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1、一、动物细胞融合,受精作用,生命活动中是否也存在细胞融合现象？,1.概念2.原理3.结果,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,：细胞膜的流动性。,产生杂交细胞，即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。,两个细胞正在融合,4.促进细胞融合方法,5.动物细胞融合过程,杂交细胞,6.意义7.用途,突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。,最重要的用途是制备单克隆抗体。,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,融合,组培,物理法,化学法,生物法：灭活的病毒,8.动物细胞融合与植物体细胞
2、杂交的比较,细胞膜的流动性、细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后，诱导原生质体融合,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散后，诱导细胞融合,物理法（离心、电刺激、振动等）、化学法（聚乙二醇等）,物理法（离心、电刺激、振动等）、化学法（聚乙二醇等）、生物法（灭活的病毒）,获取杂种植株,获得杂交细胞，以生产细胞产品,克服远缘杂交不亲和的障碍，扩展杂交亲本范围，培育新品种,制备单克隆抗体等,阅读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度
3、低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。（1）请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念（2）怎样才能大量生产单克隆抗体？,由单个B细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,（2）怎样才能大量生产单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时
4、具备呢？,方法：利用B淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,二、单克隆抗体1.概念,由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,单:单个细胞克隆:无性繁殖抗体:化学性质单一、特异性强,2.制备过程,能产生抗体,能无限增殖,融合的同种核细胞、融合的杂交细胞,第一次筛选,继承了双亲细胞的遗传物质，不仅能产生专一性的抗体，又能大量增殖,体内培养的优点：不需要特定的培养基，不需要严格的外界环境条件,第二
5、次筛选,（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合？（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗？（3）整个过程为何至少要经过两次筛选？,小鼠骨髓瘤细胞在体外培养条件下可大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体；细胞的同源性越近，融合形成的杂交细胞越易成活。,有无限增殖能力（丧失凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞。肿瘤细胞不等于癌细胞。,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体
6、。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。,（4）本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理。,3.单克隆抗体优点,具有特异性强、灵敏度高、可大量制备、纯度高等。,4.单克隆抗体的应用,作为诊断试剂 准确识别各种抗原物质，并跟抗原特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点，如早早孕。,用于治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症。可单独使用，也可与其他物质结合使用，如与放射性同位素、细胞毒素或化学药物结合制成“生物导弹”。在单抗上连接抗癌药物等，制成的“生物导弹”，能将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞，又不会伤害健康细胞，且
7、减少了用药剂量。,动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合1.概念2.原理3.过程4.意义二、单克隆抗体1.概念2.制备过程3.优点4.应用,小结,1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的 B杂交细胞的形成过程基本相同 C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的手段相同2.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产 生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞3.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞 A B C D 4.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段完全相同 C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂交细胞,A,巩固练习,C,D,5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案：,制备单克隆抗体,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,体外培养,足够数量的细胞群,注射到小鼠腹腔,A,C,B,
