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1、基因工程的基本工具湖南省欧阳遇实验中学刘永花考纲解读掌握基因工程的原理、基本工具及操作步骤基因工程（DNA重组技术）所用的工具有限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体。一、限制性核酸内切酶简称限制酶。用来切割DNA分子，获取目的基因。限制酶主要存在于微生物（细菌、霉菌等）中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割 DNA分子。（切开特定部位的两个脱氧核苷酸间的磷酸二酯键），形成黏性末端或平末端。注意一定要用同一种限制酶切割目的基因与运载体，才能得到相同的黏性末端。例.下列关于限制酶的说法不正确的是（）A.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B.限制酶可用于提取目的基因
2、C.不同的限制酶切割的DNA的切点不同D.限制酶只存在于微生物中解析：限制酶大多数来源于原核生物，可用来切割DNA分子，获取目的基因。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列并在特定的位点进行切割即不同的限制酶切割的DNA的切点不同。答案：D变式下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是（）A 一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸B 限制性核酸内切酶的活性受温度影响C 限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD 限制性核酸内切酶能从原核生物中提取解析：一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸（序列），酶的活性受温度影响，由于酶有专一性，所以限制性核酸内切酶只能识别和切割DN
3、A，限制性核酸内切酶主要来源于原核生物，能从原核生物中提取。答案：C二、DNA连接酶DNA连接酶有EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶，用来“缝合”互补的DNA片段即连接被被限制酶切割的两核苷酸之间的磷酸二酯键。来源于大肠杆菌的EcoliDNA连接酶只能连接黏性末端，而来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶既能连接平末端又能连接黏性末端。附：DNA连接酶与DNA聚合酶的区别： DNA连接酶是连接被限制酶切割的具有相同黏性末端的两个DNA片段即连接两个DNA片段之间的磷酸二脂键，在基因工程中起作用，不需要模板。DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3末端的羟基上，形成磷酸二酯键；在DNA
4、复制中起作用，需要模板链。例.下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是（）A 将单个核苷酸加到某DNA片段，形成磷酸二酯键B 将断开的两个DNA片段的骨架，连接起来重新形成磷酸二酯键C 连接两条DNA链上碱基之间的氢键D 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，而不能将双链DNA片段末端之间进行连接解析：将单个核苷酸加到某DNA片段的是DNA聚合酶，将断开的两个DNA片段的骨架连接起来的是DNA连接酶。DNA连接酶既能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，也能将双链DNA片段末端之间进行连接。答案：B三、载体（运载体）将外源基因达入受体细胞需要运载体，运载体必须具备以下条件：有1至多
5、个限制酶切点 (2)导入基因能在受体细胞中复制、表达 (3)有某些标记基因，便于筛选 (4)对受体细胞无害。 (5)载体大小适当。常用的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒等。其中最常用的运载体是质粒。质粒是细菌或酵母菌细胞中一种很小的独立于拟核之外裸露的环状DNA分子。如右图所示：例3.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA解析：作为运载体须有1至多个限制酶切点、能在受体细胞中复制并表达、具有某些标记基因，便于筛选答案：D例有关基因工程的叙述中，正确的是（ A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的载体 C、载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与目的基因连接 D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键解析：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，质粒是基因工程中最常用的载体，DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成磷酸二酯键答案：C
