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1、目 录一、G6PD与G6PD缺乏症二、G6PD的发病机制三、G6PD的流行病学与遗传规律四、G6PD临床生物化学检测五、华南常见G6PD试剂盒的概况 六、美康G6PD调试经验七、案例分享,一、G6PD与G6PD缺乏症,1、什么是G6PD？G6PD是葡萄糖6磷酸脱氢酶的简称，是一种存在于人体红细胞内，协助葡萄糖进行新陈代谢的一种重要的酶类，在这代谢过程中会产生NADPH（还原型辅酶）的物质能以保护红细胞免受氧化物质的威胁。G6PD缺乏时，若身体接触到具氧化性的特定物质或服用了这类药物，红血球就容易被破坏而发生急性溶血反应。G6PD 对于磷酸戊糖旁路至关重要，而该途径可为髓鞘脂酸形成提供 NADP
2、H。2、什么是G6PD缺乏症？G6PD缺乏症是由G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞因为缺乏NADPH而不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血的一种遗传病。常因食用蚕豆而发病，俗称“蚕豆病”。,二、G6PD的发病机制,葡萄糖的代谢途径，主要是糖酵解进入三羧酸循环，产生ATP，次要途径是磷酸戊糖途经，产生NADPH和磷酸核糖。,二、G6PD的发病机制,磷酸戊糖途经,磷酸戊糖途经,G6PD,G6P 6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH,G6PD,谷胱甘肽还原型+氧化性物质 谷胱甘肽氧化型,NADPH,在红细胞内，谷胱甘肽还原型可以抵抗氧化性的物质，在维持红细胞的细胞膜稳定方面起到重要作用，如
3、果G6PD缺乏导致NADPH不足，谷胱甘肽的作用降低，从而使红细胞模受损，在一定条件下容易产生红细溶血，引起一些不良症状。,三、G6PD的流行病学与遗传规律,1、G6PD流行病学 据估计,全球约有4亿人受累,我国华南及西南各省较常见,主要分布在热带和亚热带,我国的南方地区是高发区,尤其是广西、广东、云南、福建等省,北方地区较少见。我国各地发生率报道不一,上海为0.78%、长沙0.90%、南昌为1.20%、南宁为7.20%、昆明为2.50%。此病广东地区平均发病率为5%10%,广州市为3.70%、东莞3.20%、深圳2.30%,中山发生率4.20%。,2、G6PD的遗传规律G6PD缺乏程度与性别
4、的关系，G6PD缺乏是伴X不完全显性遗传,基因位于X染色体上。缺失：男性只有一条X染色体,一旦这唯一的染色体缺失G6PD基因,则表现为G6PD重度缺乏,而女性有两条X染色体,如果仅有1条X染色体缺失G6PD基因,则为杂合子,表现为中度缺乏,只有两条X染色体均缺G6PD基因才表现为重度缺乏。基因突变：不同的基因突变类型，可以导致G6PD结构不一样，酶活性有差异，即使G6PD基因没有缺失，也有可能存在不同程度缺乏。,四、G6PD临床生物化学检测,1、G6PD检测的临床意义,红细胞G6PD 催化反应生成的NADPH 是谷胱甘肽还原酶的辅酶，还原型谷胱甘肽(GSH)是保持血红蛋白稳定性及红细胞膜完整性
5、的必要条件。红细胞G6PD 缺乏者，在服用某些药物(如抗在药、酬类药、伯氨哇附中、磺胶等)及食用蚕豆后，代谢产生的氧自由基，或与氧合血红蛋白作用形成的H2O2使GSH 氧化成的琉基失去GSH 的保护，被氧化变性形成Heinz 小体。红细胞膜失去疏基保护而功能受损，导致溶血。所以检测患者G6PD，可以对多种溶血性病进行早期诊断和早期预防。,适用人群：新生儿及其父母：可以早期筛查新生儿是否缺乏G6PD，了解家庭遗传方式。婚检：分析后代可能缺乏G6PD的概率。溶血性疾病患者：鉴别和分析溶血性病类型和原因，有利于临床采取适当治疗措施和药物治疗。,2、G6PD的检测方法 2.1 比色法（生化仪）G6PD
6、 活性校正值测定原理：红细胞G6PD 催化G6P 生成6-磷酸葡萄糖内脂，后者很快氧化成6-磷酸萄糖酸(6-PGA)，同时NADP 被还原成NADPH。在340 nm 处监视NADPH 吸光度的升高，计算酶的活性。红细胞中还含有6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)，催化6-PGA 脱羧，生成核酮体糖-5-磷酸，同时使辅酶NADP 还原成NADPH。在本测定系统中，由6-PGA和G6 P 组成的底物系统，测得的酶活性，减去单独以6-PGA 为底物时测得的酶活性，代表真正G-6-PD 的活性。本法测定包含如下2 个反应式:（1）G6P+NADP+6PGA+NADPH+H+(2)6PGA+NADP+R
