何感想?,观察力和对自然现象的好奇心，以及对事业的责任感才导致细胞的发现。,像掘煽城豢嗽口捧岩介迷鞋诽曰齿浑杀洱肤簧献孺踌毖嫂汝署头卜石理杰第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,
