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1、一、动物细胞融合（细胞杂交）,将两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。诱导动物细胞融合的方法：聚乙二醇、灭火的病毒（仙台病毒）、电激意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交称为可能。,用灭活病毒诱导动物细胞融合过程的示意图,二、单克隆抗体,（单个细胞增殖而形成的细胞克隆只产生完全均一的单一特异性抗体）化学性质单一、特异性强的抗体每个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体1975年，英国 米尔斯坦 和 德国 柯勒,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,杂交细胞,PEG灭活的仙台病毒,选择性培养基杂交瘤细胞增殖未融合细胞死亡,1.单克隆抗体的制备,将不
2、同种杂交细胞分开，并克隆专一抗体，检测阳性细胞,选择性培养基杂交瘤细胞增殖未融合细胞死亡,PEG灭活的仙台病毒,筛选产生特异抗体的细胞群,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至
3、确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单克隆抗体。但此方法产量低体内实体瘤法对数生长期的杂交瘤细胞接种于小鼠背部皮下，每处注射0.2 ml,共24点。待肿瘤达到一定大小后(一般1020天)则可采血，从血清中获得单克隆抗体含量可达到1-10mgml。但采血量有限。体内腹水的制备腹腔注射1106个杂交瘤细胞，接种细胞710天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，一般一只小鼠可获110ml腹水。也可用注射器抽取腹水，可反复收集数次。腹水中
4、单克隆抗体含量可达5-20mg/ml，这是目前最常用的方法，还可将腹水中细胞冻存起来，复苏后转种小鼠腹腔则产生腹水快、量多。,腹水（ascites）,腹腔中的渗与液（含有炎症细胞）。在实验性动物腹腔中生长的骨髓瘤或杂交瘤可形成腹水，腹水中含有高水平的骨髓瘤蛋白或特异性抗体。临床上腹水由肿瘤种植于腹膜、门静脉梗阻（如肝硬化）或低蛋白血症（如营养不良）所致。,2.单克隆抗体的应用,优点：特异性强、灵敏度高，并可能大量制备应用：作为诊断试剂（准确识别抗原）用于治疗疾病和运载药物生物导弹,生物导弹,追踪肿瘤而又能专一性地杀伤肿瘤的“武器”弹体（通常为单克隆抗体）和弹头（通常为抗癌药或毒素等）组合而成。进入人体后，“生物导弹”在抗体指引下能自动搜索到肿瘤所在部位，然后用弹头击中癌细胞。,新的“生物导弹”,单克隆抗体免疫毒素原理是以结肠、胃、肺与胰腺等组织的癌细胞表面的碳水化合协“表位”（抗原决定簇）为目标，开发出针对这一表位的专用抗体，然后再与天然毒素“美登素”结合而成为新型抗癌“生物导弹”。体外试验证实：即使肿瘤细胞表面的抗原数量极少（仅20%或30%），新型“生物导弹”仍能精确击中癌细胞，而不会伤害正常细胞。,