7、-5-P+NADPH+H+CO2,G6PD,6-PGD,血红蛋白测定氰化高铁血红蛋白测定法原理：血液在Hb转化液中溶血后，除SHb外各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁Hb再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁Hb。HiCN最大波峰在540nm,最小吸收峰为504nm。特定标准条件下，毫摩尔消光系数为44Lmmol1cm。因此，根据标本的吸光度，即可测定Hb浓度。HiCN 试剂:氰化钾(KCN)高铁氰化钾无水磷酸二氢钾特别提醒：该法是测定血红蛋白的标准方法，但是试剂中含有氰化钾剧毒物，操作时必须小心。实验后的废液也要小心处理。,G6PD活力计算：G6PD=(G6PD+6PGD)6PGD(U/L)
8、G-6-PD,U/g Hb=G6PD/Hb意义：每克血红蛋白中G6PD的活性参考值：健康成年人，红细胞G6PD 活性(己校正6-PGD)8.341.59 U/g Hb 红细胞活6PGD性为6.8-12.0U/g Hb注意一：NADPH比值法或G6PD/6GPD法，在上面基础上不采用两个指标相减，而是相除，原理是6GPD尚未报道在G6PD患者和正常人之间有差异，通过比值法筛查，一定程度上可以确认女性杂合子，也就是G6PD基因缺陷携带者。此法受到一些试剂厂家和医院青睐。,G6PD 活性直接测定法 G6PD 活性校正值测定虽然能提供G6PD 活性真值和6GPD的活性，但在溶血性疾病的检查中尚未发现红
9、细胞6PGD活性正常而掩盖G6PD活性缺乏的现象。因此，就临床使用而言，G6PD活性的的简易测定法己能满足临床。原理：G6P+NADP+6PGA+NADPH+H+在波长340 nm 处监测NADPH 的吸光度增高，计算G6PD活性。活性计算：G-6-PD,U/g Hb=G6PD/Hb参考值：健康成年人，红细胞G6PD 活性为8-18 U/g Hb。注意：医院可以根据需要决定是否需要6PGD校正。,G6PD,其他方法：2.2高铁血红蛋白还原试验:2.3免疫斑点杂交法：G6PD活性测定注意事项：1、Mg2+是G6PD的激活剂，铜离子和锌离子有轻度抑制作用，汞离子和对氯汞苯甲酸有完全抑制作用，因此日
10、常使用中尽量避免抑制剂的污染。2、避免样本溶血，样本溶血后G6PD活性不稳定，影响其活性测定。溶血后活性降低很快，25min内需要及时测定。,五、华南常见G6PD试剂盒概况,目前，市场常见的生化仪比色试剂盒分为两种方法，一是G6PD直接测定法（速率法），直接测量G6PD活性，二是NADPH比值法，测定G6PD/6PGD。有的试剂盒提供血红蛋白测定试剂，多数没有提供血红蛋白测试试剂。G6PD直接测定法的厂家有：宁波美康、北京利德曼、上海执成、长春汇力、广州科方 参考值：成人1300-3600U/L 儿童1700-4000U/L NADPH比值法的厂家有：广州科方、广州米基 参考值：成人G6PD/
11、6PGD 1.0-2.3（0.95-1.05为可疑，建议复查）新生儿（脐带血、静脉血）1.1-2.5（1.05-2.05为可疑，建议复查）,不同厂家试剂盒比较,1、底物方面：长春汇力说明书反应底物为G6PDNa2外，其它厂家为G6P，但是实际上两者是同一物质的不同叫法。2、样本类型：宁波美康、上海执成、北京利德曼采用压积红细胞，长春汇力、广州科方、广州米基可以采用全血、脐带血，长春汇力还可以采用末梢血。3、参考值方面：G6PD直接测定法一般为成人1300-3600U/L 儿童1700-4000U/L NADPH比值法成人G6PD/6PGD 1.0-2.3（0.95-1.05为可疑，建议复查）新
12、生儿（脐带血、静脉血）1.1-2.5（1.05-2.05为可疑，建议复查）,长春汇力与以上有所区别，具体如下：全血G6PD:638-1980U/L 4.2-14.5U/gHb脐带血或末梢血G6PD：832-2460U/L 4.9-14.5U/gHb血清G6PD：0-5U/L北京利德曼对参考值也规定的比较细:EDTA抗凝血：1300U/L以上正常，600-1300U/L可疑，需要血红蛋白校正。肝素抗凝血：1100U/L以上正常，500-1100U/L可疑，需要血红蛋白校正。每克血红蛋白中G6PD活性：3.8U/gHb4、G6PD活性校正：G6PD活性测定与血红蛋白含量和红细胞老幼有关，因此正确的
13、做法是与血红蛋白求比值来校正，长春汇力提供血红蛋白试剂校正，其他均无此试剂。由于血红蛋白测定有剧毒试剂以及占用通道和试剂，一般都不测定。G6PD/6PGD在筛查基因突变杂合子方面比较有优势，其他厂家没有5、美康G6PD测定副波长为660nm，其他为405nm。,六、美康G6PD调试经验,1、参数按照说明书，定标方式有因子法，两点定标。试剂盒自带定标液，配有两个水平质控。定标液定出K因子为230000左右，与理论因子209084偏高10%，两种方法做两个水平质控都比较好。2、个别标本出负数。解决方案：有案例表明把副波长改成405可以解决负数问题。,七、案例分享,案例：本人堂哥的儿子四岁，出生检测G6PD属于缺乏患者，其父母检测均正常，今年曾经得过严重小儿肺炎，经合理治疗好转。分析：因为小孩是G6PD缺乏症患者，母亲和父亲正常，遗传规律如下生男孩得病概率1/2，女儿1/2是携带者。看病时，向医生说明小孩是G6PD缺乏者，医生使用药物时避免开了一些不良药物。,
